殘留溶劑測定的要求和測定方法

1、藥品中殘留溶劑分析的技術(shù)要求和測定方法王 玉江蘇省藥品檢驗(yàn)所技術(shù)要求技術(shù)要求 ICH(人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會)已經(jīng)通過已經(jīng)通過了控制藥品中殘留溶劑的指導(dǎo)原則，將藥品生產(chǎn)了控制藥品中殘留溶劑的指導(dǎo)原則，將藥品生產(chǎn)中常用的中常用的69種有機(jī)溶劑按照對人體和環(huán)境的危害種有機(jī)溶劑按照對人體和環(huán)境的危害程度分為四類，并規(guī)定了每種溶劑的限值。程度分為四類，并規(guī)定了每種溶劑的限值。 歐洲藥典歐洲藥典第第5版、版、日本藥局方日本藥局方第第14版、版、美國藥典美國藥典第第28版和版和中國藥典中國藥典2005版均已版均已接受了接受了ICH關(guān)于殘留溶劑的指導(dǎo)原則。關(guān)于殘留溶劑的

2、指導(dǎo)原則。 Why do we need to determine Organic solvent residue? ICH的要求和各國藥典要求 安全性 臨床數(shù)據(jù) 藥理、毒理實(shí)驗(yàn)2005年版規(guī)定 除各品種正文中另有規(guī)定外，限度如下： 有機(jī)溶劑 限度， 苯 0.01 氯仿 0.005 二氧六環(huán) 0.01 二氯甲烷 0.01 吡啶 0.01 甲苯 0.01 環(huán)氧乙烷 0.001中國藥典2010版的要求 修訂殘留有機(jī)溶劑的檢測方法 參照ICH已協(xié)調(diào)的規(guī)范進(jìn)一步修訂和完善，并簡化方法 進(jìn)一步推進(jìn)在品種中的應(yīng)用。 原有方法簡介 GC法-填充柱法 樣品制備方法 溶液法 頂空法有機(jī)溶劑殘留量測定法 CHP0

3、5版之一 檢查藥物在生產(chǎn)過程中引入的有害有機(jī)溶劑殘留量，包括苯、氯仿、1,4-二氧六環(huán)、二氯甲烷、吡啶、甲苯及環(huán)氧乙烷。如有其他需要檢查的有害有機(jī)溶劑，則應(yīng)在各品種項(xiàng)下另作規(guī)定。GC條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) CHP05版之二 以直徑為0.250.18mm的二乙烯苯乙基乙烯苯型高分子多孔小球作為固定相，柱溫為80170；并符合下列要求：(1) 用待測物的色譜峰計(jì)算的理論板數(shù)應(yīng)大于1000；(2) 以內(nèi)標(biāo)法測定時，內(nèi)標(biāo)物與待測物的兩個色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5；(3) 以內(nèi)標(biāo)法測定時，每個標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣5次，所得待測物與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于5；若以外標(biāo)法測定,所得待測物峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)

4、偏差不大于10。標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品液的制備 CHP05版之三 精密稱取各藥品項(xiàng)下規(guī)定的有機(jī)溶劑和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)適量，分別加入無有機(jī)物的水溶解并配制成濃度為10.0g/ml的標(biāo)準(zhǔn)及內(nèi)標(biāo)貯備液。精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)及內(nèi)標(biāo)貯備液各0.11ml，加無有機(jī)物的水稀釋至10.0ml，混勻，即得。用外標(biāo)法測定時只量取標(biāo)準(zhǔn)貯備液稀釋。精密稱取供試品0.11g,加無有機(jī)物的水或合適的無有機(jī)物的水溶液使溶解，并稀釋至10.0ml，混勻，即得。測定法 CHP05版之四 第一法（溶液直接進(jìn)樣法）取標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣3次，每次2l，測得相應(yīng)的峰面積,以內(nèi)標(biāo)法測定時，計(jì)算待測物峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比，供試品溶液所得

5、的峰面積比的平均值不得大于由標(biāo)準(zhǔn)溶液所得的峰面積比的平均值。以外標(biāo)法測定時，供試品溶液所得的待測物峰的平均面積不得大于由標(biāo)準(zhǔn)溶液所得的待測物峰的平均面積。 第二法（頂空進(jìn)樣法）精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液各35ml，分別置于容積為8ml的頂空取樣瓶中,瓶外徑17mm，長60mm，帶螺扣具孔蓋。瓶口帶隔膜墊，與頂部空氣接觸的隔膜墊上應(yīng)有聚四氟乙烯膜使與橡膠墊隔開，各瓶在60的水浴中加熱4080分鐘，用在同一水浴中的空試管中加熱的注射器抽取頂空氣適量(通常為1ml)，進(jìn)樣，重復(fù)進(jìn)樣3次，按第一法中所述方法測定、計(jì)算與處理。頂空毛細(xì)管氣相色譜法頂空毛細(xì)管氣相色譜法 建立了測定藥品中殘留溶劑的知識庫；

6、建立了測定藥品中殘留溶劑的知識庫； 實(shí)現(xiàn)了計(jì)算機(jī)輔助計(jì)算，優(yōu)化殘留溶劑測實(shí)現(xiàn)了計(jì)算機(jī)輔助計(jì)算，優(yōu)化殘留溶劑測定的色譜條件；定的色譜條件； 對藥品中殘留溶劑測定中的影響因素進(jìn)行對藥品中殘留溶劑測定中的影響因素進(jìn)行了考察。了考察。 (1) 內(nèi)標(biāo)物的選擇二氧六環(huán)與吡啶可以互為內(nèi)標(biāo)，苯與甲苯可以互為內(nèi)標(biāo)，氯仿的內(nèi)標(biāo)物為1，2-二氯乙烷。(2) 溫度選擇測定二氧六環(huán)、吡啶、苯、甲苯時柱溫為170,測定氯仿、二氯甲烷時柱溫為140,測定環(huán)氧乙烷時柱溫為80。進(jìn)樣口及檢測器溫度應(yīng)高出柱溫30。(3) 測定方法從方法的精密度考慮，二氧六環(huán)、吡啶宜用第一法；苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷可以用第一法或第二法;環(huán)氧乙烷

7、直接用第二法;其中在用第二法測定苯、甲苯時，在水浴中加熱時間為30分鐘，測定環(huán)氧乙烷時在水浴中加熱時間為5分鐘。如果用第一法時，樣品本身會給色譜系統(tǒng)帶來干擾或嚴(yán)重污染，則宜采用第二法。(4) 供試品取用量決定于其溶解度，如供試品在水中難溶，可以改用酸、堿溶液溶解。標(biāo)準(zhǔn)貯備液的取用量取決于供試品取用量及殘留有機(jī)溶劑的限度。藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)殘留溶劑檢查方法藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)殘留溶劑檢查方法 建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)殘留溶劑檢查方法不同建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)殘留溶劑檢查方法不同于對樣品中的殘留溶劑進(jìn)行檢測。后者只于對樣品中的殘留溶劑進(jìn)行檢測。后者只要檢測出樣品中實(shí)際存在的殘留溶劑即可，要檢測出樣品中實(shí)際存在的殘留溶劑即可，

8、但前者應(yīng)適用于對所用企業(yè)、不同時期的但前者應(yīng)適用于對所用企業(yè)、不同時期的同品種產(chǎn)品的測定。同品種產(chǎn)品的測定。 統(tǒng)一殘留溶劑檢測方法的難點(diǎn)統(tǒng)一殘留溶劑檢測方法的難點(diǎn) 殘留溶劑在具體的樣品中具有不確定性：殘留溶劑在具體的樣品中具有不確定性：不同的生產(chǎn)企業(yè)可以采用不同的生產(chǎn)工藝不同的生產(chǎn)企業(yè)可以采用不同的生產(chǎn)工藝生產(chǎn)相同藥品，導(dǎo)致相同藥品所含有的殘生產(chǎn)相同藥品，導(dǎo)致相同藥品所含有的殘留溶劑種類可能不同。留溶劑種類可能不同。 目前技術(shù)的不足之處 不同的樣品，樣品處理方式不同，不同樣品基質(zhì)效應(yīng)的不同； 不同樣品含有的溶劑不同，測定對象不同； 頂空與非頂空方法的差異；加替沙星殘留溶劑的控制加替沙星殘留溶劑

9、的控制廠家批號申報(bào)工藝中涉及的溶劑企標(biāo)控制溶劑實(shí)際檢出A A050101050102050103乙醇、甲醇、乙醇、甲醇、DMSODMSO、甲、甲苯、乙酸乙酯、四氯苯、乙酸乙酯、四氯化碳、化碳、DMFDMFDMFDMF乙醇乙醇B B051260105124010512201乙醇、甲苯、乙腈、四乙醇、甲苯、乙腈、四氯化碳、氯化碳、DMFDMF無無乙醇乙醇C C050303乙醇、乙酸、乙醇、乙酸、DMSODMSO、DMFDMFDMFDMF乙醇、甲苯乙醇、甲苯D D300407013004070230040703乙醇、甲醇、乙醇、甲醇、DMSODMSO、甲、甲苯、乙酸乙酯、二氯苯、乙酸乙酯、二氯甲烷、

10、甲烷、DMFDMF、乙酸、乙酸、氯仿氯仿甲醇、氯仿、甲甲醇、氯仿、甲苯苯無無E E041101041102041103無無甲醇、乙醇、環(huán)甲醇、乙醇、環(huán)己烷、己烷、DMFDMF、DMSODMSO乙醇、乙醚乙醇、乙醚鹽酸頭孢他美酯殘留溶劑的控制鹽酸頭孢他美酯殘留溶劑的控制廠家廠家申報(bào)生產(chǎn)工藝中涉及的溶劑申報(bào)生產(chǎn)工藝中涉及的溶劑實(shí)際檢出的殘留溶劑實(shí)際檢出的殘留溶劑A甲苯、二氯甲烷甲苯、二氯甲烷異丙醇異丙醇B甲苯、二氯甲烷甲苯、二氯甲烷異丙醇、石油醚異丙醇、石油醚C乙醇、丙酮乙醇、丙酮異丙醇異丙醇D乙酸乙酯乙酸乙酯異丙醇異丙醇E二氯甲烷、乙醇、丙酮、乙酸乙酯二氯甲烷、乙醇、丙酮、乙酸乙酯異丙醇、石油醚

11、異丙醇、石油醚F二氯甲烷二氯甲烷異丙醇、石油醚異丙醇、石油醚G異丙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲異丙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲醇醇異丙醇異丙醇?xì)埩羧軇y定一般程序殘留溶劑測定一般程序 確定藥品涉及的殘留溶劑種類 建立殘留溶劑檢測方法建立殘留溶劑檢測方法 殘留溶劑檢測方法的驗(yàn)證 一、確定藥品中涉及的殘留溶劑種一、確定藥品中涉及的殘留溶劑種類類利用利用“藥品殘留溶劑測定知識庫藥品殘留溶劑測定知識庫”確定樣確定樣品中實(shí)際存在的殘留溶劑品中實(shí)際存在的殘留溶劑 在等溫色譜系統(tǒng)中進(jìn)一步判斷產(chǎn)品中可能在等溫色譜系統(tǒng)中進(jìn)一步判斷產(chǎn)品中可能使用過的其它溶劑及其它可能存在的干擾使用過的其它溶劑及其它可能存在的干擾 結(jié)

12、合企業(yè)提供的工藝信息確定藥品質(zhì)量標(biāo)結(jié)合企業(yè)提供的工藝信息確定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)控制的殘留溶劑準(zhǔn)中應(yīng)控制的殘留溶劑 1. 利用利用“藥品殘留溶劑測定知識庫藥品殘留溶劑測定知識庫”確定樣確定樣品中實(shí)際存在的殘留溶劑品中實(shí)際存在的殘留溶劑（1）初篩：）初篩：供試品溶液濃度為0.1g.ml-1；分別使用非極性的SPB1和極性的HPFFAP毛細(xì)管柱，按照知識庫中各自的程序升溫條件，用頂空氣相色譜法分別測定藥品中揮發(fā)性組分的保留時間，以丁酮為參比溶劑，計(jì)算各揮發(fā)性組分色譜峰相對于丁酮色譜峰的相對保留時間（RRT）。 供試品溶液的制備供試品溶液的制備 取約取約0.2g0.2g供試品，制成每供試品，制成每1ml

13、1ml約含約含10mg10mg的溶液；對水溶性藥品，采用水為溶劑；的溶液；對水溶性藥品，采用水為溶劑；當(dāng)藥品不溶于水，但可溶解于一定濃度的當(dāng)藥品不溶于水，但可溶解于一定濃度的酸或堿液中時，可采用酸或堿液作為溶劑；酸或堿液中時，可采用酸或堿液作為溶劑；對于非水溶性藥物，可采用對于非水溶性藥物，可采用N,N-N,N-二甲基甲二甲基甲酰胺（酰胺（DMFDMF）等為溶劑。）等為溶劑。 毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣色譜系統(tǒng)毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣色譜系統(tǒng)程序升溫法程序升溫法 非極性色譜柱（非極性色譜柱（SPB-1SPB-1）系統(tǒng)）系統(tǒng)色譜條件色譜條件 柱溫先在柱溫先在3030維持維持7min,7min,再以再以8/min8

14、/min的速度升至的速度升至120,120,維持維持15min15min；以；以氮?dú)鉃檩d氣，流速為氮?dú)鉃檩d氣，流速為2.0ml/min,2.0ml/min,分流比分流比1:1 1:1 ；頂空瓶溫度為；頂空瓶溫度為70,70,頂空時間頂空時間303060min60min；進(jìn)樣口溫度為；進(jìn)樣口溫度為200200；采用；采用FIDFID檢測檢測器，溫度為器，溫度為250250。極性色譜柱（極性色譜柱（HP-FFAP)HP-FFAP)系統(tǒng)系統(tǒng)色譜條件：柱溫先在色譜條件：柱溫先在6060維持維持6min6min；再以；再以8/min8/min的速度升溫速率升至的速度升溫速率升至100100，維持，維持2

15、0 min20 min；以氮?dú)鉃檩d氣，流速為；以氮?dú)鉃檩d氣，流速為2.0ml/min,2.0ml/min,分流比分流比1:11:1；頂空瓶溫度為；頂空瓶溫度為70,70,頂空時間頂空時間303060min60min；進(jìn)樣口溫度為；進(jìn)樣口溫度為200200；采用；采用FIDFID檢測器，溫度為檢測器，溫度為250250。初步判定初步判定：將兩個色譜柱系統(tǒng)下得到的RRT與知識庫中諸有機(jī)溶劑的RRT參考值進(jìn)行比較，選擇出數(shù)值相近（相對誤差小于5）者；而在兩個色譜柱系統(tǒng)中均出現(xiàn)的有機(jī)溶劑即可初步判定為藥品中可能存在的殘留溶劑。 SPB-1柱程序升溫實(shí)驗(yàn)結(jié)果柱程序升溫實(shí)驗(yàn)結(jié)果峰號tR(min)峰面積RR

16、T數(shù)據(jù)庫中數(shù)據(jù)可能的殘留溶劑11.7764.870.392無相應(yīng)數(shù)據(jù)22.05328.310.4530.453甲醇甲醇32.179177.880.480無相應(yīng)數(shù)據(jù)42.45212.320.5410.539乙醇乙醇52.701159.190.5960.595丙酮丙酮65.27554.821.1631.169異丙醚異丙醚75.765.961.2701.283四氫呋喃86.30810.361.3911.324異丁醇1.4131,2-二氯乙烷97.4383.911.6401.658苯苯108.3413.91.839無相應(yīng)數(shù)據(jù)峰號tR(min)峰面積RRT知識庫數(shù)據(jù)可能的殘留溶劑118.7333.011

17、.9262.028三氯乙烯2.03二氧六環(huán)129.78923.362.1592.163正庚烷2.164乙酸丙酯1310.53210.012.3222.32吡啶1410.9925.742.424無相應(yīng)數(shù)據(jù)1511.82463.532.6072.617甲苯1613.3983.022.9542.953乙酸丁酯1714.3113.673.1563.152氯苯1816.5389.343.6473.653異丙基苯丁酮丁酮1.97峰號tR(min)峰面積RRT數(shù)據(jù)庫中數(shù)據(jù)可能的殘留溶劑11.24314.70.6310.63正己烷21.296515.10.6580.657異辛烷or異丙醚異丙醚31.3531.

18、60.687無相應(yīng)數(shù)據(jù)41.4012.90.7110.711二甲氧基甲烷51.47213.20.7470.747甲基環(huán)己烷61.535100.779無相應(yīng)數(shù)據(jù)71.606174.40.8150.816丙酮丙酮81.69262.80.859無相應(yīng)數(shù)據(jù)91.84610.9370.935四氯化碳101.926590.9780.976甲醇甲醇112.0771.31.0541.052異丙醇122.14218.31.0871.088氯仿or乙醇乙醇132.2521.1421.146苯苯143.30423.91.677無相應(yīng)數(shù)據(jù)166.2083.23.151無相應(yīng)數(shù)據(jù)178.1553.64.140無相應(yīng)數(shù)據(jù)

19、1912.0712.76.127無相應(yīng)數(shù)據(jù)丁酮丁酮1.97HP-FFAP柱程序升溫實(shí)驗(yàn)結(jié)果柱程序升溫實(shí)驗(yàn)結(jié)果初篩結(jié)果：個企業(yè)的鹽酸頭孢他美酯中均初篩結(jié)果：個企業(yè)的鹽酸頭孢他美酯中均可能含有異丙醇?？赡芎挟惐肌?（2）證明）證明：以初篩結(jié)果作為檢測對象（本例為異丙醇），參考知識庫選擇等溫色譜系統(tǒng)和色譜條件（本例選擇SPB1色譜柱，在40條件下測定）；將供試品中測得的色譜峰的保留時間與相應(yīng)對照品（本例為異丙醇）的保留時間比較；并通過標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)一步證明初篩結(jié)果的正確性。 （3）確證：）確證：通常通過標(biāo)準(zhǔn)加入法已經(jīng)可以確定初步判定的殘留溶劑種類的正確與否，但對一些微量殘留的一類溶劑或產(chǎn)品生產(chǎn)工藝

20、中未提及的溶劑，為慎重起見，可采用氣相質(zhì)譜聯(lián)用或氣相紅外光譜聯(lián)用技術(shù)對所檢測到的殘留溶劑做進(jìn)一步的確證。 檢測到的溶劑和異丙醇的紅外光譜圖比檢測到的溶劑和異丙醇的紅外光譜圖比較較 1.檢測到的溶劑 (solvent being examined) 2.異丙醇 (isopropanol)2. 在等溫色譜系統(tǒng)中進(jìn)一步判斷產(chǎn)品中可能在等溫色譜系統(tǒng)中進(jìn)一步判斷產(chǎn)品中可能使用過的其它溶劑及其它可能存在的干擾使用過的其它溶劑及其它可能存在的干擾 在等溫條件下，將個企業(yè)的樣品濃度提高到0.5 g.ml-1，進(jìn)一步考察樣品中可能存在的其它微量殘留溶劑。結(jié)果發(fā)現(xiàn)3個企業(yè)的樣品中可能殘留有石油醚；經(jīng)與石油醚對照品

21、比較，確定保留時間在817min間的一組色譜峰確實(shí)為石油醚 石油醚對照品溶液（石油醚對照品溶液（A）與廠供試品溶液（）與廠供試品溶液（B）的色譜圖）的色譜圖 AB石油醚3. 結(jié)合企業(yè)提供的工藝信息確定藥品質(zhì)量標(biāo)結(jié)合企業(yè)提供的工藝信息確定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)控制的殘留溶劑準(zhǔn)中應(yīng)控制的殘留溶劑 廠家廠家申報(bào)生產(chǎn)工藝中涉及的溶劑申報(bào)生產(chǎn)工藝中涉及的溶劑實(shí)際檢出的殘留溶劑實(shí)際檢出的殘留溶劑A甲苯、二氯甲烷甲苯、二氯甲烷異丙醇異丙醇B甲苯、二氯甲烷甲苯、二氯甲烷異丙醇、石油醚異丙醇、石油醚C乙醇、丙酮乙醇、丙酮異丙醇異丙醇D乙酸乙酯乙酸乙酯異丙醇異丙醇E二氯甲烷、乙醇、丙酮、乙酸乙酯二氯甲烷、乙醇、丙酮、乙

22、酸乙酯異丙醇、石油醚異丙醇、石油醚F二氯甲烷二氯甲烷異丙醇、石油醚異丙醇、石油醚G異丙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲醇異丙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲醇異丙醇異丙醇 雖然樣品實(shí)際測定中未檢測到工藝中提及雖然樣品實(shí)際測定中未檢測到工藝中提及的諸多有機(jī)溶劑，但為藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的諸多有機(jī)溶劑，但為藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的殘留溶劑檢查法應(yīng)能檢測到樣品中可能的殘留溶劑檢查法應(yīng)能檢測到樣品中可能存在的所有殘留溶劑，故將存在的所有殘留溶劑，故將ICH規(guī)定的二類規(guī)定的二類溶劑溶劑甲苯、二氯甲烷、甲醇和使用較多的甲苯、二氯甲烷、甲醇和使用較多的乙醇、丙酮、乙酸乙酯乙醇、丙酮、乙酸乙酯及產(chǎn)品中實(shí)際存在及產(chǎn)品中實(shí)際存在的的異

23、丙醇異丙醇均作為檢測對象。均作為檢測對象。 雖然實(shí)際樣品中還檢測到石油醚，但考慮雖然實(shí)際樣品中還檢測到石油醚，但考慮到石油醚本身為混合物，按到石油醚本身為混合物，按ICH分類為第分類為第4類溶劑，且檢測到的三個企業(yè)的樣品中石類溶劑，且檢測到的三個企業(yè)的樣品中石油醚的殘留量均非常小，故擬在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)油醚的殘留量均非常小，故擬在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中不對其進(jìn)行控制。中不對其進(jìn)行控制。 二、建立殘留溶劑檢測方法二、建立殘留溶劑檢測方法根據(jù)根據(jù)“知識庫知識庫”建立初步的測定方建立初步的測定方法法 排除干擾因素排除干擾因素方法優(yōu)化方法優(yōu)化1.根據(jù)根據(jù)“知識庫知識庫”建立初步的測定方法建立初步的測定方法 色譜柱系統(tǒng)的選

24、擇色譜柱系統(tǒng)的選擇 依據(jù)藥品殘留溶劑測定知識庫中的數(shù)據(jù)，選擇非極性的SPB1色譜柱等溫色譜系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。經(jīng)實(shí)際測定，發(fā)現(xiàn)樣品中需控制的諸溶劑均能夠得達(dá)到完全分離. 溶解介質(zhì)的選擇溶解介質(zhì)的選擇 如果樣品不溶于水；雖然0.1mol.L-1的鹽酸能使其溶解，但由于其可能引起乙酸乙酯的水解而不宜使用；采用DMF為溶劑，發(fā)現(xiàn)甲苯由于保留值較DMF略大，其色譜峰融入DMF溶劑峰中無法檢測；換用DMSO為溶劑， 雖然DMSO與樣品混合后會產(chǎn)生一個較大的雜質(zhì)峰，但不干擾測定；故最終選用DMSO為溶解介質(zhì)。 n 內(nèi)標(biāo)的選內(nèi)標(biāo)的選擇擇l 首先選用丁酮為內(nèi)標(biāo)，但測定中發(fā)現(xiàn)對照品溶液和供試品溶液中內(nèi)標(biāo)濃度相同，但其

25、峰面積相差較大，提示丁酮與供試品有較強(qiáng)的相互作用，而不宜作為內(nèi)標(biāo)。l 正丙醇在SPB1柱中能與待測的諸溶劑能較好分離，且不與供試品發(fā)生相互作用，故可作為內(nèi)標(biāo)。l 甲苯在色譜系統(tǒng)中的保留值與其它溶劑相差較大，故增加甲基異丁基酮作為測定甲苯的內(nèi)標(biāo)。 2. 干擾因素的排除干擾因素的排除 頂空氣相色譜法常見的干擾作用頂空氣相色譜法常見的干擾作用 共出鋒干擾共出鋒干擾 熱降解干擾熱降解干擾 溶解介質(zhì)干擾溶解介質(zhì)干擾共出峰干擾共出峰干擾什么是共出峰？什么是共出峰？ 在相同的色譜條件下具有相同保留值的組在相同的色譜條件下具有相同保留值的組分不一定是同一物質(zhì)。不同的物質(zhì)在某一分不一定是同一物質(zhì)。不同的物質(zhì)在某

26、一色譜條件下具有相同保留值的現(xiàn)象，被稱色譜條件下具有相同保留值的現(xiàn)象，被稱為共出峰現(xiàn)象。為共出峰現(xiàn)象。用頂空氣相色譜法測定藥品殘留溶劑時，用頂空氣相色譜法測定藥品殘留溶劑時，如如果藥品對熱不穩(wěn)定，則可能會在頂空加熱過果藥品對熱不穩(wěn)定，則可能會在頂空加熱過程中發(fā)生熱降解，如果降解產(chǎn)物恰好與待測程中發(fā)生熱降解，如果降解產(chǎn)物恰好與待測的有機(jī)溶劑共出鋒，或恰好就是某種有機(jī)溶的有機(jī)溶劑共出鋒，或恰好就是某種有機(jī)溶劑，則會導(dǎo)致把降解產(chǎn)物當(dāng)作殘留溶劑檢測，劑，則會導(dǎo)致把降解產(chǎn)物當(dāng)作殘留溶劑檢測，得出錯誤結(jié)果。得出錯誤結(jié)果。 熱降解干擾熱降解干擾 分別在60，80，100的頂空條件下分析樣品，比較測定結(jié)果。除

27、甲醇外，頂空過程中未出現(xiàn)其它熱降解產(chǎn)物的干擾。為防止樣品在頂空過程中熱降解產(chǎn)生甲醇，確定頂空溫度為60。 以甲苯和甲基異丁基酮的保留值為指標(biāo)，以甲苯和甲基異丁基酮的保留值為指標(biāo)，用上述用上述Excel表計(jì)算擬設(shè)定的程序升溫條件表計(jì)算擬設(shè)定的程序升溫條件下甲基異丁基酮和甲苯的預(yù)測保留時間，下甲基異丁基酮和甲苯的預(yù)測保留時間，并估測諸溶劑的分離度。選擇出最優(yōu)的程并估測諸溶劑的分離度。選擇出最優(yōu)的程序升溫方法：柱溫序升溫方法：柱溫:40，保持，保持15min；再；再以以10/min的升溫速率上升到的升溫速率上升到120，保持，保持3min； 某樣品中待測殘留溶劑保留時間某樣品中待測殘留溶劑保留時間預(yù)

28、測值與實(shí)測值比較預(yù)測值與實(shí)測值比較 殘留溶劑殘留溶劑(residual solvents) tR預(yù)測預(yù)測 tR實(shí)測實(shí)測 tR甲醇甲醇(methanol) 3.994 3.994 0.000乙醇乙醇(ethanol)4.518 4.559 0.041丙酮丙酮(acetone) 4.915 4.092 -0.013異丙醇異丙醇(isoproanol)5.038 5.132 0.094二氯甲烷二氯甲烷(dichloromethane) 5.746 5.739 -0.007正丙醇正丙醇(propanol)6.314 6.482 0.168乙酸乙酯乙酸乙酯(ethyl acetate)8.344 9.4

29、14 1.070甲基異丁基酮甲基異丁基酮(4-methyl-2-pentanone)16.456 17.379 0.923甲苯甲苯(toluene)18.318 19.105 0.787樣品殘留溶劑測定優(yōu)化后對照品色譜圖1.甲醇 (methanol) 2.乙醇 (ethanol) 3.丙酮 (acetone) 4. 異丙醇 (isoproanol) 5.二氯甲烷 (dichloromethane) 6.內(nèi)標(biāo)正丙醇 (propanol,internal standard) 7.乙酸乙酯 (ethyl acetate) 8.內(nèi)標(biāo)甲基異丁基酮 (4-methyl-2-pentanone) 9.甲苯(

30、toluene) 10.DMSO 石油醚某樣品殘留溶劑檢查法某樣品殘留溶劑檢查法 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)采用SPB-1毛細(xì)管柱（或與之類似的色譜柱），30.0m0.32mm0.25m；柱溫：40，保持15min，再以每1分鐘10的速率程序升溫至120，保持3min；進(jìn)樣口溫度：200；檢測器溫度：250；載氣：氮?dú)?，流速?ml.min-1。頂空進(jìn)樣器參數(shù)：平衡溫度為60；轉(zhuǎn)移管溫度為80；平衡時間為20min；加壓時間為0.20min；進(jìn)樣時間為1min。進(jìn)樣對照品溶液，按甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、正丙醇（內(nèi)標(biāo)1）、乙酸乙酯、甲基異丁基酮（內(nèi)標(biāo)2）、甲苯的

31、順序出峰，各色譜峰的分離度均應(yīng)符合規(guī)定。測定法測定法 取本品約0.2g，精密稱定，置20ml頂空進(jìn)樣瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2ml使溶解，密封，作為供試品溶液。分別精密稱取甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯各適量，用內(nèi)標(biāo)溶液定量溶解并稀釋成每1ml中分別含甲醇600g、乙醇1mg、丙酮1mg、異丙醇1mg、二氯甲烷120g、乙酸乙酯mg、甲苯180g的對照品混合溶液，精密量取2.0ml，置20ml頂空進(jìn)樣瓶中，密封，作為對照品溶液。分別取供試品溶液和對照品溶液頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯的含量，含甲醇不得過0

32、.3%、二氯甲烷不得過0.06%、甲苯不得過0.089%、乙醇、丙酮、異丙醇和乙酸乙酯均不得過0.5%。三、殘留溶劑檢測方法的驗(yàn)證三、殘留溶劑檢測方法的驗(yàn)證準(zhǔn)確性（回收率）準(zhǔn)確性（回收率）重復(fù)性重復(fù)性 最低檢測限最低檢測限最低定量限最低定量限 線性線性 準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性: 回收率的可接受范圍一般為回收率的可接受范圍一般為80-120%；當(dāng)方法的回收率超出此范圍時，提示當(dāng)方法的回收率超出此范圍時，提示溶解介質(zhì)不宜作為該藥品殘留溶劑測溶解介質(zhì)不宜作為該藥品殘留溶劑測定的溶劑，應(yīng)改換其它介質(zhì)重新實(shí)驗(yàn)。定的溶劑，應(yīng)改換其它介質(zhì)重新實(shí)驗(yàn)。建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)殘留溶劑檢查方法的一般建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)殘留溶劑檢查方法

33、的一般過程過程 確定藥品標(biāo)準(zhǔn)需要控制的殘留溶劑對象確定藥品標(biāo)準(zhǔn)需要控制的殘留溶劑對象：雖然理論上根據(jù)企業(yè)提供的生產(chǎn)工藝信息確定藥品標(biāo)準(zhǔn)需控制的殘留溶劑對象是理想的途徑，但現(xiàn)時情況收集到的生產(chǎn)工藝信息往往是過時和不完全的。因此如果僅依據(jù)企業(yè)提供的生產(chǎn)工藝信息確定藥品標(biāo)準(zhǔn)需要控制的殘留溶劑對象，將使得藥品標(biāo)準(zhǔn)永遠(yuǎn)滯后于實(shí)際生產(chǎn)，使檢驗(yàn)的意義銳減。故在建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)殘留溶劑檢查方法時，對樣品中實(shí)際存在的殘留溶劑進(jìn)行初篩是很有必要的。根據(jù)初篩的結(jié)果，結(jié)合生產(chǎn)工藝信息，將使得所建立的藥品標(biāo)準(zhǔn)中的控制對象更具有針對性。 加替沙星殘留溶劑測定對照品色譜圖加替沙星殘留溶劑測定對照品色譜圖研究熱點(diǎn)和關(guān)鍵點(diǎn) 1

34、、色譜法（GC法研究-大口徑與小口徑） （毛細(xì)管柱法-厚壁與薄壁等） 2、進(jìn)樣方式 3、樣品制備 4、方法優(yōu)化和驗(yàn)證 5、評價和判斷 bTakln)(2/1)1(2/110)(2hhhhWWkktR計(jì)算機(jī)輔助預(yù)測優(yōu)化計(jì)算機(jī)輔助預(yù)測優(yōu)化USP殘留溶劑檢查殘留溶劑檢查 USP將藥品中殘留溶劑定義為在活性物質(zhì)或賦形劑的生產(chǎn)過程中，或制劑的制備過程中使用或產(chǎn)生的揮發(fā)性有機(jī)物。這些溶劑在實(shí)際生產(chǎn)工藝中沒能徹底除去。在合成活性物質(zhì)時，選擇適宜的溶劑可以增加合成物質(zhì)的種類，或決定諸如晶型、純度、溶解度等物質(zhì)的物理性質(zhì)，因此有時溶劑可能是合成過程中的決定性因素。本指導(dǎo)原則的重點(diǎn)不在于那些專門用作賦形劑的溶劑以

35、及溶劑化物。當(dāng)然，藥品中這些溶劑的量也是應(yīng)該加以評估和限定的。 由于殘留溶劑無治療作用，所以殘留溶劑量應(yīng)限制在一定范圍內(nèi)，以滿足產(chǎn)品質(zhì)量、GMP和其他質(zhì)控要求。藥品中的溶劑殘留量不得超過安全性數(shù)據(jù)支持的使用量。一些已知的、能造成不可接受毒性（表1中“一類”）的溶劑，在活性物質(zhì)、賦形劑、及藥品的生產(chǎn)過程中應(yīng)避免使用，除非在利-害評價中它的使用具有強(qiáng)有力的法律支持。為使病人免受潛在副作用的侵害，一些有低劇毒作用的溶劑（表2中“二類”）的使用應(yīng)加以限制。比較理想的情況是在生產(chǎn)實(shí)踐中盡量使用那些低毒性（表3中“三類”）的溶劑。 所涉及的溶劑有完整的列表顯示。 但列表并非詳盡無遺，當(dāng)其他的溶劑得到主管當(dāng)

36、局的批準(zhǔn)被使用時，也將會增加到列表中。當(dāng)已知制劑的制備，純化過程會產(chǎn)生所述的殘留溶劑時，藥物活性物質(zhì)，賦形劑以及藥品都必須進(jìn)行殘留溶劑的測定。凡是在生產(chǎn)，純化過程中使用或產(chǎn)生的殘留溶劑都必須進(jìn)行測定。 雖然生產(chǎn)廠可能選擇檢查藥物，但是應(yīng)有一個累積的步驟對制劑中原料藥的殘留溶劑量進(jìn)行計(jì)算。如果計(jì)算結(jié)果等于或低于藥典通則所述的限度，則不須要進(jìn)行制劑中殘留溶劑的測定。然而，如果計(jì)算的量超過推薦的量，則應(yīng)對制劑進(jìn)行檢查，以確認(rèn)在制劑過程中將溶劑減少至可以接受的量。如果在制劑中使用殘留溶劑，則必須進(jìn)行殘留溶劑的測定。參見附錄2中有關(guān)于殘留溶劑的背景信息的附加說明。殘留溶劑的分類（殘留溶劑的分類（根據(jù)危險(xiǎn)

37、評價根據(jù)危險(xiǎn)評價） “可耐受的日攝入量”（TDI）被國際化學(xué)安全綱要（IPCS）用來描述有毒化學(xué)物質(zhì)的公開限量，“可接受的日攝入量”（ADI）這個短語被世界衛(wèi)生組織（WHO）及其他國家和政府間的衛(wèi)生權(quán)威部門和研究機(jī)構(gòu)所使用?！霸试S的日接觸量”（PDE）用以限定從藥學(xué)角度出發(fā)、每日可以接受的殘留溶劑的攝入量，從而避免與同種物質(zhì)的ADI的不同數(shù)值相混淆。 所評價的殘留溶劑以普通名稱和結(jié)構(gòu)列于附錄1中，以它們的對人類健康可能帶來的危害作為評價指標(biāo)而將它們列為下面三個類別中的某一個類別：殘留溶劑的分類殘留溶劑分類 第一類：應(yīng)避免使用， 致癌性 懷疑為致癌性對環(huán)境極大污染 第二類：應(yīng)限制使用， 無生殖毒

38、性的動物致癌劑 其它如毒害神經(jīng)或致畸形等的不可逆轉(zhuǎn)毒性的可能致病因子 可疑與其他明顯但可逆轉(zhuǎn)的毒性有關(guān)的溶劑。 第三類：潛在的、低毒性，對人類有潛在的低毒性；沒有基于身體健康所允許的接觸限度注第三類殘留溶劑的PDE可高達(dá)50mg/day或更多*關(guān)于殘留溶劑的PDEs多于50mg，可參見第三類殘留溶劑限度的討論接觸限度確立的過程接觸限度確立的過程 殘留溶劑接觸限度確立的過程參見附錄3。 二類溶劑的限度確立可有2種選擇： 選擇1 可使用表2中的以ppm為單位的濃度限度，用下面的公式來計(jì)算其濃度限度；假如某藥品的每日服用量為10g。 濃度(ppm)（1000PDE）劑量 此處，PDE單位是mg/天、

39、劑量單位是g/天。選擇1 這種限度被認(rèn)為可以適用于所有的原藥、賦形劑及制劑。所以當(dāng)某種藥物的日服劑量未知或不固定時可應(yīng)用這種選擇來評估。如果某一固定配比的處方中的所有賦形劑和活性物質(zhì)均符合選擇1的規(guī)定，那么這些組分可按此配比制成任意劑型的制劑。只要日服劑量不超過10g就不必做更深入的計(jì)算。日服劑量超過10g 的藥品應(yīng)該按照選擇2來加以考慮。選擇2 通常認(rèn)為，并非藥品中的每一組分都必須與選擇1所給出的限度相一致。表2中列出的PDE以mg/天為單位可以用于已知每天最大劑量和上面公式(1)來決定某個藥品中允許存在的殘留溶劑的限度。只要這些限度被證實(shí)殘留溶劑已經(jīng)降到了實(shí)際操作所能達(dá)到的最低限，那么它們

40、就可以被接受。涉及該限度的分析精密度、生產(chǎn)可靠性、生產(chǎn)過程中的合理變動等均應(yīng)該是真實(shí)的，而且該限度應(yīng)該能反映與之共存的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)。 可以通過加入在藥品中的每一組分所顯示出的溶劑殘留量來運(yùn)用選擇2，該溶劑每日攝入的總量應(yīng)不得超過所給出的PDE的量。舉例一 考慮在某一藥品的生產(chǎn)過程中使用了乙腈時，選擇1與選擇2的使用情況。乙腈的PDE是4.1mg/天；于是選擇(1)的限度是410ppm。某藥品的每日最大服用量為5.0g，該產(chǎn)品中包含有2種賦形劑。藥品的組成及殘留乙腈的計(jì)算最大量列于下表：藥品組成及殘留乙腈的計(jì)算最大量 賦形劑1符合選擇1的限度，但是藥物、賦形劑2和治療藥物與選擇1的限度不符。不過該藥

41、符合選擇2的4.1mg/天的限度，所以與該指南的推薦內(nèi)容是一致的。舉例二 以乙腈作為殘留溶劑來考慮，某藥品的每日最大服用量為5.0g，該藥包含2種賦形劑。處方組成及乙腈的計(jì)算最大含量列于下表：處方組成及乙腈的計(jì)算最大含量 在此例中，該藥品既不符合選擇1的限度也不符合選擇2的限度。生產(chǎn)者可以檢查該產(chǎn)品來決定配方過程是否減少了乙腈的量。如果乙腈的量不能減少到可允許的限度，則制劑不符合測定的要求。殘留溶劑的限度殘留溶劑的限度第一類 環(huán)氧乙烷除各論另有規(guī)定外，限度為10ug/g。 第一類殘留溶劑由于它們的不可接受的毒性及對環(huán)境的危害，在原料、輔料及制劑制備過程中應(yīng)避免使用。除各論另有規(guī)定外，如果使用第

42、一類溶劑，它們的濃度應(yīng)嚴(yán)格限制在表1所示的限度。由于氯仿對環(huán)境污染極大，也包含在表1中。 當(dāng)在原料、輔料及制劑制備過程中使用到第一類溶劑，無論如何都必須采用所述的殘留溶劑的鑒別、對照及定量分析的方法。除另有適宜的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)，各操作步驟都必須遵守各論項(xiàng)下USP的規(guī)定。表1 藥物制品中的一類溶劑殘留溶劑的限度殘留溶劑的限度第二類 此類殘留溶劑，由于它們的遺傳性毒性，在原料、輔料及制劑制備過程中應(yīng)限制使用。規(guī)定PDEs近似0.1mg/day，濃度近似為10ppm。上述值并不能反應(yīng)操作步驟的分析精密度，而精密度應(yīng)該確認(rèn)為驗(yàn)證步驟的一部分。如果第二類殘留溶劑的量大于選項(xiàng)1的限度，則應(yīng)進(jìn)行鑒別及定量分析。無

43、論如何都必須采用所述的殘留溶劑的鑒別、對照及定量分析的方法。除另有適宜的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)，各操作步驟都必須遵守相關(guān)各論項(xiàng)下USP的規(guī)定。表2 制藥工業(yè)中的二類溶劑殘留溶劑的限度殘留溶劑的限度第二類 注甲酰胺、2甲氧基乙醇、2乙氧基乙醇、乙二醇、N甲基吡咯烷酮、四氫噻吩，不宜用頂空進(jìn)樣方式測定。除另有適宜驗(yàn)證步驟，各操作步驟都必遵守各論項(xiàng)下USP的規(guī)定。 通常含有60%間二甲苯，14%對二甲苯，9%鄰二甲苯和17%乙苯殘留溶劑的限度殘留溶劑的限度第三類 第三類殘留溶劑（表3）被認(rèn)為低毒性及對人健康危害輕于第一類和第二類殘留溶劑。然而，沒有許多第三類殘留溶劑的長期毒性或致癌性的研究。有關(guān)數(shù)據(jù)表明它們很少有

44、急性毒性，或是短期的和遺傳負(fù)作用。除各論項(xiàng)下另有規(guī)定外，第三類殘留溶劑的限度不得過50mg/day。（相當(dāng)于選項(xiàng)1下的5000ppm或0.5%）。在各論項(xiàng)下，如果第三類溶劑限度大于50mg/day，則殘留溶劑應(yīng)該進(jìn)行鑒別和定量分析。無論都必須采用所述的殘留溶劑的鑒別、對照及定量分析方法。除另有適宜的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)可以應(yīng)用，各操作步驟都必遵守相關(guān)各論項(xiàng)下USP的規(guī)定。表3 第三類殘留溶劑（藥品GMP或其他質(zhì)量要求在原料、輔料及制劑制備過程中限制使用）其它殘留溶劑 列于表4中的殘留溶劑在原料藥、輔料及制劑制備過程中，也有應(yīng)用。然而，尚無足夠的毒理學(xué)資料來確定PDE值。這些溶劑應(yīng)符合各論項(xiàng)下的規(guī)定。表4.

45、其它殘留溶劑（尚無足夠毒理料）鑒別、控制和定量分析鑒別、控制和定量分析 不含有機(jī)物的水在以下方法中不明顯干擾色譜峰 第一類和第二類殘留溶劑（水溶性） 方法 A 第一類標(biāo)準(zhǔn)貯備液精密量取第一類USP標(biāo)準(zhǔn)殘留溶劑對照品1.0ml，置100ml量瓶中，加二甲基亞砜9ml，用水稀釋至刻度，混勻。精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。精密量取1.0ml，置10ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。 第一類標(biāo)準(zhǔn)溶液精密量取第一類標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.0ml，置適宜頂空瓶中，加水5.0ml，壓蓋，混勻。 第二類標(biāo)準(zhǔn)貯備液精密量取第二類USP殘留溶劑對照品混合液A1.0ml，置100ml量瓶中，

46、用水稀釋至刻度，混勻。作為第二類標(biāo)準(zhǔn)貯備液A。精密量取第二類USP殘留溶劑對照品混合液B1.0ml，置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。作為第二類標(biāo)準(zhǔn)貯備液B。 第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液A精密量取第二類標(biāo)準(zhǔn)貯備液A5.0ml，置適宜頂空瓶中，加水1.0ml，壓蓋，混勻。 第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液B精密量取第二類標(biāo)準(zhǔn)貯備液B5.0ml，置適宜頂空瓶中，加水1.0ml，壓蓋，混勻。方法 A 供試品貯備液取供試品約250mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，混勻。供試品溶液精密量取供試品貯備液5.0ml，置適宜頂空瓶中，加水1.0ml，壓蓋，混勻。第一類系統(tǒng)適用性溶液精密量取第一類標(biāo)準(zhǔn)貯備液1

47、.0ml，置適宜頂空瓶中，加供試品貯備液5.0ml，壓蓋，混勻。方法 A 照氣相色譜法621：氣相色譜系統(tǒng)；檢測器：火焰離子化檢測器；色譜柱：0.32mm30m的熔融二氧化硅柱，內(nèi)徑1.8um，涂布液G34，或0.53mm30m的寬徑柱,內(nèi)徑3.0um, 涂布液G43；載氣：氮?dú)夂秃?；線性流速：35cm/s；分流比：1：5；柱溫：先在40維持20分鐘，再以10/min的升溫速度升至240，維持20min；進(jìn)樣口和檢測器溫度分別為140和250。精密吸取第一類標(biāo)準(zhǔn)溶液、第一類系統(tǒng)適用性溶液和第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液A，注入色譜儀，記錄色譜圖。第一類標(biāo)準(zhǔn)溶液的1,1,1三氯乙烷的S/N不少于5；第一類系統(tǒng)

48、適用性溶液每個峰的的S/N不少于3；第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液A的乙腈與二氯甲烷的分離度R不少于1.0。 測定法精密量取(根據(jù)下表的頂空操作參數(shù))等體積的第一類標(biāo)準(zhǔn)溶液、第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液A、第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液B和供試品溶液各1.0ml，注入色譜儀，記錄色譜圖，測定主峰的響應(yīng)時間。供試品溶液中任一峰的響應(yīng)值應(yīng)不得大于或等于第一類標(biāo)準(zhǔn)溶液或兩種第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液相應(yīng)峰的響應(yīng)，否則繼續(xù)方法B進(jìn)行該峰的確認(rèn)。方法 A表5.頂空操作參數(shù)方法B 第一類標(biāo)準(zhǔn)貯備液、第一類標(biāo)準(zhǔn)溶液、第二類標(biāo)準(zhǔn)貯備液、第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液A、第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液B、供試品貯備液、供試品溶液、第一類系統(tǒng)適用性溶液按方法A的方法制備。 方法B 第二類系統(tǒng)適用性溶液

49、精密量取第二類USP殘留溶劑對照品-乙腈1.0ml，及第二類USP殘留溶劑對照品-三氯乙烯1.0ml，置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。精密量取1.0ml，置適宜頂空瓶中，加水5.0ml，壓蓋，混勻。 照氣相色譜法621：氣相色譜系統(tǒng)；檢測器：火焰離子化檢測器；色譜柱：0.32mm30m的熔融二氧化硅柱，內(nèi)徑0.25um，涂布液G16，或0.53mm30m的寬徑柱,內(nèi)徑0.25um, 涂布液G16；載氣：氮?dú)夂秃?；線性流速：35cm/s；分流比：1：5；柱溫：先在50維持20分鐘，再以6/min的升溫速度升至165，維持20min；進(jìn)樣口和檢測器溫度分別為140和250。精密吸取第一

50、類標(biāo)準(zhǔn)溶液、第一類系統(tǒng)適用性溶液和第二類系統(tǒng)適用性溶液，注入色譜儀，記錄色譜圖。第一類標(biāo)準(zhǔn)溶液的苯的S/N不少于5；第一類系統(tǒng)適用性溶液每個峰的的S/N不少于3；第二類系統(tǒng)適用性溶液的乙腈與三氯乙烯的分離度R不少于1.0。方法B 測定法精密吸取(根據(jù)表5的頂空操作參數(shù))等體積的第一類標(biāo)準(zhǔn)溶液、第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液A, 第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液B和供試品溶液各1.0ml，注入色譜儀，記錄色譜圖，測定峰響應(yīng)。方法A未確定的供試品溶液中的峰響應(yīng)值應(yīng)不得大于或等于第一類標(biāo)準(zhǔn)溶液或兩種第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液相應(yīng)峰的響應(yīng)，否則繼續(xù)方法C進(jìn)行該峰的確認(rèn)。方法C 第一類標(biāo)準(zhǔn)貯備液，第一類標(biāo)準(zhǔn)溶液，第二類標(biāo)準(zhǔn)貯備液A，第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液A

51、，供試品貯備液，供試品溶液，第一類系統(tǒng)適用性溶液按方法A的方法制備。 標(biāo)準(zhǔn)溶液注分別制備經(jīng)方法A和B中識別和核實(shí)出的每個峰單獨(dú)的標(biāo)準(zhǔn)溶液 方法C 分別精密稱取經(jīng)方法A和B中識別和核實(shí)的每個峰的USP標(biāo)準(zhǔn)對照品，置適宜的瓶中，稀釋一定量，必要時制成梯度。或用水稀釋到表1或表2中(濃度限度)值的1/20。精密吸取1.0ml，置適宜的頂空瓶中，加水5.0ml，壓蓋，混勻。示蹤溶液注分別制備經(jīng)方法A和B識別和核實(shí)的每個峰單獨(dú)的示蹤溶液 精密吸取該供試品貯備液5.0ml，置適宜的頂空瓶中，加標(biāo)準(zhǔn)溶液5.0ml，壓蓋，混勻。 照氣相色譜法621：注如方法A測定的結(jié)果不如方法B測定的好，則應(yīng)用方法B的色譜系

52、統(tǒng)進(jìn)行替代。氣相色譜系統(tǒng)；檢測器：火焰離子化檢測器；色譜柱：0.32mm30m的熔融二氧化硅柱，內(nèi)徑1.8um，涂布液G43，或0.53mm30m的寬徑柱,內(nèi)徑3.0um, 涂布液G43；載氣：氮?dú)夂秃猓痪€性流速：35cm/s；分流比：1：5；柱溫：先在40維持20分鐘，再以10/min的升溫速度升至240，維持20min；進(jìn)樣口和檢測器溫度分別為140和250。精密吸取第一類標(biāo)準(zhǔn)溶液、第一類系統(tǒng)適用性溶液和第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液A，注入色譜儀，記錄色譜圖。第一類標(biāo)準(zhǔn)溶液的三氯乙烷的S/N不少于5；第一類系統(tǒng)適用性溶液每個峰的的S/N不少于3；第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液A的乙腈與二氯甲烷的分離度R不少于1.0。

53、 測定法精密吸取(根據(jù)表5的頂空操作參數(shù))等體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液、供試品溶液以及示蹤溶液各1.0ml，注入色譜儀，記錄色譜圖，測定主峰的響應(yīng)時間。按下式，計(jì)算供試品中每種殘留溶劑的含量（ppm）： 5(C/W)rU /(rST rU)方法C C為標(biāo)準(zhǔn)溶液的相關(guān)USP對照品濃度，ppm；W為供試品貯備液中供試品的重量，g；rU和rST分別為來源于供試品溶液和示蹤溶液的殘留溶劑的峰響應(yīng)。水不溶性樣品 方法A第一類標(biāo)準(zhǔn)貯備液、第一類標(biāo)準(zhǔn)溶液、第一類系統(tǒng)適用性溶液、第二類標(biāo)準(zhǔn)貯備液A、第二類標(biāo)準(zhǔn)貯備液B、第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液A、第二類標(biāo)準(zhǔn)溶液B和色譜系統(tǒng)按水溶性樣品方法A所述的方法制備。 第二類標(biāo)準(zhǔn)貯備液C精密量

54、取第二類USP殘留溶劑對照品混合液C1.0ml，置100ml量瓶中，用1,3二甲基2瞇唑啉酮稀釋至刻度，混勻。方法A 第二類系統(tǒng)適用性溶液C 注此溶液用以樣品中二甲基甲酰胺和N,N二甲基乙酰胺的定性和定量。 精密量取第二類標(biāo)準(zhǔn)貯備液C1.0ml置適宜頂空瓶中，加1,3二甲基2瞇唑啉酮5.0ml，壓蓋，混勻。 供試品貯備液取供試品約250mg，精密稱定，置25ml量瓶中，溶解，用二甲基甲酰胺稀釋至刻度，混勻。 供試品溶液1精密量取供試品貯備液5.0ml，置適宜的頂空瓶中，加二甲基甲酰胺1.0ml，加塞，壓蓋，混勻。供試品溶液2注用以樣品中二甲基甲酰胺和N,N二甲基乙酰胺的定性和定量。取供試品約250mg，精密稱取，置25ml量瓶中，