玉竹提取物A對1型糖尿病小鼠血糖及細(xì)胞因子的調(diào)控作用

1、玉竹提取物A對1型糖尿病小鼠血糖及細(xì)胞因子的調(diào)控作用金艷書莊曉燕吳學(xué)敏李宏偉劉運(yùn)芝【關(guān)鍵詞】玉竹摘要：目的：研究1型糖尿病D的產(chǎn)生與細(xì)胞因子作用的干系及玉竹提取物AEAPAA對鏈脲佐菌素STZ誘導(dǎo)的1型糖尿病小鼠下稱STZ小鼠血糖和細(xì)胞因子的影響。要領(lǐng)：昆明小鼠60只，對EAPAA舉行急性毒性實行。接納STZ小劑量屢次注射誘導(dǎo)1型糖尿病小鼠模子，正常比擬組與D比擬組各1組，實行組分三個劑量腹腔注射等體積EAPAA，用藥4周監(jiān)測血糖變革，4周后應(yīng)用ELISA法檢測外周血血清IL4、IL10、IFN含量。結(jié)果：急性毒性實行表現(xiàn)EAPAA毒性作用很低，LD50=14.5124g/Kg；D比擬組與正常

2、比擬組比力IL4、IL10低落，IFN升高；實行組與D比擬組比力血糖顯著低落，IL4、IL10升高，IFN低落。結(jié)論：1型D的產(chǎn)生與細(xì)胞因子IL4、IL10低落，IFN升高有關(guān)，EAPAA寧靜范疇大，可調(diào)治STZ小鼠發(fā)病歷程中細(xì)胞因子程度，干預(yù)1型D產(chǎn)生生長。關(guān)鍵詞：1型糖尿?。挥裰裉崛∥顰；急性毒性實行；細(xì)胞因子1型糖尿病diabetesellitus，D是胰島細(xì)胞舉行性損害和胰島素排泄不敷的自身免疫性疾病，其詳細(xì)的發(fā)病機(jī)理尚未完全闡發(fā)。一樣平常以為其發(fā)病除了與遺傳因素、環(huán)境因素有關(guān)外，免疫應(yīng)答是啟動因素，表現(xiàn)為細(xì)胞免疫和體液免疫均有非常，而細(xì)胞因子在此歷程中大概起著主導(dǎo)作用1,2。玉竹Pl

3、ygnatudratuill.Drue為百合科黃精屬中草藥，含有多糖、生物堿、甾體皂甙等。玉竹的枯燥根莖，性平、味甘，具養(yǎng)陰、潤燥、除煩、生津止渴等成果,有強(qiáng)心、擴(kuò)張血管、落血糖、落血脂、和抗腫瘤等作用35。本實行所接納的玉竹提取物AextratinAfplygnatudratu,EAPAA是玉竹的枯燥根莖經(jīng)水醇法30%乙醇提取而得，通過不雅察它對STZ小鼠血糖血清IL4、IL10、IFN程度的影響，旨在探究EAPAA對STZ小鼠血糖和細(xì)胞因子的調(diào)控作用。1質(zhì)料和要領(lǐng)11質(zhì)料111實行動物昆明小鼠60只，牝牡各半，體重1820g；57BL小鼠50只，雄性，體重1820g,購自中國醫(yī)科大學(xué)實行動

4、物中央。112重要試劑EAPAA：玉竹產(chǎn)自錦州凌海市溫滴樓鄉(xiāng)，將2.5Kg玉竹枯燥根莖洗凈、去須根、切碎，30%乙醇浸提，G4過濾分散，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)接納乙醇，得黃棕色沉淀烘箱枯燥后成780g浸膏備用，利用前別離配制成所需濃度的溶液，高壓滅菌。STZ美國siga公司；小鼠IL4、IFN試劑盒入口分裝，北京晶美公司；小鼠IL10試劑盒原裝入口，美國BenderedSystes公司；血糖試紙美國強(qiáng)生公司；尿糖試紙廣州越秀東方新科技研究所研制消費(fèi)。113重要儀器血糖儀neTuhI型血糖儀，美國強(qiáng)生公司；酶標(biāo)儀DG3022A型，上海。12實行要領(lǐng)121急性毒性試驗60只重約1820g的康健昆明小鼠(牝

5、牡各半)隨機(jī)分成6組，每組10只，每只腹腔注射相應(yīng)劑量的EAPAA0.5l。一次性給藥后馬上不雅察中毒病癥并記載殞命動物只數(shù)。122實行動物分組及動物模子制備將50只57BL小鼠隨機(jī)分為5組，此中實行組分為3個劑量組，以近似LD501/15劑量的1g/Kg作為底子給藥量，另取其2倍、4倍量，即：1g/Kg(EAPAA1組)、2g/KgEAPAA2組、4g/KgEAPAA3組；設(shè)正常比擬組ntrl和糖尿病比擬組(D)，每組10只。應(yīng)用0.1l/l枸櫞酸鈉緩沖液pH4.4配制成0.4STZ溶液，按40g/Kg劑量腹腔注射，天天1次，一連5天，每周別離測血糖、尿糖1次，動態(tài)監(jiān)測1型D模子的形成，除正

6、常比擬組小鼠外只注射等體積枸櫞酸鈉緩沖液，別的組制備1型D模子，以血糖11.4l/l，尿糖+以上2周，為模子制做樂成6。低于此值棄去。小鼠自由飲食、飲水，不限量、尺度飼料錦州醫(yī)學(xué)院實行動物中央提供。正常比擬組與D比擬組，腹腔注射生理鹽水0.5l，逐日1次，共4周；EAPAA1組EAPAA1g/Kg、EAPAA2組EAPAA2g/Kg、EAPAA3組EAPAA4g/Kg，別離以等體積0.5l腹腔注射，逐日1次，共4周。123血糖、尿糖測定空腹血糖測試接納末梢全血快速血糖測定法，剪尾取血，血糖儀檢測。尿糖程度接納廣州越秀東方新科技研究所研制消費(fèi)的尿糖試紙檢測。用藥前及用藥歷程中每周檢測一次，共4周

7、。124細(xì)胞因子檢測小鼠死前用摘眼球法取血，4離心分散血清，分裝成100l置-20保存。接納ELISA試劑盒，操縱要領(lǐng)按試劑盒說明舉行。全部標(biāo)本同批測定。125統(tǒng)計學(xué)處置懲罰接納SPSS11.5統(tǒng)計軟件舉行統(tǒng)計闡發(fā)，實行數(shù)據(jù)均以s表現(xiàn)，組間比力接納方差闡發(fā)。P0.05為有明顯性差異，P0.01為差異非常明顯。2實行結(jié)果21小鼠急性毒性試驗結(jié)果按照預(yù)實行結(jié)果斷定劑量范疇11.1734，12.4897，13.9609，15.6055，17.4439，19.5gKg-1，劑距為1.1178。牝牡小鼠在注射EAPAA后，均出現(xiàn)四肢伏地、蜷縮，高劑量出現(xiàn)跳躍、殞命。19.5gKg-1組小鼠約10in殞命

8、；17.4439gKg-1組小鼠約25in殞命，存活2只；15.6055gKg-1組小鼠約60in后有6只殞命；13.9609gKg-1組小鼠殞命5只；12.4897gKg-1組小鼠殞命2只；11.1734gKg-1組小鼠殞命1只。存活小鼠約2后有規(guī)復(fù)，但運(yùn)動淘汰，4后開始進(jìn)食。7后剖解不雅察到內(nèi)臟器官無非常。用寇氏法盤算LD50為14.5124gKg-1，95%可信限為13.564215.4606gKg-1。22模子制備STZ溶液腹腔注射,天天一次,一連注射5天后,小鼠血糖呈一連上升趨勢,在注射后15天至20天,血糖到達(dá)岑嶺狀態(tài),以后稍有必然幅度的落落,但不停不變在較高程度。第2周開始,1/

9、3模子鼠尿糖出現(xiàn)+、+不等，到第4周,90%小鼠尿糖出現(xiàn)+。各組1型D小鼠隨著血糖,尿糖程度上升,出現(xiàn)飲食、飲水量增多改變。23血糖測定用藥前D比擬組小鼠空腹血糖程度與實行組無明顯性差異；用藥后D比擬組小鼠空腹血糖程度顯著高于EAPAA各組；用藥后1周EAPAA1組與D比擬組比力P0.05，24周P0.01；EAPAA2組、3組與D比擬組比力均P0.01；EAPAA1組與EAPAA2組、3組比力P0.01；EAPAA2組與EAPAA3組比力，無顯著差異P0.05。見表1。24血清IL4、IL10、IFN程度ELISA法測定各組小鼠血清IL4、IL10、IFN程度結(jié)果表現(xiàn)，與正常比擬組比力，D比

10、擬組IFN程度顯著升高，IL4、IL10程度顯著低落；與D比擬組比力EAPAA各組IFN程度有差異程度的低落，IL4、IL10程度有差異程度升高，靠近乃至凌駕正常程度，EAPAA1組差異明顯P0.05；EAPAA2組、3組差異非常明顯P0.01；實行組組間比力，EAPAA1組與2組、3組比力P0.01；2組與3組比力P0.05。見表2。表1EAPAA對STZ小鼠血糖的影響(略)注：與D比擬組比力，*P0.05，*P0.01；EAPAA2、3組與EAPAA1比力，P0.01。表2EAPAA對STZ小鼠血清IL4、IL10、IFN程度影響(略)注：與D比擬組比力，*P0.05,*P0.01；EAP

11、AA2、3組與EAPAA1比力，P0.01；EAPAA2與3組比力，#P0.05。3討論很多證據(jù)支持型糖尿病是一種因免疫調(diào)治機(jī)制紊亂所導(dǎo)致的自身免疫性疾病，研究創(chuàng)造1型D的產(chǎn)生、希望由Th1Th2型自身反響性T細(xì)胞之間平衡環(huán)境所決定。Th1細(xì)胞促進(jìn)1型D的產(chǎn)生、生長，而Th2細(xì)胞那么起庇護(hù)作用7。Th1排泄IFN，對Th0向Th2分化有按捺作用，而Th2排泄的IL4、IL10，加強(qiáng)Th2按捺Th1的天生，Th1是Th2的按捺細(xì)胞，反之亦然。它們在免疫調(diào)治中互相拮抗，起著非常玄妙的作用。鏈脲佐菌素streptztin，STZ是一種含亞硝基化合物，能特異性粉碎胰島細(xì)胞，機(jī)制之一是通過誘導(dǎo)N的合成增

12、長對胰島細(xì)胞的氧化侵襲，與1型D病人發(fā)病時體內(nèi)氧化侵襲增長相雷同。小劑量屢次注射STZ誘導(dǎo)糖尿病模子可有用的模擬1型D病程及發(fā)病機(jī)理，實用于1型D發(fā)病機(jī)理的研究8,9。本研究樂成創(chuàng)立STZ小劑量屢次注射誘導(dǎo)1型糖尿病動物模子，結(jié)果表白D比擬組與正常比擬組比力IFN程度顯著升高，IL4、IL10程度顯著低落，這與以往的大量報道相切合10,11，進(jìn)一步證明了1型D的產(chǎn)生與細(xì)胞因子嚴(yán)密相干。研究創(chuàng)造，EAPAA腹腔注射可低落STZ小鼠血糖。上調(diào)外周血IL4、IL10的表達(dá)，下調(diào)IFN的表達(dá)。因此提示EAPAA對STZ小鼠的落糖作用與調(diào)治細(xì)胞因子比例失衡，改正免疫失控狀態(tài)，調(diào)治Th0、Th1細(xì)胞向Th

13、2轉(zhuǎn)化有關(guān)。從而使Th1細(xì)胞介導(dǎo)的胰島炎和細(xì)胞損傷歷程減輕或停頓。通過免疫干預(yù)低落血糖，起到治療作用。實行創(chuàng)造，差異劑量EAPAA治療結(jié)果差異。本實行通過EAPAA三個劑量組對STZ小鼠免疫干預(yù)作用的比擬不雅察，豈論是血糖，照舊血清細(xì)胞因子含量EAPAA2組、3組，即2g/Kg、4g/Kg，結(jié)果均優(yōu)于1g/Kg組P0.01。2g/Kg組與4g/Kg組比力血糖值無明顯性差異，血清細(xì)胞因子含量上卻有明顯性差異，4g/Kg組優(yōu)于2g/Kg組P0.05。因此提示，隨著藥物劑量的增長，藥效也隨之明顯，免疫體系對此比力敏感，起首表現(xiàn)出來。如增大用藥劑量或恒久用藥是否能在分子免疫學(xué)程度得到改進(jìn)的底子上，使細(xì)

14、胞與構(gòu)造損傷程度上得到徹底改進(jìn)，有待進(jìn)一步研究。如今D已成為一種發(fā)病率高且呈逐年上升趨勢的常見玻1型糖尿病占糖尿病患者總數(shù)510，天下1型D總數(shù)至少100萬，此中多數(shù)為兒童及青少年患者。他們必要依賴外源胰島素存活，造成很多家庭精力上和經(jīng)濟(jì)上的宏大壓力。EAPAA急性毒性實行結(jié)果表現(xiàn)，LD50=14.5124gKg-1是本實行有用劑量的14.5倍，顯效劑量的3.6倍，寧靜性大，加之自然性、泉源普及、制備便利，有望成為1型D免疫干預(yù)的新型防治方法。對其藥物身分、用藥劑量、落糖機(jī)制另有待進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn)3江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭書上冊.上?？茖W(xué)技能出書社,1985,55112.6abinvithA,Anupdateinytk