法醫(yī)物證學(xué)《混合斑檢》TBL教學(xué)

1、第十七章第十七章 混合斑檢驗(yàn)混合斑檢驗(yàn)2022-7-31234混合斑的概念混合斑的概念混合斑的特點(diǎn)和檢驗(yàn)?zāi)康幕旌习叩奶攸c(diǎn)和檢驗(yàn)?zāi)康木号c陰道混合斑檢驗(yàn)液與陰道混合斑檢驗(yàn)多個(gè)體血液混合斑檢驗(yàn)學(xué)習(xí)目標(biāo)混合斑混合斑 (mixed stain or mixture) (mixed stain or mixture) 是是指指兩名或兩名以上兩名或兩名以上個(gè)體的個(gè)體的體液體液、分泌液分泌液混合形混合形成的斑痕。成的斑痕。 由不同個(gè)體的同一種體液、分泌液混合而成，由不同個(gè)體的同一種體液、分泌液混合而成，最常見為多個(gè)個(gè)體的混合血痕。最常見為多個(gè)個(gè)體的混合血痕。 由不同個(gè)體的不同體液、分泌液混合而成，由不同個(gè)

2、體的不同體液、分泌液混合而成，最常見為性犯罪案件中案犯的精液與女性的最常見為性犯罪案件中案犯的精液與女性的陰道分泌液組成的混合斑。陰道分泌液組成的混合斑。特點(diǎn)：特點(diǎn)：由于受混合成分種類、混合個(gè)體數(shù)、由于受混合成分種類、混合個(gè)體數(shù)、以及不同個(gè)體來源的成分所占比例等因素的以及不同個(gè)體來源的成分所占比例等因素的影響，檢測結(jié)果分析較單一斑痕要復(fù)雜。影響，檢測結(jié)果分析較單一斑痕要復(fù)雜?？梢苑殖蓛纱箢悾嚎梢苑殖蓛纱箢悾夯旌习叱３霈F(xiàn)在下列情況：混合斑常出現(xiàn)在下列情況： 性犯罪案件檢材性犯罪案件檢材 陰道拭子、內(nèi)褲、衛(wèi)生紙、床單、嫌疑陰道拭子、內(nèi)褲、衛(wèi)生紙、床單、嫌疑人外生殖器拭子人外生殖器拭子等等多人受傷的

3、現(xiàn)場多人受傷的現(xiàn)場 兇器、當(dāng)事人身上或兇器、當(dāng)事人身上或衣物上的血痕衣物上的血痕血衣血衣咬痕拭子咬痕拭子 可能含有可能含有咬者的口腔上皮細(xì)胞和咬者的口腔上皮細(xì)胞和被咬者的皮膚細(xì)胞被咬者的皮膚細(xì)胞指甲垢指甲垢 可能含有本可能含有本人和被抓者的細(xì)胞人和被抓者的細(xì)胞個(gè)人識(shí)別個(gè)人識(shí)別檢驗(yàn)?zāi)康拇_證確證檢材是否為混合斑檢測與分析混合斑的遺傳標(biāo)記遺傳標(biāo)記個(gè)人識(shí)個(gè)人識(shí)別別檢驗(yàn)程序混合斑的確證混合斑的確證: :檢測精液成分及陰道成分確證檢測精液成分及陰道成分確證( (一一) )精斑的確證：精斑的確證：利用精斑的確證試驗(yàn)利用精斑的確證試驗(yàn)細(xì)胞學(xué)方法細(xì)胞學(xué)方法-精子的檢出精子的檢出免疫學(xué)方法免疫學(xué)方法-精斑確證最好

4、試劑精斑確證最好試劑-抗抗P30血清血清( (二二) )陰道液的確證：陰道液的確證： 細(xì)胞學(xué)檢查細(xì)胞學(xué)檢查 ：陰道上皮細(xì)胞（復(fù)層鱗狀上皮細(xì)胞）：陰道上皮細(xì)胞（復(fù)層鱗狀上皮細(xì)胞） HEHE染色染色：（典型）大而扁平、形態(tài)不規(guī)則、胞漿：（典型）大而扁平、形態(tài)不規(guī)則、胞漿紅染紅染 嗜碘試驗(yàn)嗜碘試驗(yàn)：斑痕沉淀涂片，干燥后：斑痕沉淀涂片，干燥后+2+2滴滴LugosLugos碘液碘液-23-23minmin鏡檢，呈紅褐色或深黃褐色，（口腔鏡檢，呈紅褐色或深黃褐色，（口腔上皮細(xì)胞不染色，上皮細(xì)胞不染色，可鑒別可鑒別） 陰陰道肽酶測定道肽酶測定：（VPVP）是一種催化肽鍵水解的酶是一種催化肽鍵水解的酶（ L

5、-L-纈氨酸纈氨酸- -L-L-亮氨酸）亮氨酸） 僅存在女性生殖道分泌液中，與年齡、性活僅存在女性生殖道分泌液中，與年齡、性活動(dòng)、月經(jīng)周期無關(guān)。動(dòng)、月經(jīng)周期無關(guān)。 方法方法：淀粉凝膠電泳：淀粉凝膠電泳 注意注意：陽性檢出率只有：陽性檢出率只有64%64%，故，故陰性結(jié)果不陰性結(jié)果不能否定陰道液存在能否定陰道液存在。檢出期限為。檢出期限為7 7個(gè)月。個(gè)月?；旌习咧芯撼煞值膫€(gè)人識(shí)別混合斑中精液成分的個(gè)人識(shí)別 應(yīng)取受害人和犯罪嫌疑人的血液、唾液檢材做參比樣本應(yīng)取受害人和犯罪嫌疑人的血液、唾液檢材做參比樣本 已婚的被害人，須提取其丈夫的血樣和唾液樣同時(shí)檢測已婚的被害人，須提取其丈夫的血樣和唾液樣同時(shí)

6、檢測 混合斑的鑒定主要有三類方法：混合斑的鑒定主要有三類方法： 對比推斷法對比推斷法：簡單易行，信息量有限：簡單易行，信息量有限 分離精液與陰道液組分，分別進(jìn)行遺傳標(biāo)記分型分離精液與陰道液組分，分別進(jìn)行遺傳標(biāo)記分型 直接檢測精液與陰道液的特有成分直接檢測精液與陰道液的特有成分 后兩類方法對于確定犯罪嫌疑人比較可靠。后兩類方法對于確定犯罪嫌疑人比較可靠。常-STR（一）（一）對比推斷法對比推斷法1 1、DNADNA分型分型STRSTR基因座分型基因座分型2 2、ABOABO血型測定（常用血型測定（常用中和試驗(yàn)）中和試驗(yàn)） 用中和試驗(yàn)測定混合斑和受害人唾液的用中和試驗(yàn)測定混合斑和受害人唾液的ABH

7、ABH物質(zhì)及分泌狀物質(zhì)及分泌狀態(tài)，進(jìn)行對比分析，可推測混合斑中精液的態(tài)，進(jìn)行對比分析，可推測混合斑中精液的ABOABO血型。血型。 若混合斑中精液血型與犯罪嫌疑人血型不同，則可否定犯若混合斑中精液血型與犯罪嫌疑人血型不同，則可否定犯罪嫌疑人；如相同，則不能否定。若受害者為非分泌型，罪嫌疑人；如相同，則不能否定。若受害者為非分泌型，則很容易從混合斑中判斷犯罪嫌疑人的血型。則很容易從混合斑中判斷犯罪嫌疑人的血型。 被害人沒有的血型物質(zhì)可以認(rèn)為是來自精斑被害人沒有的血型物質(zhì)可以認(rèn)為是來自精斑 分泌型和非分泌型個(gè)體的體液中血型物質(zhì)的含量無絕對的分泌型和非分泌型個(gè)體的體液中血型物質(zhì)的含量無絕對的界線界線

8、 ，凝集抑制的級數(shù)反映分泌型的強(qiáng)弱。，凝集抑制的級數(shù)反映分泌型的強(qiáng)弱。 所有的分泌型個(gè)體的體液中都可以檢測出所有的分泌型個(gè)體的體液中都可以檢測出H H物質(zhì)，只是物質(zhì)，只是O O型分泌型的型分泌型的H H物質(zhì)含量最高，而物質(zhì)含量最高，而A A型、型、B B型和型和ABAB型個(gè)體的型個(gè)體的A A和和B B物質(zhì)含量明顯高于物質(zhì)含量明顯高于H H。 能否檢測出混合斑各個(gè)體的血型物質(zhì)，還受混合比例等影能否檢測出混合斑各個(gè)體的血型物質(zhì)，還受混合比例等影響因素。在檢測中注意多處取材，分析所有的檢測結(jié)果，響因素。在檢測中注意多處取材，分析所有的檢測結(jié)果，才有可能準(zhǔn)確推定精液的血型。才有可能準(zhǔn)確推定精液的血型。

9、（二（二）分離精液與陰道液組分進(jìn)行檢測分離精液與陰道液組分進(jìn)行檢測常染色體常染色體DNADNA分析分析 關(guān)鍵關(guān)鍵獲得純凈的精子獲得純凈的精子細(xì)胞細(xì)胞DNADNA方法方法差異裂解（兩步抽提法差異裂解（兩步抽提法) )原理原理：精子細(xì)胞的表面蛋白含有大量的二硫鍵，可精子細(xì)胞的表面蛋白含有大量的二硫鍵，可以抵抗去垢劑以抵抗去垢劑SDSSDS和和蛋白酶蛋白酶K K的消化，而其他組織的消化，而其他組織的細(xì)胞膜、核膜則可以被這兩種物質(zhì)消化的細(xì)胞膜、核膜則可以被這兩種物質(zhì)消化。方法：方法：第一步：第一步：檢材檢材+ +SDS+SDS+蛋白酶蛋白酶K+TESK+TES緩沖液緩沖液 3737水浴水浴3 3h h

10、 離心，上清（含陰道上皮細(xì)胞離心，上清（含陰道上皮細(xì)胞DNADNA），精子留在沉淀物中。），精子留在沉淀物中。 第二步：第二步：沉淀物沉淀物+ +DTTDTT（二硫蘇糖醇）（二硫蘇糖醇）+SDS+SDS+蛋蛋白酶白酶K+TESK+TES緩沖液緩沖液 5656 水浴過夜水浴過夜 離心，上離心，上清（含精子清（含精子DNADNA）。）。 混合斑第一步消化后的上清液中含有陰道上皮細(xì)胞混合斑第一步消化后的上清液中含有陰道上皮細(xì)胞DNADNA，第二步消化液中含精子細(xì)胞的，第二步消化液中含精子細(xì)胞的DNADNA，可分別，可分別進(jìn)行進(jìn)行DNADNA分型，并與受害者和犯罪嫌疑人比對，從分型，并與受害者和犯罪嫌

11、疑人比對，從而排除或認(rèn)定犯罪嫌疑人。而排除或認(rèn)定犯罪嫌疑人。注意：注意： 實(shí)際操作前，應(yīng)進(jìn)行涂片檢查，確定精子實(shí)際操作前，應(yīng)進(jìn)行涂片檢查，確定精子和陰道上皮細(xì)胞的比例，根據(jù)情況和經(jīng)驗(yàn)和陰道上皮細(xì)胞的比例，根據(jù)情況和經(jīng)驗(yàn)對第一步消化的時(shí)間、溫度、試劑濃度等對第一步消化的時(shí)間、溫度、試劑濃度等做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整；還可對第一步消化進(jìn)行消做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整；還可對第一步消化進(jìn)行消化時(shí)間梯度的嘗試?；瘯r(shí)間梯度的嘗試。 （三）檢測精液特有成分三）檢測精液特有成分Y Y染色體染色體DNADNA分析分析 1 1 男性特有，男性特有，Y-STRY-STR檢測不受女性成分的干擾，不需檢測不受女性成分的干擾，不需分離精液成分和

12、陰道液成分，兩者比例為分離精液成分和陰道液成分，兩者比例為1/1001/1001/1/20002000時(shí)仍可正確檢出精子時(shí)仍可正確檢出精子DNADNA，避免了兩步消化過程，及操作避免了兩步消化過程，及操作過程中精子過程中精子DNADNA的損失，的損失，提高了檢出陽性率提高了檢出陽性率。 2 2 精子細(xì)胞比體細(xì)胞精子細(xì)胞比體細(xì)胞更穩(wěn)定更穩(wěn)定，保存，保存2525年的陰道式子年的陰道式子Y-Y-STRSTR獲得成功獲得成功 3 3 靈敏度高靈敏度高，同時(shí)也適用無精子癥或少精子癥犯罪嫌，同時(shí)也適用無精子癥或少精子癥犯罪嫌疑人疑人 4 4 可以可以推測犯罪嫌疑人的數(shù)目推測犯罪嫌疑人的數(shù)目 強(qiáng)奸案。強(qiáng)奸案

13、。 混合斑中陰道液成分的個(gè)人識(shí)別混合斑中陰道液成分的個(gè)人識(shí)別 進(jìn)行進(jìn)行常染色體常染色體STRSTR分析分析，是目前對是目前對陰道分泌液個(gè)人識(shí)別的主要方法。陰道分泌液個(gè)人識(shí)別的主要方法。輪奸案混合斑檢材的鑒定輪奸案混合斑檢材的鑒定差異差異提取提取DNADNA技術(shù)，無法分離不同個(gè)體的精技術(shù)，無法分離不同個(gè)體的精子。常染色體子。常染色體DNADNA分型結(jié)果是多個(gè)男性個(gè)體分型結(jié)果是多個(gè)男性個(gè)體的混合圖譜，對確定犯罪嫌疑人有困難的混合圖譜，對確定犯罪嫌疑人有困難。Y-STRY-STR在確定輪奸案件中犯罪嫌疑人數(shù)、排在確定輪奸案件中犯罪嫌疑人數(shù)、排除或指控犯罪嫌疑人等方面均較常染色體除或指控犯罪嫌疑人等方

14、面均較常染色體STRSTR標(biāo)記有明顯的實(shí)用價(jià)值，標(biāo)記有明顯的實(shí)用價(jià)值，是輪奸案件中是輪奸案件中重要的檢驗(yàn)內(nèi)容重要的檢驗(yàn)內(nèi)容。多個(gè)體血液混合斑鑒定多個(gè)體血液混合斑鑒定（一）混合斑（一）混合斑ABO血型測定：血型測定： 測定血痕的測定血痕的ABO凝集原和凝集素，當(dāng)凝集凝集原和凝集素，當(dāng)凝集原和凝集素矛盾時(shí)，可判斷血痕為多人血混合。原和凝集素矛盾時(shí)，可判斷血痕為多人血混合。識(shí)別效力有限，通常只作為初篩排查項(xiàng)目。識(shí)別效力有限，通常只作為初篩排查項(xiàng)目。 ABO血型測定（篩查）血型測定（篩查）（2）常染色體基因座分析：）常染色體基因座分析： STR分型，確定混合斑具有的等位基因再進(jìn)行鑒定分型，確定混合斑具有的等位基因再進(jìn)行鑒定： a.確定混合血樣中可能的個(gè)體數(shù)；確定混合血樣中可能的個(gè)體數(shù)； b.確定混合型確定混合型DNA圖譜中個(gè)體組分