人教版教學(xué)課件土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

1、1專題專題2 2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用2 研究培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用，進(jìn)行微研究培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用，進(jìn)行微生物數(shù)量的測(cè)定。生物數(shù)量的測(cè)定。 土壤中能分解尿素的細(xì)菌土壤中能分解尿素的細(xì)菌（1）從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌）從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌（2）統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這）統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這 樣的細(xì)菌樣的細(xì)菌3（一）篩選菌株（一）篩選菌株原理：原理：有選擇作用，45常用方法常用方法：稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法，：稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法， 還可以用過(guò)濾膜法還可以用過(guò)濾膜法：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表：當(dāng)樣品的稀釋度

2、足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表 面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋 液中的一個(gè)活菌，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的液中的一個(gè)活菌，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的 菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有 多少活菌。多少活菌。6為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在3030030300的平板進(jìn)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，行計(jì)數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)需重新實(shí)驗(yàn)。 ：設(shè)置重復(fù)組，目的是增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。將待測(cè)樣設(shè)置重復(fù)組，目的是增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。將待測(cè)樣品經(jīng)一系列品經(jīng)

3、一系列1010倍稀釋，然后選擇三個(gè)稀釋度的菌液，分別取倍稀釋，然后選擇三個(gè)稀釋度的菌液，分別取0.1ml0.1ml接種到已制備好的平板上，然后用無(wú)菌涂布器將菌液涂接種到已制備好的平板上，然后用無(wú)菌涂布器將菌液涂布在整個(gè)平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)計(jì)數(shù)菌落數(shù)。為是布在整個(gè)平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)計(jì)數(shù)菌落數(shù)。為是結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度菌液加到三個(gè)或三個(gè)以上的結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度菌液加到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上，經(jīng)涂布培養(yǎng)，計(jì)算出菌落平均數(shù)平板上，經(jīng)涂布培養(yǎng)，計(jì)算出菌落平均數(shù)72、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（1）原理：此法利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中

4、微生物數(shù)量。（2）方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)板是特制的載玻片，其上有特定的面積為1mm2，高為0.1mm的計(jì)數(shù)室，一個(gè)計(jì)數(shù)室又被分成25個(gè)（或16個(gè)）中格，每個(gè)中格再被分成16個(gè)（或25個(gè)）小格，每個(gè)計(jì)數(shù)室都由400個(gè)小格組成。（3）操作：將稀釋的樣品滴在計(jì)數(shù)板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計(jì)數(shù)45個(gè)中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個(gè)小格所含的細(xì)菌數(shù)，再按計(jì)數(shù)公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。（4）計(jì)算公式每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)=每小格平均細(xì)菌數(shù)X400X10000X稀釋倍數(shù)（5）缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。83過(guò)濾膜法以測(cè)定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例。將已知體積的水過(guò)濾后，將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)液基上培養(yǎng)

5、。在該培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色?？梢愿鶕?jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。9 1. 1.想一想，如何從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出想一想，如何從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)？每克樣品中的菌落數(shù)？答：統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，答：統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)最好能統(tǒng)計(jì)3 3個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進(jìn)行計(jì)算。均值，然后按課本旁欄的公式進(jìn)行計(jì)算。10A A同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同，可能同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同，可能的解釋有兩種。的解釋有兩種。一是由于土樣不同一是由于土樣不同；二是由于培養(yǎng)基污染或

6、操作失誤二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。 （三）設(shè)置對(duì)照（三）設(shè)置對(duì)照究竟是哪個(gè)原因，可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)證明。究竟是哪個(gè)原因，可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)證明。11另一種方案另一種方案：將將A A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。通過(guò)這個(gè)事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)否受到污染。通過(guò)這個(gè)事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說(shuō)服力，對(duì)照的設(shè)置是必不可少的。果要有說(shuō)服力，對(duì)照的設(shè)置是必不可少的。實(shí)驗(yàn)方案有兩種實(shí)驗(yàn)方案有兩種一種方案一種方案：可以由其他同學(xué)用與可以由其他同學(xué)用與A A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與A A同學(xué)一致，則證明同學(xué)一致，則證明A A無(wú)無(wú)誤；如果結(jié)果不同，則證明誤；如果結(jié)果不同，則證明A A同學(xué)存在操作失同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問(wèn)題。誤或培養(yǎng)基的配制有問(wèn)題。12四、實(shí)驗(yàn)案例四、實(shí)驗(yàn)案例 實(shí)驗(yàn)的具體操作步驟如下實(shí)驗(yàn)的具體操作步驟如下: : 1.1.土壤取樣土壤取樣 從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中取樣。先鏟去從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中