分子生物學(xué)8個(gè)體化醫(yī)學(xué)

1、1個(gè)體化醫(yī)學(xué)Personalized Medicine申志發(fā)E-mail：shenzhifa Tel： / 662693 （短號(hào)）溫州醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院/生命科學(xué)院教育部檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室Preventive 預(yù)防Participatory 參與Personalized 個(gè)體化P1P2P4P3Predictive 預(yù)測(cè)DNA 序列定期體檢生活方式疫 苗療 養(yǎng)提前干預(yù) 遺傳變異 合適藥物合適劑量， 病人了解疾病參與治療現(xiàn)代醫(yī)學(xué)模式 (4 Letters P Medicine)醫(yī)學(xué)治療模式經(jīng)驗(yàn)性處方藥物理想藥D藥A藥C藥B明確診斷傳統(tǒng)藥A藥B藥C藥D個(gè)性化處方藥物嘗試、更換確定、治療千人一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)：

2、醫(yī)師的經(jīng)驗(yàn)， 治療差異，費(fèi)時(shí)、金錢(qián)、療效不能確定每人一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)：分子檢測(cè)結(jié)果，針對(duì)性治療，節(jié)時(shí)、金錢(qián)，達(dá)到最好療效安全、有效藥物臨床研究和應(yīng)用的相悖用藥對(duì)象個(gè)體臨床試驗(yàn)對(duì)象群體基因and /or 環(huán)境？有效性（敏感性）安全性（毒副作用）56同一個(gè)藥給不同的人為什么結(jié)果不一？藥物作用存在個(gè)體差異為什么會(huì)有差異？基因決定的嗎？7SNPs存在差異測(cè)序結(jié)果表明：確實(shí)存在SNPs 藥物遺傳學(xué)： 藥物基因組學(xué)： PharmacogeneticsPharmacogenomics單核苷酸多態(tài) single nucleotide polymorphism, SNPSNP：人類(lèi)基因組中，SNP大多為二等位多態(tài)。SN

3、Ps：形成DNA分子多態(tài)性。SNP：決定個(gè)體差異的最主要的遺傳基礎(chǔ)。疾病發(fā)生（易感、患病風(fēng)險(xiǎn)）與SNPs相關(guān)藥物作用（敏感、耐藥）與SNPs相關(guān)9拷貝數(shù)變異/拷貝數(shù)多態(tài)性 Copy number variations, CNVsCopy number polymophisms, CNPs 基因組中大于1 kb 的DNA 片段插入、 缺失和/ 或擴(kuò)增，及其不同組合而導(dǎo)致的復(fù)雜變異 DNA結(jié)構(gòu)變化（單一片段的插入、缺失、擴(kuò)增，等）； 染色體結(jié)構(gòu)變化（插入、缺失、重復(fù)、易位，等）； CNVs 是一種新的可以作為疾病易感標(biāo)志的基因組DNA多態(tài)性 臨床遺傳學(xué)家發(fā)現(xiàn)，至少有97%的疾病是散發(fā)的，而且不涉及

4、任何基因的突變，僅僅源于CNVs10環(huán)境也存在差異基因不同個(gè)體DNA序列 99.9% 相同疾病相關(guān)藥物反應(yīng)差異相關(guān)0.1%300萬(wàn)變異11在健康個(gè)體中，大量的CNVs是遺傳的，新生的 99% 1% 人群Human vs HumanSNPsCNVs堿基對(duì)2.5 Mb4 Mb 1/1,200 bp1/800% 基因組0.08%0.12%在基因組中存在豐富的CNVs12SNPsCNPsCNVs 全基因組核基因組線粒體基因組基因組的多態(tài)性（多樣性）疾病復(fù)雜性13檢測(cè)SNPs測(cè)序：deep sequencing基因芯片：特異、靈敏、智能、高通量MicrosatelliteFISH檢測(cè)CNVsKaryot

5、ypingQ-PCRSNP array15檢測(cè)CNVsGenotype known common CNVs using whole-genome arrays（GWAS）Affy 6.0Illumina 1M36,000 CNV non-polymorphic probescovering 4,000 CNV regions in DGV940,000 CNV non-polymorphic probesHigh-density in 5,600 CNV regions in DGV + extended to whole-genomeNimblegenarray-CGH, CNV only,

6、 test vs reference custom or whole-genome (up to 2,1M probes)162022/7/817個(gè)體化醫(yī)學(xué)核心基于個(gè)體基因組的診斷與治療個(gè)體基因組全基因組序列：測(cè)序技術(shù)（通量，成本）全基因組關(guān)聯(lián)性分析（GWA Study，GWAS）SNPs（單核苷酸多態(tài)性）CNVs（拷貝數(shù)變異，Copy Number Variations ）個(gè)體化醫(yī)療個(gè)體化診斷（基礎(chǔ)）個(gè)體化治療（個(gè)體化用藥）18個(gè)體基因組人類(lèi)基因組計(jì)劃引發(fā)生命科學(xué)研究數(shù)據(jù)的海量增長(zhǎng)生命科學(xué)計(jì)劃“從基因組到生命”（GTL，2003-2010）測(cè)序的費(fèi)用（每個(gè)堿基 / 美元）測(cè)定的堿基序列總數(shù)

7、（十億）人類(lèi)基因組計(jì)劃（1990-2003）3.16109 bp中國(guó)人基因組炎黃一號(hào)基于基因組的個(gè)體化醫(yī)學(xué)罕見(jiàn)疾病風(fēng)險(xiǎn) 查出孟德?tīng)柤膊≈虏』?早期疾病預(yù)測(cè) 孕前/胚胎植入前篩查常見(jiàn)疾病風(fēng)險(xiǎn) 風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè) 風(fēng)險(xiǎn)分層 查出早期的行為異常風(fēng)險(xiǎn)顯現(xiàn)藥物基因組學(xué) 風(fēng)險(xiǎn)分層 藥物效應(yīng)和劑量 不良反應(yīng)預(yù)測(cè)20基于基因組的個(gè)體化醫(yī)學(xué)Roses, A. Nature, 405, 857-865遺傳分析疾?。哼z傳疾病預(yù)測(cè)/診斷遺傳藥理學(xué)：藥物反應(yīng)表現(xiàn)罕見(jiàn)孟德?tīng)柺霞膊? 因果基因常見(jiàn)復(fù)雜疾?。?易感基因?qū)膊〉男碌恼J(rèn)識(shí)和未來(lái)醫(yī)學(xué)干預(yù)最適藥物反應(yīng)藥物代謝和作用基因藥物安全性和有效性的SNP譜信息的確定性和倫理、法律、社

8、會(huì)問(wèn)題的潛在風(fēng)險(xiǎn)應(yīng)用查出受益風(fēng)險(xiǎn)GWASPGx基因組個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)的應(yīng)用預(yù)防預(yù)測(cè)：遺傳缺陷(致病基因)、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估(易感基因)疾病易感性乳腺癌 - BRCA1/2心肌梗死 - MEF 2A, ALOX5AP心律失常- Familion檢測(cè)DNA (LQTS1, LQTS2, LQTS3, LQTS4)疾病診斷：病原體診斷、腫瘤診斷、耐藥性檢測(cè)(基因型)個(gè)體化治療：靶向治療(分子靶標(biāo))、藥物敏感性(基因多態(tài)性)靶向治療赫賽汀(Herceptin) - Her2 陽(yáng)性的乳腺癌格列衛(wèi)(Gleevec) 費(fèi)城染色體陽(yáng)性的慢性髓細(xì)胞樣白血病特羅凱(Tarceva) -EGFR陽(yáng)性的肺癌靶向劑量華法林(Wa

9、farin) - CYP2C9, VKORC16-巰基嘌呤(6-Mercaptopurine) -巰嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶預(yù)后判斷：藥物反應(yīng)、疾病復(fù)發(fā)(基因表達(dá)差異)乳腺癌 -乳腺癌基因表達(dá)分析 (Oncotype霉素，MammaPrint等)個(gè)體化醫(yī)學(xué)和個(gè)體化藥物治療發(fā)病易感遺傳缺陷早期查出針對(duì)性預(yù)防疾病發(fā)展預(yù)測(cè)對(duì)藥物的可能反應(yīng)監(jiān)測(cè)藥物反應(yīng)和發(fā)病反復(fù)健康狀態(tài)無(wú)癥狀疾病狀態(tài)慢病治療病人分層 / 治療有癥狀疾病狀態(tài) 當(dāng)今醫(yī)療保健重點(diǎn)未來(lái)醫(yī)療保健重點(diǎn) 個(gè)體化醫(yī)學(xué) 個(gè)體化藥物治療疾病基因組學(xué)藥物基因組學(xué)基因檢測(cè)疾病相關(guān)基因 疾病預(yù)測(cè)與診斷藥物作用相關(guān)基因個(gè)體化藥物治療罕見(jiàn)孟德?tīng)栠z傳病致病基因常見(jiàn)復(fù)雜疾病易感

10、基因藥物代謝/作用基因藥物代謝/作用SNPs疾病預(yù)測(cè)： 對(duì)疾病的新認(rèn)識(shí)和控制個(gè)體化用藥： 最佳藥物反應(yīng)分子診斷是個(gè)體化醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)24基因mRNA蛋白每個(gè)蛋白功能改變基因突變mRNA序列改變mRNA數(shù)量改變蛋白數(shù)量改變總體蛋白功能改變可遺傳突變體細(xì)胞突變BiomarkerBiomarkerBiomarkerBiomarker組織檢測(cè)，往往與療效相關(guān)可由血細(xì)胞分型反應(yīng)，往往與藥物代謝相關(guān)個(gè)體化診斷的生物標(biāo)志物特異、靈敏、早期分子診斷是個(gè)體化醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)代謝產(chǎn)物生物標(biāo)記假說(shuō) 開(kāi)發(fā)原型檢測(cè)方法候選生物標(biāo)記 確證發(fā)現(xiàn)候選生物標(biāo)記 臨床確證體外診斷試劑 分析方法優(yōu)化 和開(kāi)發(fā)管理部門(mén)批準(zhǔn)確證各實(shí)驗(yàn)室采用審核實(shí)

11、驗(yàn)室結(jié)果的室間差應(yīng)用臨床和實(shí)驗(yàn)室培訓(xùn)生物標(biāo)記和分子診斷方法的發(fā)現(xiàn)、確證和應(yīng)用26Genome-wide association study（GWAS）全基因組關(guān)聯(lián)性分析Patient DNANon-Patient DNACompare differences to discover SNPs associated with diseaseDisease-specific SNPs Non-Disease-specific SNPsPatientsNon-Patients非假說(shuō)驅(qū)動(dòng)的尋找疾病相關(guān)突變的方法：掃描整個(gè)基因組、證明哪些基因與疾病相關(guān)與疾病相關(guān)的變異：在有這種疾病的人群中常見(jiàn)的遺傳變異

12、27PCR技術(shù) 測(cè)序技術(shù) 芯片技術(shù) DHPLC技術(shù) 質(zhì)譜技術(shù) 生物信息學(xué)2022/7/828五、臨床分子生物學(xué)及細(xì)胞遺傳學(xué)檢驗(yàn)（145項(xiàng)）1. 感染性疾病分子生物學(xué)檢驗(yàn) （89項(xiàng)）2. 疾病相關(guān)分子生物學(xué)及細(xì)胞遺傳學(xué)檢驗(yàn) （25項(xiàng)）3. 腫瘤分子生物學(xué)檢驗(yàn) （17項(xiàng)）4. 用藥指導(dǎo)的分子生物學(xué)檢驗(yàn) （10項(xiàng)）5. 其它（個(gè)體識(shí)別等） （4項(xiàng)）醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目目錄（2013年版） 2、疾病相關(guān)分子生物學(xué)及細(xì)胞遺傳學(xué)檢驗(yàn)染色體核型分析脆性X染色體核型分析高分辨染色體核型分析姐妹染色體互換分析21三體和性染色體多倍體檢測(cè)遺傳性肌營(yíng)養(yǎng)不良基因分析肝豆?fàn)詈俗冃曰蚍治鲅巡』蚍治龃嘈訶綜合癥基因分

13、析Y染色體性別基因分析脫氧核糖核酸倍體分析血細(xì)胞熒光原位雜交分析未經(jīng)處理的羊水細(xì)胞熒光原位雜交分析2、疾病相關(guān)分子生物學(xué)及細(xì)胞遺傳學(xué)檢驗(yàn)染色體熒光原位雜交分析羊水細(xì)胞染色體分析絨毛組織染色體分析染色體分析單基因遺傳病基因突變檢測(cè)地中海貧血基因突變檢測(cè)地中海貧血基因突變檢測(cè)苯丙酮尿癥的基因突變檢測(cè)遺傳性耳聾基因檢測(cè)HLA低分辨基因分型檢測(cè)HLA中分辨基因分型檢測(cè)HLA高分辨基因分型檢測(cè)醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目目錄（2013年版）3、腫瘤分子生物學(xué)檢驗(yàn)血液病相關(guān)基因定性檢測(cè)血液病相關(guān)基因定量檢測(cè)白血病融合基因檢測(cè)人類(lèi)EML4-ALK融合基因檢測(cè)基因表達(dá)水平對(duì)腫瘤預(yù)后的判斷基因表達(dá)水平對(duì)腫瘤藥物敏感性的

14、判斷人類(lèi)PIK3CA基因突變檢測(cè)人類(lèi)EGFR基因突變檢測(cè)HER-2基因擴(kuò)增檢測(cè)人類(lèi)K-ras基因突變檢測(cè)人類(lèi)B-raf基因V600E突變檢測(cè)人類(lèi)P53基因突變檢測(cè)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤RB1基因突變檢測(cè)家族性乳腺癌基因突變檢測(cè)多發(fā)性內(nèi)分泌腺瘤RET基因突變檢測(cè)遺傳性非息肉性大腸癌基因突變檢測(cè)遺傳性大腸癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定性檢測(cè)4、用藥指導(dǎo)的分子生物學(xué)檢驗(yàn)化學(xué)藥物用藥指導(dǎo)的基因檢測(cè)CYP2C19基因多態(tài)性檢測(cè)CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性檢測(cè)MTHFR（C677T）基因檢測(cè)CYP2D6*10、CYP2C9*3、ADRB1(1165GC)、AGTR1(1166AC)、 ACE(I/D)檢測(cè)乙型肝炎耐藥基因

15、檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)萬(wàn)古霉素耐藥基因檢測(cè)耐甲氧西林葡萄球耐藥基因檢測(cè)病原體用藥指導(dǎo)的基因檢測(cè)5、其它載脂蛋白E基因分型親子鑒定的基因分型檢查人類(lèi)SRY基因檢測(cè)ABO血型核酸擴(kuò)增定性檢測(cè)關(guān)于開(kāi)展個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)規(guī)范化管理工作函衛(wèi)辦醫(yī)政函【2013】195號(hào)多學(xué)科專(zhuān)家組成檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)藥理學(xué)病理學(xué)腫瘤學(xué)分子醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)婦產(chǎn)科學(xué)醫(yī)學(xué)倫理學(xué)法學(xué)組建衛(wèi)計(jì)委個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)專(zhuān)家委員會(huì)(2013.03)職責(zé)：負(fù)責(zé)個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)咨詢和指導(dǎo)負(fù)責(zé)起草個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)管理辦法及管理相關(guān)工作起草個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)相關(guān)規(guī)范、指南組織開(kāi)展培訓(xùn)和試點(diǎn)工作個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)管理辦法及相關(guān)指南和導(dǎo)則的制訂分工指南名稱(chēng)負(fù)責(zé)人個(gè)體化醫(yī)學(xué)

16、檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室管理辦法李金明教授尚 紅教授藥物代謝與效應(yīng)基因多態(tài)性檢測(cè)相關(guān)技術(shù)指南 周宏灝院士腫瘤相關(guān)的個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)指南詹啟敏院士曾益新院士遺傳病相關(guān)個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)指南曾溢滔院士病原微生物相關(guān)的個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)指南尚 紅教授芯片技術(shù)的個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)應(yīng)用技術(shù)指南程 京院士測(cè)序技術(shù)的個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)應(yīng)用技術(shù)指南于 軍教授原位雜交技術(shù)的個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)應(yīng)用技術(shù)指南陳 杰教授個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)LDT的相關(guān)技術(shù)指南程 京院士衛(wèi)計(jì)委對(duì)專(zhuān)家委員會(huì)工作計(jì)劃的批復(fù)（2013.07）計(jì)劃如下：起草“個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)的相關(guān)管理辦法”（2013年8月底完成初稿）。起草“個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)相關(guān)的技術(shù)指南”（2013年8月底完

17、成初稿）。在中南大學(xué)設(shè)立首家“衛(wèi)計(jì)委個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)培訓(xùn)基地”。在三個(gè)試點(diǎn)單位對(duì)管理辦法 和相關(guān)的技術(shù)指南”進(jìn)行驗(yàn)證、總結(jié)、修訂，并盡快出臺(tái)相關(guān)SOP。衛(wèi)計(jì)委同意設(shè)立個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)培訓(xùn)基地（2013.07）國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委醫(yī)政醫(yī)管局于2013年9月17日指定中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院、中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所、北京博奧醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所三家醫(yī)療機(jī)構(gòu)為我國(guó)個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)試點(diǎn)單位。首個(gè)培訓(xùn)基地：中南大學(xué)培訓(xùn)內(nèi)容：個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)；質(zhì)量控制管理；生物安全；醫(yī)學(xué)倫理；相關(guān)法律法規(guī)、實(shí)驗(yàn)室管理辦法。培訓(xùn)教材：由管理辦法、各檢測(cè)技術(shù)指南編寫(xiě)單位負(fù)責(zé)。培訓(xùn)師資：各檢測(cè)技術(shù)指南編寫(xiě)單位參與培訓(xùn)。培訓(xùn)發(fā)證總體工作進(jìn)度安排專(zhuān)家

18、委員會(huì)進(jìn)行指導(dǎo)、審核2013.082014.022014.032014.05編寫(xiě)管理辦法、各檢測(cè)技術(shù)指南試點(diǎn)單位進(jìn)行驗(yàn)證及時(shí)反饋信息編寫(xiě)培訓(xùn)教材人員培訓(xùn)初稿完成試點(diǎn)驗(yàn)證教材編寫(xiě)人員培訓(xùn)上報(bào)衛(wèi)計(jì)委醫(yī)政司發(fā)布技術(shù)指南2015.07技術(shù)指南2014年6月16日，中南大學(xué)國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)培訓(xùn)基地開(kāi)班儀式暨“國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)培訓(xùn)基地”、“國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)試點(diǎn)單位”揭牌儀式。 國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委醫(yī)政醫(yī)管局周軍副局長(zhǎng)3839個(gè)體化醫(yī)學(xué)：基因檢測(cè)與應(yīng)用分析檢測(cè)與疾病相關(guān)聯(lián)的基因異常、基因多態(tài)性突變、重復(fù)、插入、缺失染色體非整倍體SNPs、CNVs涉及疾病診療的全過(guò)程預(yù)測(cè)：疾病危

19、險(xiǎn)因素、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)、高危人群預(yù)防：診斷：早期診斷（疾病標(biāo)志物：特異性、方法：靈敏度）治療：藥物有效性（顯效、有效、無(wú)效），安全性評(píng)價(jià)預(yù)后：40致病因素和易感基因突變對(duì)發(fā)病的綜合影響致病因素侵襲易感基因突變 疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)低風(fēng)險(xiǎn)低風(fēng)險(xiǎn)中風(fēng)險(xiǎn)高風(fēng)險(xiǎn)基因檢測(cè)與應(yīng)用41基因檢測(cè)：疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)與評(píng)價(jià)SNPs檢測(cè)方法PCR擴(kuò)增 測(cè)序PCR擴(kuò)增 DHPLCPCR擴(kuò)增 RFLP芯片載脂蛋白E基因多態(tài)性與AD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)評(píng)價(jià)42載脂蛋白E基因突變基因型- 三個(gè)等位基因E2 - 低 AD 風(fēng)險(xiǎn)E3 - 中等 AD 風(fēng)險(xiǎn)E4 - 高 AD 風(fēng)險(xiǎn)APOE基因型測(cè)定AD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)與評(píng)價(jià)不是常規(guī)檢查項(xiàng)目，但許多病人需要（美國(guó)收費(fèi)2

20、99美元） Ashford JW. J Mol Neurosc 2005;23:157-65 基因檢測(cè)：疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)與評(píng)價(jià)43基因檢測(cè)：疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)與評(píng)價(jià)44胰腺癌發(fā)病的遺傳因素研究人群 病例數(shù)量 對(duì)照數(shù)量 基因 基因功能高加索及美國(guó)人 309 964 GSTT1 香煙致癌物代謝 高加索及德國(guó)人 52 235 UGT1A7 香煙致癌物代謝 高加索、西班牙、 365 379 NAT1 香煙致癌物代謝 非洲及北美人群 高加索及美國(guó)人 309 964 XRCC1 堿基切除修復(fù) 多人群GWAS 3851 3934 ABO 血型抗原中國(guó)人 163 337 MTHFR/TS 葉酸代謝中國(guó)人 397 907

21、 FasL/CASP8 死亡受體通路 中國(guó)人 393 786 COX2 前列腺素合成基因檢測(cè)：疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)與評(píng)價(jià)45染色體6q13拷貝數(shù)變異與胰腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系組別胰腺癌 (n = 420)對(duì)照 (n = 817)P * No. (%) No. (%)性別0.659 男性 265 (63.10) 505 (61.81) 女性 155 (36.90) 312 (38.19)年齡 (y)0.503 40 22 (5.24) 40 (4.90) 41-60 174 (41.43) 367 (44.92) 60 224 (53.33) 410 (50.18) * Two-sided 2 test.基

22、因檢測(cè)：疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)與評(píng)價(jià)胰腺癌病例和對(duì)照的基本資料46染色體6q13拷貝數(shù)變異與胰腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系拷貝數(shù) 胰腺癌 (n=420)對(duì)照 (n=817)OR* (95% CI)PNo. (%)No. (%)2 拷貝 144 (34.28) 364 (44.55)1.00 (reference)1 拷貝 233 (55.48) 362 (44.31)1.75 (1.332.31)7.5610-5 0 拷貝 43 (10.24) 91 (11.14)1.07 (0.681.69)0.780 或 1 拷貝 276 (65.72) 453 (55.45) 1.61 (1.242.11) 4.4110-

23、4*Data were calculated by logistic regression, adjusted for sex, age and smoking status.基因檢測(cè)：疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)與評(píng)價(jià)結(jié)論：染色體6q13拷貝數(shù)變異與胰腺癌發(fā)病相關(guān) 拷貝數(shù)多態(tài)定位：chr6: 74,648,791-74,659,169Jian Shen, J, et al, Cancer Cytopathol, 2009;117:21727.包括3個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目：k-ras基因突變15個(gè)抑癌基因雜合性丟失 (LOH) 分析 胰腺囊腫液中DNA 質(zhì)量檢定 符合下述標(biāo)準(zhǔn)者定為“異?！?k-ras 基因突變 LOH

24、有兩個(gè)位點(diǎn)突變高質(zhì)量 DNA如無(wú)上述異常，則定為良性非黏蛋白胰腺囊腫胰腺癌分子診斷：PathFinderTGPathFinderTG 分子診斷標(biāo)準(zhǔn)分子診斷（MDx）標(biāo)準(zhǔn)良性非黏蛋白囊腫1. DNA質(zhì)量低到中等，和：2. 未見(jiàn)k-ras基因點(diǎn)突變，和：3. LOH75%), 或：2. LOH2個(gè)位點(diǎn)，高幅度(75%)分子診斷改善胰腺癌的治療可疑胰腺癌觀察與等待胰切除術(shù)風(fēng)險(xiǎn)增高胰島素不足可疑胰腺癌 良性，不處理胰腺癌積極治療兩種壞結(jié)果正確選擇理想結(jié)果70%30%分子診斷PathFinderTG基因檢測(cè)：臨床檢驗(yàn)診斷Leighs syndrome （mitochondrial disease）wit

25、h c.418 CT, c.595 CT; in NDUFS3（complex 1） 502022/7/851HER-2 基因表達(dá)赫賽汀治療乳腺癌有效HER-2/neu（僅25-30%乳腺癌有表達(dá)）Trastuzumab（Herceptin，赫賽?。⑺滥[瘤細(xì)胞、減低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的特異的藥靶是Her2Lapatinib (Tykerb, 拉帕替尼)針對(duì)Her2陽(yáng)性、但對(duì)赫賽汀不敏感的乳腺癌細(xì)胞，通過(guò)另一種新的EGFR藥靶基因檢測(cè)：臨床用藥指導(dǎo)（安全、有效用藥）BRCA1和BRCA2突變（乳腺癌和卵巢癌）EGFR因子（結(jié)直腸癌）AFP蛋白（肝癌）Src因子（非小細(xì)胞肺癌）PSA抗原（前列腺特異性抗原

26、）52基因檢測(cè)：臨床用藥指導(dǎo)拉米夫定（Lamivudine）拉米夫定使用小于3個(gè)月，YMDD變異株很少出現(xiàn)當(dāng)連續(xù)使用1年以上，YMDD變異發(fā)生率超過(guò)30%當(dāng)停藥后34個(gè)月，YMDD變異株下降，野生株又恢復(fù)優(yōu)勢(shì)。此時(shí)，病毒又對(duì)拉米夫定重新敏感因此通過(guò)檢測(cè)突變就可以判斷HBV對(duì)拉米夫定的敏感情況，為臨床用藥提供有力的證據(jù)有條件的醫(yī)院可進(jìn)行HBV DNA定量和YMDD變異株檢測(cè)53 YMDD編碼DNA多聚酶（CODON552） 野生株：Tyrosine - Methionine - Aspartate - Aspartate（YMDD）（ 酪氨酸 ） - （蛋氨酸 ） - （天門(mén)氡氨酸）-（天門(mén)氡氨

27、酸 ） 變異株1：Tyrosine - Valine -Aspartate - Aspartate （YVDD） （ 酪氨酸 ） - （纈氨酸 ）- （天門(mén)氡氨酸）-（天門(mén)氡氨酸 ） 變異株2：Tyrosine - Isole-Aspartate - Aspartate （YIDD） （ 酪氨酸 ） - （異亮氨酸 ）- （天門(mén)氡氨酸）-（天門(mén)氡氨酸 ）基因檢測(cè)：臨床用藥指導(dǎo)拉米夫定（Lamivudine）54YMDD突變檢測(cè)常見(jiàn)方法1. 基因測(cè)序法（最好）2. 熒光定量PCR方法基本原理確定探針特定的TM值來(lái)區(qū)分是否突變常用方法覆蓋突變位點(diǎn)熒光雙探針雜交 YIDD YMDD YVDD46.9

28、1 54.64 50.74檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專(zhuān)家小組腫瘤病人病人篩選和同意血液，腫瘤活檢以及腫瘤樣本收藏DNA 提取遺傳突變的檢測(cè)突變位點(diǎn)的確定 DNA測(cè)序突變位點(diǎn)的驗(yàn)證Molecular Profile 報(bào)告生成腫瘤醫(yī)生治療方案 的確定記錄Molecular Profile對(duì)治療的影響記錄相應(yīng)配對(duì)的治療方法的效益和毒性隨訪隨訪腫瘤個(gè)體化治療風(fēng)險(xiǎn)分析預(yù)測(cè)個(gè)體化治療腫瘤發(fā)生的遺傳缺陷(BRCA1,2)預(yù)測(cè)對(duì)藥物的可能反應(yīng)用不同的特異性藥物預(yù)后預(yù)測(cè)病情可能的發(fā)展趨勢(shì)無(wú)腫瘤健康狀態(tài)接受治療狀態(tài)有腫瘤狀態(tài)腫瘤個(gè)體化治療基因分析，檢驗(yàn)診斷克服抗藥性制定病人個(gè)體特異的靶向治療1）全世界肺癌發(fā)病例超過(guò)百萬(wàn)人。肺癌死亡

29、率是所有癌癥中最高的。85%左右的肺癌是非小細(xì)胞肺癌（NSCLC)。2）EGFR 因?yàn)樵诮^大多數(shù)的NSCLC表達(dá)較高，以此被作治療靶標(biāo)。3）Iressa/Gefitinib 是EGFR的小分子抑制劑（抑制EGFR自身磷酸化而阻滯傳導(dǎo)，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖）?？蓪?duì)絕大多數(shù)的NSCLC沒(méi)有治療效果。4）Iressa/Gefitinib 只對(duì)有特定EGFR突變體的NSCLC （20%）有效。非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的治療Pao W et al; Nature Cancer Review, 2010, 10:760-敏感性突變體抗藥性突變體Lynch TJ et al; N Engl J Med 20

30、04; 350:2129-蛋白酪氨酸激酶抑制劑 （TKI）敏感和抗藥性的EGFR點(diǎn)突變EGFR Mutations and its Association to Responses to EGFR Targeted Therapy Cheng et al, 2012, Modern Pathology, 25:347-Pao W et al; Nature Cancer Review, 2010, 10:760-無(wú)篩選病人群有EGFR點(diǎn)突變的病人群Pao W et al; Nature Cancer Review, 2010, 10:760-CGHCheng et al, 2012, Mode

31、rn Pathology, 25:347-The Discovery of EML4 and ALK Fusion in NSCLC ALK: Receptor Tyrosine KinaseCrizotinib: a smallmolecule specific inhibitor for ALK (PF)Whole genome wide sequencing and RNA sequencing（棘皮動(dòng)物微管相關(guān)蛋白-間變性淋巴瘤激酶）Treating EML4-ALK+ Advanced NSCLC with Crizotinib 1) 6個(gè)月療程, 57% 的病人對(duì)治療有反應(yīng)。2)

32、6個(gè)月progression-free survival 有 72%。E. L. Kwak et al ., N. Engl. J. Med . 363, 16931703 (2010).Sci. Transl. Med. 2012, 4:120-Allelic-PCR based diagnosis/sequencing 引起Crizotinib抗藥性的多種ALK的點(diǎn)突變Cheng et al, 2012, Modern Pathology, 25:347-主要Driver Mutations在肺癌里的出現(xiàn)頻率基因檢測(cè)技術(shù)個(gè)體化治療的倫理、法律、社會(huì)問(wèn)題1.保護(hù)個(gè)人基因信息隱私權(quán) 未經(jīng)本人同

33、意，均不能獲知相關(guān)的個(gè)人基因信息。 尊重被檢者本人因種種原因而不愿知道自己某些基因信息的選擇。 基因檢測(cè)單位應(yīng)制定合理獲得、轉(zhuǎn)移、保留個(gè)人遺傳信息的程序和規(guī)定。2.尊重個(gè)人基因知情權(quán)檢測(cè)前，必須告知被檢者檢測(cè)的目的、意義、程序、結(jié)果及風(fēng)險(xiǎn)。 經(jīng)被檢者本人同意，而得出的檢測(cè)結(jié)果，應(yīng)當(dāng)真實(shí)地告知被檢者。 科學(xué)地、全面地、正面地向其解釋在疾病發(fā)生中的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估以及在藥物治療當(dāng)中的積極意義，使其能正確地、積極地對(duì)待個(gè)體的基因信息。3.反對(duì)基因歧視原則 個(gè)人的基因信息可能帶來(lái)基因歧視。要保護(hù)個(gè)體不受基因歧視，在當(dāng)今首要的是要保護(hù)個(gè)人基因信息的隱私，其次就是要建立完善的法律體系和社會(huì)道德體系。 在個(gè)體化治療的基因檢測(cè)中，雖然不是以遺傳性疾病檢測(cè)和疾病預(yù)測(cè)為目的，但因其仍需檢測(cè)基因突變且存在潛在的疾病易感性和預(yù)后預(yù)測(cè)的可能，會(huì)帶