研究中常用熒光染料和探針學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1研究中常用熒光染料研究中常用熒光染料(rnlio)和探針和探針第一頁，共48頁。Page 22022-7-1Date第1頁/共48頁第二頁，共48頁。Page 32022-7-1Date第2頁/共48頁第三頁，共48頁。Page 42022-7-1Date第3頁/共48頁第四頁，共48頁。第4頁/共48頁第五頁，共48頁。Page 62022-7-1Date第5頁/共48頁第六頁，共48頁。Page 72022-7-1Daten發(fā)熒光量的測(cè)定對(duì)物質(zhì)定性、定量分析第6頁/共48頁第七頁，共48頁。Page 82022-7-1Date第7頁/共48頁第八頁，共48頁。Page 92022-

2、7-1Date第8頁/共48頁第九頁，共48頁。Page 102022-7-1Date第9頁/共48頁第十頁，共48頁。Page 112022-7-1Date第10頁/共48頁第十一頁，共48頁。Page 122022-7-1Date第11頁/共48頁第十二頁，共48頁。Page 132022-7-1Date第12頁/共48頁第十三頁，共48頁。Page 142022-7-1Date第13頁/共48頁第十四頁，共48頁。Page 152022-7-1Date第14頁/共48頁第十五頁，共48頁。Page 162022-7-1Date試劑試劑濃度溫度濃度溫度時(shí)間設(shè)定時(shí)間設(shè)定中性緩沖甲醛中性緩沖甲

3、醛乙醇乙醇乙醇乙醇乙醇乙醇過夜過夜無水乙醇無水乙醇無水乙醇無水乙醇二甲苯無水乙醇二甲苯無水乙醇體積比為：體積比為：二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯石蠟石蠟石蠟石蠟 石蠟石蠟 第15頁/共48頁第十六頁，共48頁。Page 172022-7-1Date第16頁/共48頁第十七頁，共48頁。Page 182022-7-1Date第17頁/共48頁第十八頁，共48頁。Page 192022-7-1Date第18頁/共48頁第十九頁，共48頁。Page 202022-7-1Date抗原。第19頁/共48頁第二十頁，共48頁。Page 212022-7-1Date。n由于激光共聚焦顯微鏡觀察采集圖象很快，所以一

4、般(ybn)用PBS或生理鹽水也可以。第20頁/共48頁第二十一頁，共48頁。Page 222022-7-1Date第21頁/共48頁第二十二頁，共48頁。Page 232022-7-1Date熒光熒光(ynggung)組織細(xì)胞染色（熒光組織細(xì)胞染色（熒光(ynggung)探針檢測(cè)，熒光探針檢測(cè)，熒光(ynggung)標(biāo)記檢測(cè)）標(biāo)記檢測(cè)）第22頁/共48頁第二十三頁，共48頁。Page 242022-7-1Date第23頁/共48頁第二十四頁，共48頁。Page 252022-7-1Date第24頁/共48頁第二十五頁，共48頁。Page 262022-7-1DateFluorochromes

5、 and StainsnDAPI, Hoechst, SYTO 16: semipermeant and permeant DNA stain, apoptosisnGFP: used in living systems as a gene/protein reporternLucifer yellow, Fluorogold: neuronal tracernMitoFluor green, MitoTracker green: mitichondrial marker第25頁/共48頁第二十六頁，共48頁。Page 272022-7-1DatenDiI: lipophilic membra

6、ne markernRhodamine 6G, MitoTracker red: mitochondrial and ER markernPropidium iodide, Ethidium Bromide, SYTO 25: impermeant and permeant nucleic acid stain第26頁/共48頁第二十七頁，共48頁。TO-PRO-3Alexa 488Alexa 568Human colon cryptChristine Anderson,Laboratory of Prof. Ray White,Hunstsman Cancer Institute, Utah

7、第27頁/共48頁第二十八頁，共48頁。Page 292022-7-1Date第28頁/共48頁第二十九頁，共48頁。Page 302022-7-1DatePhysiology ProbesnIndo-1, Fura-2: dual emission or dual excitation calcium probenCalcium green, Fluo-3: single wavelength calcium probenBCECF: single or dual excitation wavelength pH probenJC-1: potential sensitive mitocho

8、ndrial dual emissionnCalcein: volume changes, gap junctions, liposomes, permeabilitynLysosensor Blue DND-192, LysoSensor Green DND-153: lysosomal markernNBD-C6 ceramide: Golgi markernRhodamine-123: mitochondrial marker第29頁/共48頁第三十頁，共48頁。Page 312022-7-1DatenSNARF: pH indicator emission rationFM1-43,

9、RH-414: plasma membranenFura red: calcium indicator, decreased fluorescence on bindingnDIC18(3), DIC16(3): ER markernLysoTracker Yellow DND-68: lysosomal markernMitoTracker Orange, Rhodamine B Hexyl ester, Tetramethylrosamine: mitochondrial marker第30頁/共48頁第三十一頁，共48頁。Page 322022-7-1DateMouse; hippoca

10、mpal neurons;fluorescence of GFPShigeo OkabeDepartment of Anatomy and Cell BiologyTokyo Medical and Dental University第31頁/共48頁第三十二頁，共48頁。Page 332022-7-1Date第32頁/共48頁第三十三頁，共48頁。Page 342022-7-1Date第33頁/共48頁第三十四頁，共48頁。Page 352022-7-1Date第34頁/共48頁第三十五頁，共48頁。Page 362022-7-1Date第35頁/共48頁第三十六頁，共48頁。Page 37

11、2022-7-1Date第36頁/共48頁第三十七頁，共48頁。Page 382022-7-1Date第37頁/共48頁第三十八頁，共48頁。Page 392022-7-1Date第38頁/共48頁第三十九頁，共48頁。Page 402022-7-1Date第39頁/共48頁第四十頁，共48頁。Page 412022-7-1Date第40頁/共48頁第四十一頁，共48頁。Page 422022-7-1Date第41頁/共48頁第四十二頁，共48頁。Page 432022-7-1Date第42頁/共48頁第四十三頁，共48頁。Page 442022-7-1Date第43頁/共48頁第四十四頁，共

12、48頁。Page 452022-7-1Date第44頁/共48頁第四十五頁，共48頁。Page 462022-7-1Date3. GFP 綠色熒光蛋白綠色熒光蛋白GFP的的發(fā)現(xiàn)的的發(fā)現(xiàn)(fxin)：60年代，年代，Shimomura等首先從水母中分離出一種水母發(fā)光等首先從水母中分離出一種水母發(fā)光蛋白蛋白(aequoren)，該蛋白與鈣和腸腔素結(jié)合后可產(chǎn)生藍(lán)色熒光。然而水母整體幾，該蛋白與鈣和腸腔素結(jié)合后可產(chǎn)生藍(lán)色熒光。然而水母整體幾提取的顆粒都呈綠色，后經(jīng)證實(shí)在水母體內(nèi)還存在另外一種發(fā)光蛋白即綠色熒光提取的顆粒都呈綠色，后經(jīng)證實(shí)在水母體內(nèi)還存在另外一種發(fā)光蛋白即綠色熒光蛋白蛋白GFP, 后經(jīng)研究表明，在水母體內(nèi)后經(jīng)研究表明，在水母體內(nèi)Ca2+和腸腔素與水母發(fā)光蛋白結(jié)合后，水和腸腔素與水母發(fā)光蛋白結(jié)合后，水母發(fā)光蛋白產(chǎn)生藍(lán)色熒光，母發(fā)光蛋白產(chǎn)生