澤瀉提取物自由基清除能力的研究

1、澤瀉提取物自由基掃除本領的研究【摘要】目的研究澤瀉提取物差異部門的自由基掃除活性。要領接納有機溶劑萃取法和大孔樹脂洗脫法將澤瀉總提取物分為石油醚部門、醋酸乙酯部門、正丁醇部門、乙醇部門、乙醇洗脫部門和水提部門。別離觀察對羥自由基(H)、超氧陰離子自由基(2-)、DPPH自由基(DPPH)和H22的掃除結果。結果澤瀉正丁醇部門在掃除2-和H22本領較強，醋酸乙酯部門掃除DPPH較強，而澤瀉水提部門掃除H自由根本領較強，并且結果好于維生素。結論澤瀉正丁醇部門、醋酸乙酯部門和水提部門掃除自由根本領強?！娟P鍵詞】澤瀉DPPH超氧陰離子自由基羥自由基Keyrds：Alisarientalis;DPPH;

2、Superxidefreeradial;Hydrxylradial澤瀉系澤瀉科植物澤瀉Alisarientalis(Sa.)Juzep.的枯燥塊莖,在歷代本草和?中國藥典?中均有收載。當代藥效學研究表白,澤瀉具有利尿消腫、抗脂肪肝、落血脂等作用13。有研究報道，澤瀉總提取物能低落大鼠和兔血液中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物DA的含量，進步血液中抗氧化酶SD活力，對付氧化應激/脂質(zhì)過氧化損傷具有必然庇護作用4。為了明白澤瀉抗氧化的作用部位，筆者接納有機溶劑萃取法和大孔樹脂洗脫法，將澤瀉的總提取物分為石油醚部門、醋酸乙酯部門、正丁醇部門、乙醇部門、乙醇洗脫部門和水提取部門，別離對提取物的各部門舉行了掃除羥自由基、

3、超氧陰離子自由基、DPPH自由基和H22結果的研究，為進一步探究澤瀉提取物的抗氧化性能提供根據(jù)。1東西澤瀉，購自江西廣昌,按中藥炮制范例得到飲片,再破壞得到20目顆粒；乙醇、石油醚、正丁醇、醋酸乙酯、鄰苯三酚、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、Hl、V、FeS4、雙氧水、水楊酸、DPPH均為闡發(fā)純。T6型紫外可見分光光度計北京普析通用儀器，N-1001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀東京理化公司，TDL-5型低速臺式離心機上海安亭科學儀器廠，AR5120型電子天平美國奧豪斯公司。2要領2.1澤瀉提取物的制備取澤瀉顆粒，去離子水提取，濃縮，提取液乙醇醇沉，靜置24h，5000r/in離心10in,取上清液，濃縮到原體積

4、的1/4后，別離用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃齲末了將萃取水相過大孔樹脂，用95%乙醇洗脫，別離得到澤瀉水提部門、醇提部門、石油醚部門、醋酸乙酯部門、正丁醇部門和乙醇洗脫部門6個部門，將各部門濃縮后，配成必然濃度溶液，安排備用。2.2超氧陰離子自由基5的掃除鄰苯三酚在弱堿條件下產(chǎn)生自氧化，產(chǎn)生2-。2-掃除劑能使鄰苯三酚自氧化產(chǎn)物在325n處的汲取峰削弱，通過吸光值A325的變革率盤算對2-的掃除本領。取4l0.05l/LTris-Hl緩沖液pH8.2，置于25水浴中預熱20in，別離參加1l待測液和1l25l/L鄰苯三酚溶液，混勻后于25水浴中反響5in，參加0.1l8%的Hl停頓反響，在32

5、5n處測A值，以1l蒸餾水取代待測液作空缺試驗。以維生素作陽性比較。掃除率(P)=A3-(A1-A2)/A3100%此中A1為某濃度的澤瀉提取物吸光值，A2不參加鄰苯三酚無顯色時的吸光值，A3不加澤瀉提取物的吸光值。2.3羥自由基6的掃除使用Fe2+與H22混淆產(chǎn)生H，以H氧化水楊酸所得產(chǎn)物的吸光值表現(xiàn)H的幾多，吸光值越大，H越多。反響試管中參加0.5l9l/LFeS4，0.5l9l/L水楊酸-乙醇溶液及1l差異濃度的澤瀉提取物，末了加5l9l/LH22啟動反響。37溫浴1h，于510n處測A值。以維生素作陽性比較。掃除率(P)=A3-(A1-A2)/A3100%此中A3為比較不加澤瀉提取物的

6、吸光值；A1為某濃度澤瀉提取物的吸光值；A2為無顯色劑時的該濃度的本底值。2.4DPPH自由基7的掃除DPPH是一種不變的自由基，與抗氧化劑產(chǎn)生反響，提供H被復原，顏色由深紫色變?yōu)榈S色，當有自由基掃除劑存在時，DPPH的單電子被配對而使顏色變淺，變淺的程度與配對電子數(shù)成化學計量干系，因此，我們可以通過吸光度的測定來檢測自由基的掃除環(huán)境,從而評價試驗樣品的抗氧化本領。根據(jù)Larrauri要領，2l新配制的20l/LDPPH溶液中參加2l差異濃度的澤瀉提取物，室溫暗光下反響30in，在517n處測定A值，以維生素作陽性比較。掃除率(P)=A3-(A1-A2)/A3100%，此中A1為參加澤瀉提取

7、物和DPPH時的吸光值；A2為參加澤瀉提取物但不參加DPPH時的吸光值；A3為不加澤瀉提取物，參加DPPH時的吸光值。2.5H228的掃除H22自身沒有活性，但它在細胞構造里可產(chǎn)生H，從而對細胞有毒副作用8。因此，掃除H22對細胞和食品體系的抗氧化防范有非常緊張的意義。在10l具塞試管中參加2.8l50l/L磷酸緩沖液(pH=7.4)配制的0.5l/LH22溶液,再參加0.4l澤瀉提取物,反響10in后,于230n處測定A值,以同濃度的維生素為比較品,盤算掃除率。掃除率(P)=(A1-A0)/A0100%此中,A0為不含澤瀉提取物的吸光值；A1為含澤瀉提取物的吸光值。3結果與闡發(fā)3.1澤瀉提取

8、物掃除超氧陰離子自由基的本領澤瀉提取物各部門掃除超氧陰離子自由基的本領見圖1。從圖中可以看出，隨濃度增大，澤瀉提取物各部門的掃除率也隨著增大。正丁醇部門在濃度大于4g/l時，其掃除超氧陰離子自由根本領要高于比較品維生素，而石油醚部門總體掃除超氧陰離子自由根本領最弱。圖1澤瀉提取物掃除超氧陰離子自由根本領略3.2澤瀉提取物掃除羥自由基的本領澤瀉提取物各部門羥自由基掃除本領見圖2。由圖2看出，水提部門掃除羥自由基的本領最強，在濃度10g/l時，其掃除率到達99.71%；乙醇洗脫部門次之，正丁醇部門和石油醚部門那么總體較弱。圖2澤瀉提取物掃除羥自由基(H)本領略3.3澤瀉提取物掃除DPPH的本領澤瀉

9、提取物各部門DPPH掃除本領見圖3。由圖3看出，各部門掃除本領隨濃度增大而加強。醋酸乙酯部門在濃度為110g/l間，掃除率均較高，其掃除率都在92.39%以上；各部門掃除DPPH本領由大到小挨次為：醋酸乙酯部門比較品維生素乙醇洗脫部門正丁醇部門乙醇部門水提部門石油醚部門。圖3澤瀉提取物掃除DPPH本領略3.4澤瀉提取物掃除H22的本領澤瀉提取物各部門H22掃除本領見圖4。由圖4看出，除澤瀉提取物正丁醇部門掃除H22本領稍強外，澤瀉提取物別的部門掃除H22的本領均較弱，當濃度小于6g/l時掃除結果不顯著，且在68g/l間只有小幅增長。圖4澤瀉提取物掃除H22本領略4討論從實行結果看到，澤瀉醋酸乙酯部門表現(xiàn)出高掃除DPPH的本領，水提部門那么表現(xiàn)出較高的掃除羥自由根本領，正丁醇部門除掃除超氧陰離子自由根本領較高外，同時另有必然的掃除H22本領，因此，澤瀉提取物具有較高的自由基掃除本領。當代研究表白，自由基在細胞內(nèi)可產(chǎn)生多位點損傷，這些損傷的積聚會促使機體老化和引發(fā)諸如癌癥、高脂血癥、糖尿病等相干疾玻澤瀉的自由基掃除本領較高，推測可以對抗或減低上述損傷的產(chǎn)生或生長，這與?神農(nóng)本草經(jīng)?紀錄澤瀉有養(yǎng)五臟益力氣久服線人智慧、延年輕身的作用相符合，可為闡述澤