全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程

1、全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第3版）精液檢查一標(biāo)本收集1.在3個(gè)月內(nèi)檢查2次至數(shù)次，二次之間間隔應(yīng)7天，但不超過(guò)3周。2.采樣前至少禁欲3天，但不超過(guò)7天。3.采樣后1h內(nèi)送到檢驗(yàn)科。4.用清潔干燥廣口塑料或玻璃小瓶收集精液，不宜采用避孕套內(nèi)的精液。某些塑料容器具有殺精子作用，但是否合適應(yīng)事先做實(shí)驗(yàn)。5.應(yīng)將射精精液全部送檢。6.傳送時(shí)溫度應(yīng)在2040。7.容器必須注明患者姓名和（或）識(shí)別號(hào)（標(biāo)本號(hào)或條碼），標(biāo)本采集日期和時(shí)間。8.和所有體液一樣，精液也必須按照潛在生物危害物質(zhì)處理，因?yàn)榫簝?nèi)可能含有肝炎病毒、人類(lèi)免疫缺陷（病毒）和皰疹病毒等。二一般性狀檢查一般性狀檢查包括記錄精液量、顏色、透明度、

2、粘稠度和是否液化。1.外觀 正常精液呈灰白色或乳白色，不透明。棕色或紅色提示出血。黃色可能服用某種藥物。精子濃度低時(shí)精液略顯透明。正常精液是一種均勻黏稠的液體，射精后立即凝固，30 min后開(kāi)始液化。若液化時(shí)間超過(guò)60 min考慮為異常，應(yīng)記錄這種情況。正常精液可含有不液化的膠凍狀顆粒。2.量 用刻度量筒或移液管測(cè)定。正常一次全部射精精液量約25 ml。精液量過(guò)多或過(guò)少是不育的原因之一。3.黏稠度 在精液全部液化后，用Pasteur滴管吸入精液，然后讓精液依靠重力滴落，并觀察拉絲長(zhǎng)度。正常精液呈水樣，形成不連續(xù)小滴。黏稠度異常時(shí)，形成絲狀或線狀液滴（長(zhǎng)度大于2 cm）。也可使用玻璃棒或注射器測(cè)

3、定黏稠度。4.酸堿度 用精密試帶檢查。正常人pH為7.28.0，平均7.8。三精子存活率精子存活率（motility）用活精子比例來(lái)反映。1.伊紅染色法【試劑】5 g/L伊紅Y染色液：伊紅Y 0.5 g，加生理鹽水至100 ml。【操作】（1） 在載玻片上加新鮮精液和伊紅溶液各1滴，混勻后，加上蓋玻片，30 s后在高倍鏡下觀察，活精子不著色。死精子染成紅色。（2） 計(jì)數(shù)200個(gè)精子，計(jì)算未著色（活精子）的百分率。2.伊紅-苯胺黑染色法【試劑】（1）10 g/L伊紅Y染色液：伊紅1 g，加蒸餾水至100 ml。（2）100 g/L苯胺黑染色液：苯胺黑10 g，加蒸餾水至100 ml?！静僮鳌浚?

4、） 取小試管，加新鮮精液和伊紅溶液各1滴，混勻。（2） 30 s后，加苯胺黑溶液3滴，混勻。（3） 30 s后，在載玻片上，加精液-伊紅-苯胺黑混合液1滴，制成涂片，待干。（4） 油鏡下觀察，活精子為白色，死精子染成紅色，背景呈黑色，計(jì)數(shù)200個(gè)精子，計(jì)算未著色活精子的百分率。3.精子低滲膨脹試驗(yàn)（HOS）【試劑】膨脹液：枸櫞酸鈉0.735 g，果糖1.351 g，加蒸餾水至100 ml。分裝，- 20冷凍保存，使用前解凍，并充分混勻。【操作】（1） 取小試管，加1 ml膨脹液，37預(yù)溫5 min。（2） 加0.1 ml液化精液，輕輕攪勻，在37孵育至少30 min。（3） 在相差顯微鏡下觀察

5、精子，膨脹精子為尾部形狀發(fā)生變化的精子，即活精子。計(jì)數(shù)200個(gè)精子，計(jì)算膨脹精子的百分率?！緟⒖紖^(qū)間】在排精3060 min內(nèi)，約有70%以上精子應(yīng)為活動(dòng)精子。精子低滲膨脹試驗(yàn)應(yīng)有60%以上精子出現(xiàn)尾部膨脹?！靖阶ⅰ浚?） 如室溫低于10時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本先放入37溫育510 min后鏡檢。（2） 某些標(biāo)本試驗(yàn)前就有尾部卷曲的精子，在HOS試驗(yàn)前，計(jì)算未處理標(biāo)本中尾部卷曲精子的百分?jǐn)?shù)，實(shí)際HOS試驗(yàn)結(jié)果百分率就等于測(cè)定值減去未處理標(biāo)本中尾部卷曲精子百分率。（3） HOS也是精子尾部膜功能試驗(yàn)。四精子活力WHO推薦一種無(wú)需復(fù)雜設(shè)備而能進(jìn)行簡(jiǎn)單精子活力（activity）分級(jí)的方法。【操作】取10 l標(biāo)

6、本涂片，連續(xù)觀察至少5個(gè)視野，對(duì)200個(gè)精子進(jìn)行分級(jí)，首先計(jì)數(shù)a級(jí)和b級(jí)精子，隨后在同一視野內(nèi)計(jì)數(shù)c級(jí)和d級(jí)精子?！窘Y(jié)果判斷】根據(jù)下述標(biāo)準(zhǔn)把精子活力分為a、b、c、d四級(jí)。a級(jí)：快速前向運(yùn)動(dòng)：37時(shí)速度25 m/s，或20時(shí)速度20 m/s（25 m大約相當(dāng)于精子5個(gè)頭部的長(zhǎng)度，或半個(gè)尾部的長(zhǎng)度）。b級(jí)：慢速或者呆滯的前向運(yùn)動(dòng)。c級(jí)：非前向運(yùn)動(dòng)（5 m/s）。d級(jí)：不動(dòng)?！緟⒖紖^(qū)間】正常精液采集后60 min內(nèi)，a級(jí)+b級(jí)精子達(dá)50%以上。五精子計(jì)數(shù)【試劑】精子稀釋液：碳酸氫鈉5 g，40%甲醛溶液1 ml，蒸餾水100 ml，待完全溶解過(guò)濾后使用。【操作】1. 于小試管內(nèi)加精子稀釋液0.38

7、 ml，吸液化精液20l，加入稀釋液內(nèi)搖勻。2. 充分搖勻后，滴入改良Neubauer血細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)，靜置12 min，待精子下沉后，以精子頭部作為基準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)數(shù)。3. 如每個(gè)中央方格內(nèi)精子少于10個(gè)，應(yīng)計(jì)數(shù)所有25個(gè)中方格內(nèi)的精子數(shù)。4. 如每個(gè)中央方格內(nèi)精子在1040個(gè)，應(yīng)計(jì)數(shù)10個(gè)中方格內(nèi)的精子數(shù)。5. 如每個(gè)中央方格內(nèi)精子多于40個(gè)，應(yīng)計(jì)數(shù)5個(gè)中方格內(nèi)的精子數(shù)?！窘Y(jié)果判斷】精子數(shù)= 計(jì)數(shù)結(jié)果 * 25 * 1 * 20 * 103/ml計(jì)數(shù)中方格數(shù) 計(jì)數(shù)池高度= 計(jì)數(shù)結(jié)果 * 1 * 5 * 105/ml計(jì)數(shù)中方格數(shù) 計(jì)數(shù)池高度【參考區(qū)間】正常男性 20 * 106/ml【附注】1. 收

8、集精液前避免性生活37天。收集精液標(biāo)本后應(yīng)在1 h內(nèi)檢驗(yàn)，冬季應(yīng)注意保溫。2. 出現(xiàn)一次異常結(jié)果，應(yīng)隔1周后復(fù)查，反復(fù)查23次方能得出比較正確的結(jié)果。3. 如低倍鏡、高倍鏡檢查均無(wú)精子，應(yīng)將精液離心沉淀后再涂片檢查，如兩次均無(wú)精子，報(bào)告“無(wú)精子”。六精子形態(tài)觀察【試劑】改良巴氏染色液、Shorr染色液、Diff-Quik快速染色液：商品化染色液一般質(zhì)量均佳，但實(shí)驗(yàn)室也可自行配制?！静僮鳌?. 在載玻片上滴1滴精液，約520l，采用壓拉涂片法或推片法制片。2. 待干后，巴氏染色法用等量95%乙醇和乙醚混合液固定515 min；Shorr染色法用75%乙醇固定1 min；Diff-Quik快速染色

9、法用甲醇固定15 s。3. 作改良巴氏、Shorr或Diff-Quik染色，然后在油鏡下觀察。4. 精子頭部頂體染成淡藍(lán)色，頂體后區(qū)域染成深藍(lán)色，中段染成淡紅色，尾部染成藍(lán)色或淡紅色，細(xì)胞質(zhì)小滴位于頭部后面或中段周?chē)?，巴氏染色染成綠色?！窘Y(jié)果判斷】評(píng)估精子正常形態(tài)時(shí)應(yīng)采用嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)，只有頭、頸、中段和尾部都正常的精子才正常。精子頭的形狀必須是橢圓形，巴氏染色精子頭部長(zhǎng)4.05.0m，寬2.53.5m，長(zhǎng)寬之比應(yīng)在1.501.75，頂體的界限清晰，約占頭部的40%70%。中段細(xì)，寬度1m，約為頭部長(zhǎng)度的1.5倍，且在軸線上緊貼頭部，細(xì)胞質(zhì)小滴應(yīng)小于正常頭部大小的一半。尾部應(yīng)是直的、均一的，比中段細(xì)

10、，非卷曲，其長(zhǎng)約為45m。所有形態(tài)學(xué)處于臨界狀態(tài)的精子均列為異常。異常精子可有：頭部缺陷：大頭、小頭、錐形頭、梨形頭、圓頭、無(wú)定形頭、有空泡頭、頂體過(guò)小頭、雙頭等；頸段和中段缺陷：頸部彎曲、中段非對(duì)稱(chēng)地接在頭部、粗的或不規(guī)則中段、異常細(xì)的中段等；尾部缺陷：短尾、多尾、發(fā)卡形尾、尾部斷裂、尾部彎曲、尾部寬度不規(guī)則、尾部卷曲等。 【參考區(qū)間】 正常人精液中正常形態(tài)者30%（異常精子應(yīng)少于20%，如超過(guò)20%為不正常）。七精子凝集精子凝集是活動(dòng)精子以各種方式，如頭對(duì)頭，尾對(duì)尾或頭對(duì)尾等彼此粘在一起。以分級(jí)方式報(bào)告，從“-”（沒(méi)有凝集）“3+”（所有可動(dòng)的精子凝集到一起）。凝集的存在，提示可能為免疫因

11、素引起不育。八非精子細(xì)胞精液含有的非精子細(xì)胞成分，成為“圓細(xì)胞”，這些細(xì)胞包括泌尿生殖道上皮細(xì)胞、前列腺細(xì)胞、生精細(xì)胞和白細(xì)胞。正常人精液中：圓細(xì)胞5*106/ml。正常精液中白細(xì)胞，主要是中性粒細(xì)胞，數(shù)量不應(yīng)超過(guò)1*106/ml。過(guò)多提示感染，為白細(xì)胞精子癥。 九其他成分 精液中可以有結(jié)晶體、卵磷脂小體、淀粉樣體、脂滴、脫落上皮細(xì)胞等。 十臨床意義 1正常精液呈灰白色，久未排精者可呈淡黃色；離體30 min后，完全液化。根據(jù)精液檢查結(jié)果，臨床上常用于診斷男子不育癥及觀察輸精管結(jié)扎術(shù)后的效果。2正常精子活力一般在a級(jí)25%。如活力a級(jí)25%；a級(jí)+b級(jí)50%可成為男性不育的原因。3精索靜脈曲張癥患者精液中常出現(xiàn)形態(tài)不正常的精子。4血液中有毒性代謝產(chǎn)物、接觸鉛等污染物、應(yīng)用大劑量放射線及細(xì)胞毒藥物等可使精子形態(tài)異常。前列腺液檢查一 標(biāo)本收集臨床醫(yī)師作前列腺按摩術(shù)后，采集標(biāo)本于清潔玻片上，立即送檢。二 檢查內(nèi)容記錄液體顏色、是否混有血液、有無(wú)膿塊等。濕片鏡檢，高倍鏡下觀察白細(xì)胞、紅細(xì)胞、卵磷脂小體，其次為上皮細(xì)胞、精子、淀粉樣體等。革蘭染色后檢查細(xì)菌。三 報(bào)