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認(rèn)證類型：個(gè)人認(rèn)證

認(rèn)證主體：沃**（實(shí)名認(rèn)證）

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IP屬地：上海 上傳時(shí)間：2022-06-30 格式：PPTX 頁數(shù)：23 大?。?06.14KB 積分：20 舉報(bào) 版權(quán)申訴

1、一、目的基因一、目的基因(jyn)(jyn)的的獲取獲取( (一一) )、目的基因、目的基因(jyn)(jyn)主要是主要是_編碼編碼(bin m)(bin m)蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因結(jié)構(gòu)基因（二）、獲取目的基因的常用方法有哪些（二）、獲取目的基因的常用方法有哪些? ?1 1、從基因文庫中獲取2 2、利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增3 3、人工合成第1頁/共22頁第一頁，共23頁。限制限制(xinzh)(xinzh)酶酶基因組基因組DNADNA基因基因(jyn)(jyn)重組重組轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化(zhunhu)(zhunhu)細(xì)菌細(xì)菌體外包裝體外包裝1)1)基因組文庫基因組文庫(Genomic librar

2、y) (Genomic library) 是指將某種生物體的是指將某種生物體的全部基因組全部基因組DNADNA用限制性內(nèi)切酶或機(jī)械力量切割用限制性內(nèi)切酶或機(jī)械力量切割成一定長度范圍的成一定長度范圍的DNADNA片段，再與片段，再與合適的載體在體外重組后，導(dǎo)入合適的載體在體外重組后，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，這個(gè)群體受體菌的群體中儲(chǔ)存，這個(gè)群體就稱為該生物基因組文庫。其目就稱為該生物基因組文庫。其目的是分離有用的目的基因和保存的是分離有用的目的基因和保存某種生物的全部基因。某種生物的全部基因。一、目的基因的獲取（一）從基因文庫中直接獲取1.1.基因文庫基因文庫第2頁/共22頁第二頁，共23頁。一、

3、目的(md)(md)基因的獲?。ㄒ唬幕蛭膸熘兄苯?zhji)獲取cDNA(cDNA(互補(bǔ)互補(bǔ)DNA)DNA)：是由生物的某一特定器官或特是由生物的某一特定器官或特定發(fā)育時(shí)期細(xì)胞內(nèi)的定發(fā)育時(shí)期細(xì)胞內(nèi)的mRNAmRNA經(jīng)體經(jīng)體外反轉(zhuǎn)錄后形成的互補(bǔ)外反轉(zhuǎn)錄后形成的互補(bǔ)DNADNA片段，片段，與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)(y (y )受體菌群中，這個(gè)受體菌群受體菌群中，這個(gè)受體菌群就叫做這種生物的就叫做這種生物的cDNAcDNA文庫文庫 2)cDNA2)cDNA文庫文庫 (cDNA library(cDNA library) )基因重組基因重組反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶mRNAmRNAcDN

4、AcDNA第3頁/共22頁第三頁，共23頁。一、目的基因(jyn)的獲取（一）從基因文庫中直接(zhji)獲取按照外源按照外源DNA片段的來源：片段的來源：從特定從特定(tdng)組織提取的染色體基因組組織提取的染色體基因組DNA -基因組基因組DNA文庫（總）文庫（總）mRNA反轉(zhuǎn)錄成的反轉(zhuǎn)錄成的cDNA拷貝拷貝-cDNA文庫（部分）文庫（部分）基因文庫的目的為了在不知目的基因序列的情況下，便于獲得所需的目的基因。為了在不知目的基因序列的情況下，便于獲得所需的目的基因?；蛭膸斓姆诸惖?頁/共22頁第四頁，共23頁。依據(jù)：目的基因的有關(guān)信息。依據(jù)：目的基因的有關(guān)信息。如：根據(jù)基因的核苷酸序列

5、如：根據(jù)基因的核苷酸序列 基因的功能基因的功能 基因在染色體上的位置基因在染色體上的位置(wi zhi)(wi zhi) 基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNAmRNA 基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性從基因(jyn)文庫中得到目的基因(jyn)的方法第5頁/共22頁第五頁，共23頁。2 2、利用、利用PCRPCR技術(shù)技術(shù)(jsh)(jsh)擴(kuò)增目的基擴(kuò)增目的基因因第6頁/共22頁第六頁，共23頁。參與的組分參與的組分在在DNA復(fù)制中的作用復(fù)制中的作用解旋酶解旋酶打開打開DNA雙鏈雙鏈DNA母鏈母鏈提供提供DNA復(fù)制的模板復(fù)制的模板4種脫氧核苷酸種脫氧核苷酸合成子鏈的原料合成子鏈

6、的原料DNA聚合酶聚合酶催化合成催化合成DNA子鏈子鏈引物引物使使DNA聚合酶能夠從引物的聚合酶能夠從引物的3端開始連接脫氧核苷酸端開始連接脫氧核苷酸生物體內(nèi)DNA分子(fnz)復(fù)制的條件第7頁/共22頁第七頁，共23頁。DNADNA聚合酶的特性聚合酶的特性(txng)(txng) DNA DNA聚合酶不能從頭開始合聚合酶不能從頭開始合成成DNADNA，而只能從，而只能從33端延伸端延伸DNADNA鏈。因此鏈。因此(ync)(ync)，DNADNA復(fù)制需要復(fù)制需要引物。引物。小資料：引物是一小(y xio)段DNA或RNA，它能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)。用于PCR的引物長度通常為20

7、30個(gè)核苷酸。第8頁/共22頁第八頁，共23頁。第9頁/共22頁第九頁，共23頁。ATGCATGC5，端含磷酸，端含磷酸(ln sun)基團(tuán)基團(tuán)3，端含羥基，端含羥基(qingj)3，端端5，端端第10頁/共22頁第十頁，共23頁。355DNA的復(fù)制(fzh)方向第11頁/共22頁第十一頁，共23頁。DNA DNA 分子分子(fnz)(fnz)的熱變性原的熱變性原理理DNA雙鏈雙鏈單鏈單鏈變性變性(binxng)（加熱（加熱80-100）復(fù)性復(fù)性(f xn)（緩（緩慢冷卻）慢冷卻）變性的目的：變性的目的：復(fù)性的目的：復(fù)性的目的：解開雙鏈解開雙鏈有利于引物與兩條單鏈結(jié)合有利于引物與兩條單鏈結(jié)合

8、在在80100 80100 的溫度范圍內(nèi)，的溫度范圍內(nèi)，DNADNA的雙螺旋結(jié)的雙螺旋結(jié)構(gòu)將解體，雙鏈分開，這個(gè)過程稱為構(gòu)將解體，雙鏈分開，這個(gè)過程稱為變性變性 PCR原理第12頁/共22頁第十二頁，共23頁。第13頁/共22頁第十三頁，共23頁。 高溫解決了打開高溫解決了打開(d ki)(d ki)雙鏈的問題，雙鏈的問題，但是，又導(dǎo)致但是，又導(dǎo)致DNADNA聚合酶失活的問題，耐聚合酶失活的問題，耐高溫的高溫的Taq DNATaq DNA聚合酶解決了高溫導(dǎo)致聚合酶解決了高溫導(dǎo)致DNADNA聚合酶失活的問題，促成了聚合酶失活的問題，促成了PCRPCR技術(shù)技術(shù)的自動(dòng)化。的自動(dòng)化。第14頁/共22頁

9、第十四頁，共23頁。PCR PCR 反應(yīng)反應(yīng)(fnyng)(fnyng)的條件的條件DNADNA模板；模板；分別與兩條模板鏈相結(jié)合的兩種引物（分別與兩條模板鏈相結(jié)合的兩種引物（引物引物和引物和引物）；）；四種脫氧核苷酸；四種脫氧核苷酸；耐高溫的聚合酶；耐高溫的聚合酶；控制溫度控制溫度(wnd)(wnd)，但不需解旋酶；，但不需解旋酶；需要在一定的緩沖液中進(jìn)行。需要在一定的緩沖液中進(jìn)行。第15頁/共22頁第十五頁，共23頁。1 1、PCRPCR的反應(yīng)的反應(yīng)(fnyng)(fnyng)步驟步驟 PCR PCR一般一般(ybn)(ybn)經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)可以分為三個(gè)步驟

10、次循環(huán)可以分為三個(gè)步驟變性、復(fù)性和變性、復(fù)性和延伸。延伸。 循環(huán)之前的一次預(yù)變性，以便增加大分子模板(mbn)DNA徹底變性的概率。PCRPCR的反應(yīng)過程的反應(yīng)過程第16頁/共22頁第十六頁，共23頁。950C變性550C復(fù)性720C延伸第17頁/共22頁第十七頁，共23頁。 DNA DNA聚合酶只能聚合酶只能(zh nn)(zh nn)特異性地復(fù)制處特異性地復(fù)制處于兩個(gè)引物之間的于兩個(gè)引物之間的DNADNA序列，使這段固定長度序列，使這段固定長度的序列呈指數(shù)擴(kuò)增。的序列呈指數(shù)擴(kuò)增。從第二輪循環(huán)開始，上一次循環(huán)的產(chǎn)物也作從第二輪循環(huán)開始，上一次循環(huán)的產(chǎn)物也作為模板參與反應(yīng)為模板參與反應(yīng)(fny

11、ng)(fnyng)，并且由引物，并且由引物延延伸而成的伸而成的DNADNA單鏈會(huì)與引物單鏈會(huì)與引物結(jié)合，進(jìn)行結(jié)合，進(jìn)行DNADNA的延伸的延伸2 2、PCRPCR的反應(yīng)的反應(yīng)(fnyng)(fnyng)結(jié)果結(jié)果第18頁/共22頁第十八頁，共23頁。第19頁/共22頁第十九頁，共23頁。第20頁/共22頁第二十頁，共23頁。3、人工合成(rn n h chn)法：基因(jyn)較小，核苷酸序列已知，可以利用DNA合成儀人工合成第21頁/共22頁第二十一頁，共23頁。謝謝您的觀看(gunkn)！第22頁/共22頁第二十二頁，共23頁。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)一、目的基因的獲取。1)基因組文庫(Genomic library)。mRN