研究中常用熒光染料和探針學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1研究中常用熒光染料研究中常用熒光染料(rnlio)和探針和探針第一頁(yè)，共48頁(yè)。Page 22022-7-1Date第1頁(yè)/共48頁(yè)第二頁(yè)，共48頁(yè)。Page 32022-7-1Date第2頁(yè)/共48頁(yè)第三頁(yè)，共48頁(yè)。Page 42022-7-1Date第3頁(yè)/共48頁(yè)第四頁(yè)，共48頁(yè)。第4頁(yè)/共48頁(yè)第五頁(yè)，共48頁(yè)。Page 62022-7-1Date第5頁(yè)/共48頁(yè)第六頁(yè)，共48頁(yè)。Page 72022-7-1Daten發(fā)熒光量的測(cè)定對(duì)物質(zhì)定性、定量分析第6頁(yè)/共48頁(yè)第七頁(yè)，共48頁(yè)。Page 82022-7-1Date第7頁(yè)/共48頁(yè)第八頁(yè)，共48頁(yè)。Page 92022-

2、7-1Date第8頁(yè)/共48頁(yè)第九頁(yè)，共48頁(yè)。Page 102022-7-1Date第9頁(yè)/共48頁(yè)第十頁(yè)，共48頁(yè)。Page 112022-7-1Date第10頁(yè)/共48頁(yè)第十一頁(yè)，共48頁(yè)。Page 122022-7-1Date第11頁(yè)/共48頁(yè)第十二頁(yè)，共48頁(yè)。Page 132022-7-1Date第12頁(yè)/共48頁(yè)第十三頁(yè)，共48頁(yè)。Page 142022-7-1Date第13頁(yè)/共48頁(yè)第十四頁(yè)，共48頁(yè)。Page 152022-7-1Date第14頁(yè)/共48頁(yè)第十五頁(yè)，共48頁(yè)。Page 162022-7-1Date試劑試劑濃度溫度濃度溫度時(shí)間設(shè)定時(shí)間設(shè)定中性緩沖甲醛中性緩沖甲

3、醛乙醇乙醇乙醇乙醇乙醇乙醇過(guò)夜過(guò)夜無(wú)水乙醇無(wú)水乙醇無(wú)水乙醇無(wú)水乙醇二甲苯無(wú)水乙醇二甲苯無(wú)水乙醇體積比為：體積比為：二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯石蠟石蠟石蠟石蠟 石蠟石蠟 第15頁(yè)/共48頁(yè)第十六頁(yè)，共48頁(yè)。Page 172022-7-1Date第16頁(yè)/共48頁(yè)第十七頁(yè)，共48頁(yè)。Page 182022-7-1Date第17頁(yè)/共48頁(yè)第十八頁(yè)，共48頁(yè)。Page 192022-7-1Date第18頁(yè)/共48頁(yè)第十九頁(yè)，共48頁(yè)。Page 202022-7-1Date抗原。第19頁(yè)/共48頁(yè)第二十頁(yè)，共48頁(yè)。Page 212022-7-1Date。n由于激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察采集圖象很快，所以一

4、般(ybn)用PBS或生理鹽水也可以。第20頁(yè)/共48頁(yè)第二十一頁(yè)，共48頁(yè)。Page 222022-7-1Date第21頁(yè)/共48頁(yè)第二十二頁(yè)，共48頁(yè)。Page 232022-7-1Date熒光熒光(ynggung)組織細(xì)胞染色（熒光組織細(xì)胞染色（熒光(ynggung)探針檢測(cè)，熒光探針檢測(cè)，熒光(ynggung)標(biāo)記檢測(cè)）標(biāo)記檢測(cè)）第22頁(yè)/共48頁(yè)第二十三頁(yè)，共48頁(yè)。Page 242022-7-1Date第23頁(yè)/共48頁(yè)第二十四頁(yè)，共48頁(yè)。Page 252022-7-1Date第24頁(yè)/共48頁(yè)第二十五頁(yè)，共48頁(yè)。Page 262022-7-1DateFluorochromes

5、 and StainsnDAPI, Hoechst, SYTO 16: semipermeant and permeant DNA stain, apoptosisnGFP: used in living systems as a gene/protein reporternLucifer yellow, Fluorogold: neuronal tracernMitoFluor green, MitoTracker green: mitichondrial marker第25頁(yè)/共48頁(yè)第二十六頁(yè)，共48頁(yè)。Page 272022-7-1DatenDiI: lipophilic membra

6、ne markernRhodamine 6G, MitoTracker red: mitochondrial and ER markernPropidium iodide, Ethidium Bromide, SYTO 25: impermeant and permeant nucleic acid stain第26頁(yè)/共48頁(yè)第二十七頁(yè)，共48頁(yè)。TO-PRO-3Alexa 488Alexa 568Human colon cryptChristine Anderson,Laboratory of Prof. Ray White,Hunstsman Cancer Institute, Utah

7、第27頁(yè)/共48頁(yè)第二十八頁(yè)，共48頁(yè)。Page 292022-7-1Date第28頁(yè)/共48頁(yè)第二十九頁(yè)，共48頁(yè)。Page 302022-7-1DatePhysiology ProbesnIndo-1, Fura-2: dual emission or dual excitation calcium probenCalcium green, Fluo-3: single wavelength calcium probenBCECF: single or dual excitation wavelength pH probenJC-1: potential sensitive mitocho

8、ndrial dual emissionnCalcein: volume changes, gap junctions, liposomes, permeabilitynLysosensor Blue DND-192, LysoSensor Green DND-153: lysosomal markernNBD-C6 ceramide: Golgi markernRhodamine-123: mitochondrial marker第29頁(yè)/共48頁(yè)第三十頁(yè)，共48頁(yè)。Page 312022-7-1DatenSNARF: pH indicator emission rationFM1-43,

9、RH-414: plasma membranenFura red: calcium indicator, decreased fluorescence on bindingnDIC18(3), DIC16(3): ER markernLysoTracker Yellow DND-68: lysosomal markernMitoTracker Orange, Rhodamine B Hexyl ester, Tetramethylrosamine: mitochondrial marker第30頁(yè)/共48頁(yè)第三十一頁(yè)，共48頁(yè)。Page 322022-7-1DateMouse; hippoca

10、mpal neurons;fluorescence of GFPShigeo OkabeDepartment of Anatomy and Cell BiologyTokyo Medical and Dental University第31頁(yè)/共48頁(yè)第三十二頁(yè)，共48頁(yè)。Page 332022-7-1Date第32頁(yè)/共48頁(yè)第三十三頁(yè)，共48頁(yè)。Page 342022-7-1Date第33頁(yè)/共48頁(yè)第三十四頁(yè)，共48頁(yè)。Page 352022-7-1Date第34頁(yè)/共48頁(yè)第三十五頁(yè)，共48頁(yè)。Page 362022-7-1Date第35頁(yè)/共48頁(yè)第三十六頁(yè)，共48頁(yè)。Page 37

11、2022-7-1Date第36頁(yè)/共48頁(yè)第三十七頁(yè)，共48頁(yè)。Page 382022-7-1Date第37頁(yè)/共48頁(yè)第三十八頁(yè)，共48頁(yè)。Page 392022-7-1Date第38頁(yè)/共48頁(yè)第三十九頁(yè)，共48頁(yè)。Page 402022-7-1Date第39頁(yè)/共48頁(yè)第四十頁(yè)，共48頁(yè)。Page 412022-7-1Date第40頁(yè)/共48頁(yè)第四十一頁(yè)，共48頁(yè)。Page 422022-7-1Date第41頁(yè)/共48頁(yè)第四十二頁(yè)，共48頁(yè)。Page 432022-7-1Date第42頁(yè)/共48頁(yè)第四十三頁(yè)，共48頁(yè)。Page 442022-7-1Date第43頁(yè)/共48頁(yè)第四十四頁(yè)，共

12、48頁(yè)。Page 452022-7-1Date第44頁(yè)/共48頁(yè)第四十五頁(yè)，共48頁(yè)。Page 462022-7-1Date3. GFP 綠色熒光蛋白綠色熒光蛋白GFP的的發(fā)現(xiàn)的的發(fā)現(xiàn)(fxin)：60年代，年代，Shimomura等首先從水母中分離出一種水母發(fā)光等首先從水母中分離出一種水母發(fā)光蛋白蛋白(aequoren)，該蛋白與鈣和腸腔素結(jié)合后可產(chǎn)生藍(lán)色熒光。然而水母整體幾，該蛋白與鈣和腸腔素結(jié)合后可產(chǎn)生藍(lán)色熒光。然而水母整體幾提取的顆粒都呈綠色，后經(jīng)證實(shí)在水母體內(nèi)還存在另外一種發(fā)光蛋白即綠色熒光提取的顆粒都呈綠色，后經(jīng)證實(shí)在水母體內(nèi)還存在另外一種發(fā)光蛋白即綠色熒光蛋白蛋白GFP, 后經(jīng)研究表明，在水母體內(nèi)后經(jīng)研究表明，在水母體內(nèi)Ca2+和腸腔素與水母發(fā)光蛋白結(jié)合后，水和腸腔素與水母發(fā)光蛋白結(jié)合后，水母發(fā)光蛋白產(chǎn)生藍(lán)色熒光，母發(fā)光蛋白產(chǎn)生