細菌染色技術及大小測定PPT課件

1、第一部分 細菌的染色技術目的要求染色劑和染色的原理實驗材料實驗程序第1頁/共15頁目的要求 掌握微生物的染色原理 掌握染色的基本操作技術 掌握微生物的一般染色法和革蘭氏染色法第2頁/共15頁染色劑和染色原理 微生物染色的基本原理：細菌機體無色透明，與背景反差小，可將細菌染色，增加其反差；細菌在通常培養(yǎng)狀態(tài)下總帶負電荷，故可用帶正電荷的堿性染料染色。 染色劑 染料按其電離后所帶電荷的性質可分為以下類型： 1. 酸性染料：如酸性復紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑等。 2. 堿性染料：一般有堿性復紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結晶紫、美蘭、甲基紫等，細菌易被堿性染料染色。 3. 中性（復合）染料：如伊紅、

2、美蘭等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于細胞核染色）。 4. 單純染料：這類染料的化學親和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類的染料。第3頁/共15頁染色劑和染色原理微生物染色常用染料如下表：第4頁/共15頁實驗材料 顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、接種環(huán)、載玻片、酒精燈。 石炭酸復紅染液、草酸銨結晶紫染液、革氏碘液、95乙醇、蕃紅染液 菌種：枯草桿菌、大腸桿菌第5頁/共15頁實驗程序 （細菌染色的方法和步驟） 細菌染色的方法: 1. 簡單染色法：用一種染色液染菌體后，就可以觀察微生物的大小、形狀和細胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構造等。 2

3、. 復染色法：用兩種或兩種以上染色液進行染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、細胞染色法等。 染色技術的一般過程 涂片干燥固定染色媒染脫色復染水洗干燥鏡檢第6頁/共15頁實驗程序 （簡單染色的方法和步驟） 簡單染色法(一般染色法) 1.涂片 2.干燥：自然晾干或酒精燈高處微微加熱。 3.固定 4.染色：在整個涂面上滴加染色液，染色min。 5.水洗：傾去染液，用自來水細流沖洗至流下的水中無染料顏色為止。 6.吸干 7.鏡檢第7頁/共15頁實驗程序 （革蘭氏染色的方法和步驟） 革蘭氏（Gram）染色法 1. 涂片、干燥、固定

4、2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結晶紫染液染1min，傾去染液，流水沖洗至無紫色。 3. 媒染：加革氏碘液媒染1min，水洗。 4. 脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進行脫色約30s45s，接著立即用流水沖洗。 5. 復染：滴加番紅染色液染1min，水洗后用吸水紙吸干。 6. 鏡檢：觀察染色結果并繪圖。第8頁/共15頁第二部分 細菌大小的測定目的要求 學習使用目測微尺和物測微尺在顯微鏡下測定微生物大小的方法。第9頁/共15頁 測定的工具：目測微尺和物測微尺 目測微尺是一圓形玻片，其中央刻有5mm長、等分為50格的標尺，每格的長度隨使用目鏡和物鏡的放大倍數(shù)及鏡筒長度而定。使用前用物鏡測微尺標

5、定，用時放在目鏡內。 物測微尺是一厚玻片，中央有一圓形蓋玻片，中央刻有1mm長的標尺，等分為100格，每格為10m用以標定目測微尺在不同放大倍數(shù)下每格的實際長度。第10頁/共15頁目測微尺的標定： 將目測微尺裝入目鏡的隔板上，刻度朝下；把物測微尺放在載物臺上，刻度朝上。 用低倍鏡找到物測微尺的刻度，移動物測微尺和目測微尺使兩者的第一條刻度線重合，順著刻度找出第二條的刻度線。 計算兩刻度間目測微尺的格數(shù)和物測 微尺的格數(shù)。 由于物測微尺的刻度每格長10m，得( m)10 物測微尺格數(shù)目測微尺每格長度目測微尺格數(shù)第11頁/共15頁菌體大小的測定 取下物測微尺，將細菌染色標本置于載物臺上，然后在油鏡

6、下用目鏡測微尺測量菌體的長和寬。注意： 校正目測微尺必須針對特定的顯微鏡和附件（特定的物鏡、目鏡、鏡筒長度等）進行，而且只能在這特定的情況下才可重復使用。第12頁/共15頁實實 驗驗 三三結結 束束第13頁/共15頁實驗安排實驗內容實驗內容034060313406031034060323406032034060333406033顯微鏡的使用及微生物顯微鏡的使用及微生物形態(tài)觀察形態(tài)觀察16周，周二周，周二56節(jié)節(jié)16周，周三周，周三晚上晚上16周，周五周，周五晚上晚上細菌培養(yǎng)基的制備、滅細菌培養(yǎng)基的制備、滅菌及接種、培養(yǎng)技術菌及接種、培養(yǎng)技術17周，周二周，周二58節(jié)節(jié)17周，周三周，周三晚上晚上17周，周五周，周五晚上晚上細菌的染