HIV艾滋病抗體實室檢測方法HIV上崗證培訓ppt課件

1、主要內(nèi)容 HIV檢測普通情況：窗口期、檢測樣本及流程 關(guān)于樣本實驗室操作：采集、處置、檢測、轉(zhuǎn)運 常用篩查方法艾滋病檢測意義艾滋?。河绊懭祟惏部档娜蛐詾碾y我國艾滋病的流行情勢也日趨嚴峻據(jù)估算，我國大約只需10%艾滋病病毒感染者被發(fā)現(xiàn)，其他90%處于未知形狀，這對相關(guān)的預防、治療和關(guān)懷任務帶來極大挑戰(zhàn)要找到尚未發(fā)現(xiàn)的感染者，實驗室檢測任務必不可少感染HIV后的血清學變化HIV RNA濃度濃度窗口期 窗口期：機體感染HIV到能檢出抗體之間的時期 第三代HIV抗體檢測試劑盒能使大部分感染者在4-8周后檢測出HIV抗體 假設(shè)到12周即3個月仍檢測不出抗體，根本可以排除HIV感染，對抗體檢測呈不確定反

2、響或高危行為后高度疑心有感染危險者，可再隨訪3個月后復檢。必要時可做HIV-1 p24抗原或HIV核酸檢測作為輔助診斷 檢測樣品： 血液、組織液、排泄物、組織、器官、精液以及有關(guān)血液制品、生物組織或其它物品等 進展艾滋病病毒HIV或其相應標志物的實驗室測定，包括HIV分別、抗原檢測、核酸檢測和抗體檢測等 目前用于HIV診斷的常規(guī)方法為血液中HIV抗體檢測，我國目前檢測血液中HIV抗體的常規(guī)檢測程序分為篩查實驗包括初篩和復檢和確認實驗 HIV抗體篩查實驗流程圖樣本樣本陽性反響陽性反響一陰一陽一陰一陽陰性反響陰性反響篩查檢測篩查檢測均陽性反響均陽性反響反復檢測反復檢測均陰性反響均陰性反響送確認實驗

3、室進展確認送確認實驗室進展確認陰性報告陰性報告篩查試劑篩查試劑原有試劑加另外一種篩查試劑原有試劑加另外一種篩查試劑設(shè)備要求設(shè)備要求 主要儀器設(shè)備包括 生物平安柜、離心機、酶標讀數(shù)儀、洗板機、移液器、溫箱/水浴箱、冰箱、高壓蒸汽滅菌器 所用的儀器應該校準，每次運用后應做記錄 為保證人員平安，實驗室內(nèi)的耗材最好運用塑料制品標本要求標本要求 1種類：血清或血漿(肝素、枸櫞酸鈉或EDTA抗凝)。 2量： 靜脈血2ml，常規(guī)分別血清或血漿。 3. 3000轉(zhuǎn)分別心10分鐘。 4保管：分別后7d之內(nèi)測定的血清或血漿標本可放置于 28C保管，超越7d在-20C保管。試劑要求試劑要求我國規(guī)定HIV抗體篩查試劑

4、必需是：HIV-1/2混合型經(jīng)國家食品藥品監(jiān)視管理局注冊同意批批檢合格在有效期內(nèi)引薦運用臨床質(zhì)量評價敏感性和特異性高的試劑 常用篩查方法目前，國內(nèi)常用的HIV抗體篩查實驗方法有：酶聯(lián)免疫吸附實驗ELISA顆粒凝集實驗PA快速實驗雙抗原夾心法原理固相包被抗原待測抗體IgG、IgM酶標志抗原底物試劑盒組成雙抗原夾心法ELISA1.HIV酶標板 2.HIV-1型陽性對照 3.HIV-2型陽性對照 4.HIV陰性對照 5.HIV酶標試劑 6.濃縮洗滌液 7.顯色劑A液 8.顯色劑B液 9.終止液操作程序 - 1 閱讀規(guī)范操作程序，嚴厲按照試劑闡明書操作將試劑盒及樣品放置在室溫半

5、小時以上1預備酶標板，小心撕去酶標板條上的封條2配液：將50ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋至1000ml備用。3編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設(shè)陰性對照3孔、陽性對照1型,2型各1孔、空白1孔。4加樣：分別在相應孔中參與參與100 l待檢樣品及陰、陽性對照、外部質(zhì)控對照。操作程序 - 25溫育：用封板膜封板后置371溫育601分鐘。 6洗滌：小心將封板膜揭掉，運用洗板機吸干孔內(nèi)液體，用洗滌液洗滌5遍，拍干。7加酶：每孔參與酶標試劑100l，空白孔除外。8溫育：用封板膜封板后置371溫育301分鐘。9)洗滌：小心將封板膜揭掉，運用洗板機吸干孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌5遍，最后一

6、次盡量拍干。操作程序 - 310顯色：每孔參與顯色劑A、B液各50l，悄然振蕩混勻，用封板膜封板后置371避光顯色301分鐘。12測定：每孔加終止液50l，悄然振蕩混勻，設(shè)定酶標儀波長于450nm處建議用雙波長檢測，可不設(shè)空白，在15分鐘內(nèi)測定各孔OD值。13用酶標儀測定OD值，打印結(jié)果實驗結(jié)果判別1 檢查陰性對照和陽性對照的OD值能否符合要求，判別本次實驗能否成立，并計算cut off值結(jié)果斷定:1.陰性對照的正常范圍： 正常情況下，陰性對照孔OD值0.10。2.陽性對照的正常范圍： 正常情況下，陽性對照孔OD值0.80。3.臨界值CUTOFF計算： 臨界值=陰性對照孔OD均值Nc + 0.

7、12。實驗結(jié)果判別24.陽性斷定：樣品OD值臨界值CUTOFF者為HIV 抗體陽性 留意：初試陽性標本應重新取樣進展雙孔復檢，復試陽性者應按“全國HIV檢測管理規(guī)范送HIV確證明驗室進展確證明驗。5.陰性斷定：樣品OD值臨界值CUTOFF者為HIV抗體陰性。質(zhì)控要求質(zhì)控要求 一.室內(nèi)質(zhì)控： 1. 在每次HIV實驗中必需包含內(nèi)部對照質(zhì)控血清試劑盒配套質(zhì)控: HIVI抗體、HIV2抗體陽性質(zhì)控、HIV陰性質(zhì)控及外部對照質(zhì)控血清自制或購買。 2.一切質(zhì)控品與標本同時參與HIV試劑的微孔板內(nèi)，最終質(zhì)控結(jié)果符合實驗要求，那么實驗結(jié)果可報告；否那么應重新檢測標本。 檢測過程中的問題及對策ELISA實驗一切的孔均無色 漏加陽性對照漏加陽性對照 酶標志物失效酶標志物失效 底物失效：應避光保管底物失效：應避光保管 酶聯(lián)板抗原失效酶聯(lián)板抗原失效ELISA實驗一切的孔均顯色 洗板不徹底，孔內(nèi)殘留未結(jié)合的酶標志物。洗板不徹底，孔內(nèi)殘留未結(jié)合的酶標志物。 容器不清潔，有殘留物質(zhì)：酶受污染。容器不清潔，有殘留物質(zhì)：酶受污染。 底物失效，在參與之前就曾經(jīng)顯色。底物失效，在參與之前就曾經(jīng)顯色。HIVHIV抗體篩查檢測及報告程序抗體篩查檢測及報告程序1.篩查-