ABI熒光定量PCR中文說明書與培訓資料 ABI Prism7300安裝培訓

1、ABI Prism7300/7500實時定量PCR儀用戶培訓講義美國應用生物系統(tǒng)中國公司廣州代表處2005年 用戶培訓流程：4、報修請撥打全國的維護中心 ：8008100192。1、安裝完畢，工程師按照SOP培訓儀器和軟件的操作；2、具備一定經驗的用戶，建議參加AB公司的培訓班，接受應用 及故障排除培訓；培訓班在北京、上海、廣州等地定期舉行，每臺儀器有兩個免費名 額；培訓班日程表每半年更新一次，可以到AB公司的網站上查詢：。3、鼓勵用戶與AB公司的應用專家直接聯系，協(xié)商進行現場標準 品和未知樣品的實驗培訓；AB產品線的聯系方法：陳云地407，8008203939培訓

2、內容定量PCR的化學原理傳統(tǒng)PCR的過程：三個步驟一、變性：DNA雙鏈結構被分開；94C-96C二、復性：引物結合到DNA鏈上；40C-65C三、延伸：新DNA合成。72C傳統(tǒng)PCR的過程：24816傳統(tǒng)的檢測方法使用的是“終點法：即在反映完成以后再進行檢測，如跑膠。傳統(tǒng)PCR的檢測方法：實時熒光定量PCR實時每個循環(huán)進行測量。熒光在反響體系中參加某些熒光物質，熒光物質所發(fā)出的信號的強度與體系中的DNA的多少有一定的對應關系，并且信號強度能隨著體系中的DNA濃度的改變而改變。PCR類似于傳統(tǒng)的PCR。入射光染料分子出射光熒光物質在接受了外界光的照射后，能夠向外發(fā)射波長比入射光長的光探針法：Hi

3、gh Energy moleculeLow energy molecule能量不同的兩個染料分子在空間距離上很接近時，在受到外界光照射的時候，能量高的分子就會將吸收到的能量轉移至能量低的分子，使本身能量降低。由于本身能量已經降低，高能的分子就不會向外發(fā)光，所以，對于高能分子來說，光就好似是被淬滅了一樣。能量轉移：探針法：High Energy moleculeLow energy molecule探針法：當兩個染料分子在空間位置上距離很遠時，能量高的分子所吸收的能量就不能轉移至能量低的分子上，這樣，兩個分子就會各自向外發(fā)出自己特定波長的光。探針：一段DNA序列，能完全跟實驗的目標DNA中的一段

4、互補，兩端標上染料分子。探針法：每產生一個新的片段，就產生一個熒光分子探針法：1248熒光值的不斷增加，代表著體系里面的DNA量越來越多。染料法：染料法的優(yōu)缺點：實時定量PCR的結果計算所有的樣品里的DNA的量都是在按每個循環(huán)兩倍的速度增加；當所有的樣品的報告熒光的強度都達到某一個數值時，各個樣品所經歷過的循環(huán)數與樣品的起始濃度有關，起始濃度越高，所經歷的循環(huán)次數越少。未知樣品1：未知樣品2：濃度的樣品1：濃度的樣品2：濃度的樣品3：濃度的樣品4：濃度的樣品5：1250250050001000020000？各個樣品的熒光值都到達“200000時所經過的循環(huán)數：14151617181517濃度例

5、子：循環(huán)數濃度lg1250lg2500lg5000lg10000lg20000141516171815lg1000017lg2500例子：通過標準曲線，我們可以算出未知樣品的起始濃度是：未知樣品1：未知樣品2：2500100001517例子：ABI Prism 73007300的功能一覽：光源入射光濾光片半透鏡樣品架四色濾光片組檢測器7300光路圖光源入射光濾光片半透鏡樣品架五色濾光片組檢測器7500光路圖7300選用的熒光組合每個循環(huán)，儀器都會對透過四個濾光片的能量進行讀數，得到原始數據：電腦對原始數據進行處理，得到各種顏色的光的信號強度數據：Ct定義好了基線的start和end cycle，threshold后，軟件對每個樣品進行分析，得到了各個樣品的Ct值。線性圖