章甾體激素類藥物的分析實(shí)用教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1章甾體激素類藥物章甾體激素類藥物(yow)的分析的分析第一頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-42主要(zhyo)可供分析基團(tuán)：1. 3-酮，C20酮基3.C17:CCH2OHOOH2. C11： COH腎上腺皮質(zhì)激素(天然(tinrn)產(chǎn)物或天然(tinrn)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)改造產(chǎn)物)：氫化可的松CH3HHOCH3HOHHHOOHO3111720醋酸地塞米松CH3HHOCH3HOHHFOOOCH3HCH3O1239111720CH3HHOCH3HHFOOHOOHH12391120曲安西龍CH3HHOCH3HOHHFOOOCH3HPONaONaO1239111720地塞米松磷酸鈉地塞米松(d si

2、m sn)磷酸鈉：增強(qiáng)水溶性氫化可的松：天然皮質(zhì)激素醋酸地塞米松：肌注延長(zhǎng)作用時(shí)間第1頁(yè)/共38頁(yè)第二頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-43雄性激素及蛋白同化激素(天然產(chǎn)物或天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)(jigu)改造產(chǎn)物)：雄性激素同時(shí)具有蛋白同化激素作用，經(jīng)結(jié)構(gòu)(jigu)改造后，雄性激素作用減弱，同化作用保留或增強(qiáng)，成為蛋白同化激素。CH3HCH3OHCH3HHO31710甲睪酮CH3HCH3OHHHO317CH3O10丙酸睪酮HHCH3OHHHO317H2CO10苯丙酸諾龍結(jié)構(gòu)特點(diǎn)(tdin)：1. 3-酮基；2. C17： 有羥基或酯基丙酸睪酮：C17酯化后延長(zhǎng)作用(zuyng)時(shí)間蛋白同化激素蛋白同化

3、激素雄性激素雄性激素雄性激素：母核有19個(gè)碳原子蛋白同化激素：母核有18個(gè)碳原子C10一般無(wú)角甲基C17- 羥基或它形成的酯第2頁(yè)/共38頁(yè)第三頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-44孕激素 (天然產(chǎn)物或天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)(jigu)改造產(chǎn)物)：天然孕激素為黃體酮，口服無(wú)效，經(jīng)結(jié)構(gòu)(jigu)改造后得到口服有效及長(zhǎng)效衍生物。CH3HCH3OHHO317CH3OCH3CH3O醋酸甲地孕酮CH3HCH3HHHO317CH3O黃體酮結(jié)構(gòu)(jigu)特點(diǎn)：1. 3-酮基；2. C17： 有甲酮基 有些藥物有羥基或酯基 第3頁(yè)/共38頁(yè)第四頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-45雌性激素 (天然產(chǎn)物或天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)改造(g

4、izo)產(chǎn)物)：天然雌性激素為雌二醇，經(jīng)結(jié)構(gòu)改造(gizo)得到高效及長(zhǎng)效衍生物。HCH3OHCHHHO317ACH炔雌醇HCH3OHHHHHO317A雌二醇結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：1. A環(huán)為苯環(huán)(bn hun)2. 3-酚羥基；3. C17： 羥基 有些藥物有羥基成酯，或有炔基 第4頁(yè)/共38頁(yè)第五頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-46幾種甾體激素類藥物結(jié)構(gòu)的比較：皮質(zhì)激素：有21個(gè)碳原子，C17-酮醇基，或該醇基形成(xngchng)的磷酸酯或磷酸酯的二鈉鹽 雄性激素：母核有19個(gè)碳原子蛋白同化激素：母核有18個(gè)碳原子孕激素：母核有21個(gè)碳原子C17-甲酮基雌性激素 ：母核有18個(gè)碳原子A環(huán)為苯環(huán)，C17上

5、常有炔基同：C17- 羥基或它形成的酯異：C10一般無(wú)角甲基第5頁(yè)/共38頁(yè)第六頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-47制備(zhbi)衍生物測(cè)熔點(diǎn)光譜法色譜法 呈色反應(yīng)： 與強(qiáng)酸(qin sun)反應(yīng)(維生素D：醋酐+硫酸) 官能團(tuán)反應(yīng)化學(xué)鑒別法UVIRTLC HPLC第6頁(yè)/共38頁(yè)第七頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-48藥品名稱顏色加水稀釋后醋酸可的松黃或微帶橙色顏色消失溶液澄清氫化可的松氫化可的松棕黃至紅色并顯綠色熒光黃至橙黃，微帶綠色熒光，有少量絮狀沉淀潑尼松橙色黃至藍(lán)綠醋酸潑尼松橙色黃至藍(lán)綠潑尼松龍深紅色紅色消失，有灰色絮狀沉淀醋酸潑尼松龍玫瑰紅色紅色消失，有灰色絮狀沉淀地塞米松磷酸鈉黃或紅棕

6、色黃色絮狀沉淀炔雌醇炔雌醇橙紅色并顯黃綠色熒光玫瑰紅色絮狀沉淀炔雌醚橙紅色并顯黃綠色熒光紅色絮狀沉淀苯甲酸雌二醇黃綠色并顯藍(lán)色熒光淡橙色己酸羥孕酮微黃色由綠經(jīng)紅至帶藍(lán)熒光的紅紫色甾體激素與硫酸的呈色反應(yīng)操作簡(jiǎn)便，不同藥物可形成不同的顏色或熒光而能相互(xingh)區(qū)別，反應(yīng)靈敏，為各國(guó)藥典所應(yīng)用第7頁(yè)/共38頁(yè)第八頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-49CC6H5NNNNC6H5C6H5+Cl2e(H)CC6H5NNNNC6H5C6H5H氯化三苯四氮唑 (TTC)深紅色還可用于皮質(zhì)激素類藥物雜質(zhì)檢查(TLC)時(shí)的顯色劑，皮質(zhì)激素類藥物的含量(hnling)測(cè)定不同的甾體激素藥物(yow)有不同的官能團(tuán)

7、，利用官能團(tuán)反應(yīng)可區(qū)別不同藥物(yow)。1、C17- -醇酮基的呈色反應(yīng)醇酮基的呈色反應(yīng)腎上腺皮質(zhì)激素類腎上腺皮質(zhì)激素類 CH3HCH3HHOHO3111720第8頁(yè)/共38頁(yè)第九頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-4103、甲酮基的呈色反應(yīng)、甲酮基的呈色反應(yīng) 黃體酮與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)，顯藍(lán)紫色，可認(rèn)為是黃體酮的靈敏、專屬的鑒別反應(yīng)。其它分子結(jié)構(gòu)中含有甲酮基的甾體激素呈現(xiàn)黃體酮與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)，顯藍(lán)紫色，可認(rèn)為是黃體酮的靈敏、專屬的鑒別反應(yīng)。其它分子結(jié)構(gòu)中含有甲酮基的甾體激素呈現(xiàn)(chngxin)淡橙色或不顯色。淡橙色或不顯色。4、酚羥基的呈色反應(yīng)、酚羥基的呈色反應(yīng)(fnyng) 雌激素的雌激

8、素的C3位上有酚羥基，可與重氮苯磺酸反應(yīng)位上有酚羥基，可與重氮苯磺酸反應(yīng)(fnyng)生成紅色偶氮染料生成紅色偶氮染料(JP：苯甲酸雌二醇：苯甲酸雌二醇)。5、炔基的沉淀反應(yīng)、炔基的沉淀反應(yīng) 具有炔基炔基的甾體激素藥物(炔雌醇、炔諾酮等)，遇硝酸銀試液，即生成白色的炔化銀沉淀。 R-CCH + AgNO3 R-CCAg + HNO3還可用于含量測(cè)定還可用于含量測(cè)定CH3HCH3HHRO3111720O第9頁(yè)/共38頁(yè)第十頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-4116、鹵素的反應(yīng)、鹵素的反應(yīng) 對(duì)連接在對(duì)連接在C6,C9或其它或其它(qt)位置上的氟或氯進(jìn)行確認(rèn)。位置上的氟或氯進(jìn)行確認(rèn)。 (1)鹵素連接在母

9、核的環(huán)上：需用氧瓶燃燒法破壞，使有機(jī)鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)鹵素離子，再進(jìn)行鑒別鹵素連接在母核的環(huán)上：需用氧瓶燃燒法破壞，使有機(jī)鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)鹵素離子，再進(jìn)行鑒別(如地塞米松磷酸鈉，丙酸倍氯米松如地塞米松磷酸鈉，丙酸倍氯米松)。 (2)鹵素連接在側(cè)鏈上：可通過(guò)加熱水解方法產(chǎn)生鹵素離子，再進(jìn)行鑒別鹵素連接在側(cè)鏈上：可通過(guò)加熱水解方法產(chǎn)生鹵素離子，再進(jìn)行鑒別(如丙酸氯倍他索如丙酸氯倍他索)。CCDABC697、酯的反應(yīng)、酯的反應(yīng) 有些本類藥物，在有些本類藥物，在C17或或C21位上連接有酯基，可將其水解，產(chǎn)生相應(yīng)的羧酸，再根據(jù)羧酸的性質(zhì)進(jìn)行鑒別位上連接有酯基，可將其水解，產(chǎn)生相應(yīng)的羧酸，再根據(jù)羧酸的性質(zhì)進(jìn)行

10、鑒別(如醋酸如醋酸(c sun)潑尼松，己酸羥孕酮等潑尼松，己酸羥孕酮等)。CCDABC1721醋酸,在酸性(sun xn)條件下與乙醇生成醋酸乙酯，有香氣己酸，有特臭第10頁(yè)/共38頁(yè)第十一頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-412HO+COClKOHCOO+KCl+H2O炔雌醇m.p.201OCCH3O+2HONH2NCHOCH3NOH+2H2O黃體酮雙肟m.p.238第11頁(yè)/共38頁(yè)第十二頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-413UV：甾體激素類藥物有共軛結(jié)構(gòu)或有苯環(huán)，有紫外特征吸收，可規(guī)定其最大吸收波長(zhǎng)max，max處的吸收度，或某兩個(gè)波長(zhǎng)處吸收度的比值進(jìn)行鑒別(如中國(guó)藥典中丙酸倍氯米松的鑒別 )。

11、IR：對(duì)于本類藥物，幾乎(jh)所有藥物原料藥都采用IR進(jìn)行鑒別。第12頁(yè)/共38頁(yè)第十三頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-414第13頁(yè)/共38頁(yè)第十四頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-415第14頁(yè)/共38頁(yè)第十五頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-416其它(qt)甾體檢查第15頁(yè)/共38頁(yè)第十六頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-417TLC法：法：多數(shù)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)未知且與藥物結(jié)構(gòu)相似，用高低濃度對(duì)比法來(lái)檢查。多數(shù)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)未知且與藥物結(jié)構(gòu)相似，用高低濃度對(duì)比法來(lái)檢查。例：醋酸氟輕松中例：醋酸氟輕松中“有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)”檢查：檢查： 取本品，加三氯甲烷取本品，加三氯甲烷-甲醇（甲醇（9：1）溶解并制成每）溶解并制成每1

12、ml中約含中約含3mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取的溶液，作為供試品溶液；精密量取1ml，置，置50ml量瓶中，加三氯甲烷量瓶中，加三氯甲烷-甲醇（甲醇（9：1）稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。照薄層色譜法（附錄）稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。照薄層色譜法（附錄 B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5l，分別點(diǎn)于同一硅膠，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（甲醇（97：3）為展開劑，展開，晾干，在）為展開劑，展開，晾干，在105干燥干燥10分鐘，放冷，噴以堿性四氮唑藍(lán)試液，立即檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于分鐘，放冷，噴以堿性四氮唑

13、藍(lán)試液，立即檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于2個(gè)，其顏色與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較個(gè)，其顏色與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較(bjio)，不得更深。，不得更深。氫化可的松和雌二醇見課本氫化可的松和雌二醇見課本p252展開劑：不同比例的二氯甲烷展開劑：不同比例的二氯甲烷-乙醚乙醚-甲醇甲醇-水混合溶劑；苯水混合溶劑；苯-無(wú)水乙醇；二氯甲烷無(wú)水乙醇；二氯甲烷-甲醇甲醇-水；三氯甲烷水；三氯甲烷-甲醇等。甲醇等。顯色劑：堿性四氮唑藍(lán)試液；硫酸顯色劑：堿性四氮唑藍(lán)試液；硫酸-乙醇乙醇(2:8；1:1；3:7)；20%硫酸；硫酸；10%磷鉬酸磷鉬酸-乙醇液乙醇液第16頁(yè)/共38頁(yè)第十七頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7

14、-418例：黃體酮中“有關(guān)物質(zhì)”檢查：取本品適量，精密稱定，以甲醇溶解并稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取1ml，置50ml 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下(xin xi)的色譜條件，取對(duì)照溶液10l，注入液相色譜儀，調(diào)整檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的50%。再精密量取供試品溶液 與對(duì)照溶液 各10l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的1.5倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，不得多于1個(gè)。其峰面積不得大于對(duì)照溶液 主峰面積的3/4 。14.3時(shí)間(shjin)(min)14.322.2第17頁(yè)/共38頁(yè)第十八

15、頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-419游離磷酸鹽 對(duì)于地塞米松(d si m sn)磷酸鈉，倍他米松磷酸鈉來(lái)說(shuō)，二者都是在C21位上羥基與磷酸形成的磷酸酯二鈉鹽，在藥物的生產(chǎn)和貯存過(guò)程中可能引入磷酸鹽，因此，要對(duì)藥物中的游離磷酸鹽進(jìn)行檢查。例：地塞米松磷酸鈉中游離磷酸鹽檢查 精密稱取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml使溶解；另取標(biāo)準(zhǔn)磷酸鹽溶液精密稱取經(jīng)105 干燥2 小時(shí)的磷酸二氫鉀0.35 g ，置100ml量瓶中，加硫酸溶液(310)10ml 與水適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻；臨用時(shí)再稀釋10倍4.0ml，置另一25ml量瓶中，加水11ml；各精密加鉬酸銨硫酸試液2.5ml 與1-

16、氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液(取無(wú)水亞硫酸鈉5g、亞硫酸氫鈉94.3g 與1-氨基-2-萘酚-4-磺酸0.7g，充分混合，臨用時(shí)取此混合物1.5g加水10ml使溶解，必要時(shí)濾過(guò))1ml，加水至刻度，搖勻，在20放置3050分鐘。照紫外-可見分光光度法（附錄A），在740nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。供試品溶液的吸光度不得大于對(duì)照溶液的吸光度。 原理：磷酸鹽在酸性條件下與鉬酸銨反應(yīng)生成磷鉬酸銨，再被1-氨基-2萘酚-4-磺酸溶液還原，所得(su d)磷鉬酸藍(lán)在740nm有最大吸收。比較供試液與對(duì)照液的吸收度控制藥物中游離磷酸鹽的量。第18頁(yè)/共38頁(yè)第十九頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-420硒的檢查

17、醋酸氟輕松，醋酸地塞米松，醋酸曲安奈德等甾體激素在生產(chǎn)過(guò)程中用到二氧化硒脫氫。二氧化硒對(duì)人體有劇毒，故需檢查。 原理：先將藥物用氧瓶燃燒法有機(jī)破壞后，使硒轉(zhuǎn)化為高價(jià)氧化物(SeO3)，以硝酸(xio sun)溶液吸收；再用鹽酸羥胺將Se6+還原為Se4+；在pH2.0條件下，與二氨基萘試液作用，生成 4，5-苯并苯硒，被環(huán)己烷提取后，在378nm有最大吸收。 規(guī)定：供試液的吸光度不得大于硒對(duì)照溶液的吸光度。醋酸氟輕松(0.01%)醋酸地塞米松(0.005%)醋酸曲安奈德(0.005%)。第19頁(yè)/共38頁(yè)第二十頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-421有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定 在甾體激素類藥物合成過(guò)程中，用

18、到的有機(jī)溶劑種類(zhngli)多，數(shù)量也多，故在部分品種中要測(cè)定有機(jī)溶劑殘留量。例：ChP中地塞米松磷酸鈉中甲醇和丙酮的檢查(GC法) 取本品約0.16g，精密稱定，置10ml 量瓶中，精密加0.1(ml/ml)正丙醇(內(nèi)標(biāo)物質(zhì))溶液2ml，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取甲醇約7.9mg與丙酮約79mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，精密量取1ml，置10ml量瓶中，精密加內(nèi)標(biāo)溶液2ml，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取供試品溶液與對(duì)照品溶液，照殘留溶劑測(cè)定(cdng)法（附錄 P），用高分子多孔小球色譜柱(按正丙酮計(jì)算的理論板數(shù)大于700)，在柱溫1

19、50 測(cè)定(cdng)。含量丙酮不得超過(guò)5.0%(g/g)，并不得出現(xiàn)甲醇峰。 第20頁(yè)/共38頁(yè)第二十一頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-4221、HPLC法 2、UV法3、比色法異煙肼比色法四氮唑比色法Kober反應(yīng)(fnyng)比色法含量含量(hnling)測(cè)定測(cè)定第21頁(yè)/共38頁(yè)第二十二頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-423例：醋酸潑尼松龍的含量測(cè)定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(70:30)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)(bchng)為240nm。理論板數(shù)按醋酸潑尼松龍峰計(jì)算不低于3000，醋酸潑尼松龍峰和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取醋酸氟輕松

20、，加甲醇制成每1ml中含0.50mg的溶液，即得。 測(cè)定法 取本品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.50mg的溶液；精密量取該溶液與內(nèi)標(biāo)溶液各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取5l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取醋酸潑尼松龍對(duì)照品適量,精密稱定，同法測(cè)定。按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。 第22頁(yè)/共38頁(yè)第二十三頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-424甾體激素藥物含量測(cè)定的色譜條件及方法： 1、所用固定相均為C18柱，即ODS柱。 十八烷基硅烷鍵合硅膠(ODS)是應(yīng)用最廣泛的一種(y zhn)化學(xué)鍵合相，是非極性固定相，流動(dòng)相為甲醇-水或乙腈-水的混合溶液，極

21、性較大，屬反相色譜系統(tǒng)。 2、流動(dòng)相一般為不同比例的甲醇-水或乙腈-水溶合溶液。 3、不同甾體激素藥物一般以不同的物質(zhì)為內(nèi)標(biāo)。第23頁(yè)/共38頁(yè)第二十四頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-425UV法法 部分部分(b fen)甾體激素類藥物原料和制劑的甾體激素類藥物原料和制劑的含量用含量用UV法測(cè)定法測(cè)定(約占中國(guó)藥約占中國(guó)藥典收載原料和制劑總量的典收載原料和制劑總量的1/4 。例：醋酸甲羥孕酮片的含量測(cè)定(cdng) 取本品10片(10mg,250mg規(guī)格)、15片(4mg規(guī)格)或25片(2mg規(guī)格)，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于醋酸甲羥孕酮20mg)，置100ml量瓶中,加無(wú)水乙醇約60

22、ml，振搖15分鐘使醋酸甲羥孕酮溶解，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，置另一100ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法（附錄 A）在240nm的波長(zhǎng)處測(cè)定(cdng)吸光度，按C24H34O4的吸收系數(shù)（1%1cm）為408計(jì)算，即得 UV法由于快速，簡(jiǎn)便(jinbin)，曾廣泛用于本類藥物的含量測(cè)定，但由于其專屬性不強(qiáng)，有些品種的測(cè)定已被HPLC法 代替。如醋酸地塞米松片的含量測(cè)定。第24頁(yè)/共38頁(yè)第二十五頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-426甾體激素類藥物C3或其它位置上的酮羰基在酸性條件下可與羰基試劑異煙肼縮合(suh)，生成黃色的異煙腙，

23、在一定波長(zhǎng)有最大吸收。+ONCONHNH2NCONNH異煙肼法異煙肼法原理原理(yunl)：第25頁(yè)/共38頁(yè)第二十六頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-427供試品溶液：取本品適量(約相當(dāng)于倍他米松20mg)，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻(必要時(shí)濾過(guò))對(duì)照品溶液：另取倍他米松磷酸鈉對(duì)照品適量(約相當(dāng)于倍他米松20mg)，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋至每1ml 中含倍他米松0.4mg 的溶液。精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液各1ml，分別置25ml量瓶中，各精密加異煙肼溶液(異煙肼75mg，鹽酸0.1ml，加甲醇溶解并稀釋至100ml)20ml，搖勻，置60水浴中保溫1小時(shí)，冷

24、卻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法(附錄A)，在420nm 的波長(zhǎng)(bchng)處分別測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。 例：異煙肼法測(cè)定倍他米松磷酸鈉的含量(hnling)第26頁(yè)/共38頁(yè)第二十七頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-428 腎上腺皮質(zhì)激素類藥物的C17-醇酮基有還原性，強(qiáng)堿性條件下可以(ky)還原四氮唑?yàn)橛猩衔?，通過(guò)測(cè)定該有色化合物最大吸收處的吸收度，來(lái)對(duì)藥物含量進(jìn)行測(cè)定。 四氮唑鹽有兩類：氯化三苯四氮唑(ChP)，藍(lán)四氮唑(USP)。CC6H5NNNNC6H5C6H5+Cl2e(H)CC6H5NNNNC6H5C6H5H氯化三苯四氮唑 (TTC)深紅色四氮唑法四氮唑法原理

25、原理(yunl)：第27頁(yè)/共38頁(yè)第二十八頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-429供試品溶液：取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于醋酸氫化可的松20mg），置200ml量瓶中，加無(wú)水乙醇適量，使醋酸氫化可的松溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液；對(duì)照品溶液：另取醋酸氫化可的松對(duì)照品約20mg，精密稱定，置200ml量瓶中，加無(wú)水乙醇適量，使溶解并稀釋至刻度，搖勻。 精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各1ml,分別置干燥(gnzo)具塞試管中,各精密加無(wú)水乙醇9ml與氯化三苯四氮唑試液1ml，搖勻,再各精密加氫氧化四甲基銨試液1ml ，搖勻，在25暗處放置4045分鐘，照紫外-可見分光

26、光度法（附錄A），在485nm 的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。 例：四氮唑法測(cè)定醋酸(c sun)氫化可的松片的含量第28頁(yè)/共38頁(yè)第二十九頁(yè)，共38頁(yè)。2022-7-430 (1)藥物結(jié)構(gòu)：C11位是酮基的甾體比是羥基的反應(yīng)速度快；C21位是羥基的甾體比其酯化后反應(yīng)速度快，若酯是三甲基醋酸酯，磷酸酯或琥珀酸酯，速度更慢。 (2) 溶劑和水分：水分多會(huì)使呈色速度減慢，醛使吸收度增高，故溶劑用無(wú)水無(wú)醛乙醇為好。 (3)堿的種類及加入順序：氫氧化四甲基銨最常用。先加四氮唑鹽再加堿液以防藥物分解。 (4)空氣中氧及光線：反應(yīng)及產(chǎn)物對(duì)光及氧敏感，故需避光，暗處顯色，并在達(dá)到最大呈色后，立即測(cè)定吸收度。 (5)溫度與時(shí)間：中國(guó)藥典的條件是在25的暗處反應(yīng)4045min，以保證結(jié)果(ji gu)重現(xiàn)性。 CH3HHOCH3HOHHHOOHO3111720四氮唑法廣泛用于皮質(zhì)激素類藥物的含量測(cè)定，但下述因素(yn s)對(duì)有色產(chǎn)物的生成速度、呈色強(qiáng)度和穩(wěn)定性有影響：四氮唑法的影響四氮唑法的影響(yngxing)(yngxing)因素因素: :氫化可的松第29頁(yè)/共38頁(yè)第