低分子肝素的制備

1、低分子肝素的制備于越 目錄1.原料來源2.組成或結(jié)構(gòu)及存在形式3.性質(zhì)4.制備工藝5制備工藝的改進(jìn)6作用及用途 肝素（Unfractionated heparin,UFH）作為抗凝劑 和 抗血栓藥在臨床上使用已有60余年，但長期使用會(huì)導(dǎo) 致出血和血小板減少等不良現(xiàn)象 低 分 子 肝 素 (Low-molecular-weight heparin,LMWH) 是由普通肝素裂解而來。與普通肝素比較，其抗血栓 能力較強(qiáng)而抗凝血能力較低，在其抗血栓能力形成時(shí) 對(duì)凝血系統(tǒng)的影響較小。另外低分子肝素還具有分子 量小、生物利用度高、體內(nèi)半衰期長、出血傾向小等 特點(diǎn)，因此低分子肝素的制備具有重要的意義。方法制

2、備 物理分離法物理分離法 有機(jī)溶劑分級(jí)沉淀法、凝膠色譜法、親和色譜法、離子交換色譜法和超濾法 （不適用與工業(yè)化生產(chǎn)） 化學(xué)裂解法化學(xué)裂解法 亞硝酸降解法、過氧化氫降解法、-消除降解法和其它化學(xué)降解法 酶解法酶解法 肝素酶 化學(xué)降解法 2.1.亞硝酸降解法亞硝酸降解法肝素鈉肝素鈉 溶液溶液 降解液降解液 中和液中和液 沉淀沉淀 低分子肝素低分子肝素 該解聚肝素的過程受溫度、溶液該解聚肝素的過程受溫度、溶液pH值、亞硝酸鹽的濃度及降解時(shí)間的值、亞硝酸鹽的濃度及降解時(shí)間的影響較大影響較大PH 2.3-3.0亞硝酸鈉氫氧化和鈉中PH 6.5-7.0無水乙醇530，3.5h丙酮脫水，干燥 化學(xué)降解法 2

3、.1.2 過氧化氫降解法過氧化氫降解法 肝素鈉肝素鈉 溶液溶液 溶液溶液 反應(yīng)液反應(yīng)液 濃縮液濃縮液 中和液中和液 沉淀沉淀 低分子肝素低分子肝素 乙 酸鈉PH 7.8攪拌邊加入過氧化氫PH 7.8，40，24h真空濃縮EDTA鈉鹽PH 6.5-6.7無水甲醇干燥抗壞血酸，乙酸銅水溶液該法制備該法制備LMWH 的過程也主要受反應(yīng)的溫度、的過程也主要受反應(yīng)的溫度、pH值和過氧化氫濃值和過氧化氫濃度的影響度的影響 2.1 化學(xué)降解法 2.1.3 -2.1.3 -消去降解法消去降解法 -消除降解法包括肝素季銨化和降解兩步處理。肝素的季銨鹽和鹵代烴或鹵代芐基化合物在二氯甲烷或二甲基甲酰胺中可以發(fā)生酯化

4、反應(yīng),生成的肝素酯可在堿性條件下水解成LMWH。 肝素解聚程度可由酯化率，堿性條件或酯的類型決定。 2.1.42.1.4其它化學(xué)降解法其它化學(xué)降解法 除亞硝酸降解、-消除降解法和過氧化氫降解這三種工業(yè)上用來制備LMWH的化學(xué)方法以外，還可采用高碘酸降解、次氯酸降解、-照射和硫酸一氯磺酸降解等幾種方法制備LMWH。這幾種制備方法目前沒有其投入工業(yè)化生產(chǎn)的報(bào)道。 2.1 化學(xué)降解法 優(yōu)點(diǎn)：化學(xué)裂解法工藝簡單，成本低廉，適宜工業(yè)化生產(chǎn)。 缺點(diǎn)：化學(xué)裂解法在裂解過程中容易導(dǎo)致硫酸基丟失ATlll一結(jié)合部位減少，同時(shí)其在裂解過程中易引入有毒物污染環(huán)境。酶解法 肝素的酶法降解己經(jīng)被用作分析肝素的結(jié)構(gòu)和制備

5、LMWH。肝素酶是能特異性的裂解肝素和類肝素主鏈糖苷鍵的酶，最初是從肝素黃桿菌（Flavobacterium heparinum）中發(fā)現(xiàn)并分離。后在一些其它的微生物和真核生物中也有發(fā)現(xiàn)，如擬桿菌屬、棒桿菌屬和芽孢桿菌屬等幾種，真核生物的霉菌、胎盤、胸腺、血小板等中均有發(fā)現(xiàn)。 肝素酶主要用于低分子肝素生產(chǎn)和鏈上精確結(jié)構(gòu)的研究，現(xiàn)在市場(chǎng)上肝素酶價(jià)格昂貴且都是肝素黃桿菌肝素酶，這是由于分離肝素酶穩(wěn)定性差及產(chǎn)量不高所造成的。低分子的測(cè)活方法及分子量的測(cè)定生色底物法生色底物法天青天青A法法血漿凝固法血漿凝固法它在效價(jià)測(cè)定中的特異性,分光光度法的使用使常規(guī)測(cè)定自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化統(tǒng)計(jì)凝固法用血漿做底物,血漿存在較大的差異,本身就可帶入試劑誤差;用人眼觀察凝塊出現(xiàn)時(shí)間,造成人為誤差;采用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算效價(jià),也存有誤差可以測(cè)定低分子肝素含量但卻無法反應(yīng)LMWH的抗Xa因子和抗IIa因子活性，因?yàn)槭Щ畹母嗡赝珹zure A仍可顯色, 證明現(xiàn)有理化方法測(cè)得的肝素化學(xué)等效性并非生物等效性。酶活測(cè)定酶活測(cè)定 目前遇到的困難及解決問題方案 1）在天青A測(cè)酶活的過程中，發(fā)現(xiàn)離子強(qiáng)度對(duì)該法測(cè)酶活的穩(wěn)定性影響較大，易出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象。另外該法在建立標(biāo)曲的時(shí)，線性關(guān)系不是很好。 鑒于天青A法測(cè)得的肝素化學(xué)等效性并非生物等效性，擬采用藥典上的血漿凝固法和