甾體激素類藥物的分析、結(jié)構(gòu)和鑒別測定

1、甾體激素類藥物的分析、結(jié)構(gòu)和鑒別測定基本要求結(jié)構(gòu)與性質(zhì)鑒 別 試 驗雜 質(zhì) 檢 查含 量 測 定練習與思考概 述基 本 要 求1掌握甾體類藥物的結(jié)構(gòu)特點與分析方 法之間的關(guān)系。2掌握甾體類藥物的鑒別原理與方法。3掌握甾體類藥物的含量測定原理與方法。4熟悉甾體類藥物雜質(zhì)檢查的方法。 回顧 激素（hormone）是生物體內(nèi)特殊的腺體或組織產(chǎn)生的，直接分泌到體液中，通過體液運送到特定的部位，從而引起特殊激動作用的一群微量的有機化合物。 回顧外分泌腺和內(nèi)分泌腺的區(qū)別無排泄管。其分泌物直接進入細胞周圍的血管和淋巴，由血液和淋巴輸送到各組織或器官中。 有排泄管。其分泌物通過腺導管輸送到相應的組織或器官發(fā)揮

2、其調(diào)節(jié)作用。 回顧動物激素植物激素脊椎動物激素無脊椎動物激素氨基酸衍生物激素肽和蛋白質(zhì)激素類固醇激素脂肪酸衍生物激素甲殼類激素昆蟲激素激素 回顧（一）氨基酸衍生物激素 甲狀腺素 腎上腺素 5-羥色胺（二）肽和蛋白質(zhì)激素 這類激素包括由垂體（腺垂體、神經(jīng)垂體），下丘腦、胰腺、甲狀腺、甲狀旁腺、胃腸和胸腺等分泌的激素。 回顧 回顧（三）脂肪酸衍生物激素 前列腺素(prostaglandin,PG） 前列腺烷酸 前列腺烷酸 基本結(jié)構(gòu)：環(huán)戊烷駢多氫菲ABCD12345678910111213141516171819 概述類固醇激素分類：甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素 腎

3、上腺皮質(zhì)激素氫化可的松腎上腺皮質(zhì)激素醋酸地塞米松腎上腺皮質(zhì)激素曲安息龍腎上腺皮質(zhì)激素地塞米松磷酸鈉雄性激素甲睪酮雄性激素丙酸睪酮蛋白同化激素苯丙酸諾龍孕激素黃體酮孕激素醋酸甲地孕酮雌性激素炔雌醇雌性激素雌二醇炔諾酮此外炔諾孕酮一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 1. 腎上腺皮質(zhì)激素主要活性基團性 質(zhì)4 3 酮UV、與羰基試劑反應 C17 醇酮基還 原 性2. 雄性激素及蛋白同化激素主要活性基團性 質(zhì)4 3 酮UV、與羰基試劑反應 C17 羥基可成酯3. 孕激素主要活性基團性 質(zhì)4 3 酮UV、與羰基試劑反應C17 甲酮基與亞硝基鐵氰化納反應4. 雌性激素主要活性基團性 質(zhì)A環(huán)為3OH 苯環(huán)UV、與重氮苯磺酸鹽反應

4、C17 乙炔基與AgNO3反應C17 羥基可成酯二、鑒別試驗（一）與強酸的呈色反應甾體激素類藥物呈色H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl（母核）與硫酸顯色反應 顯 色 熒光 加水稀釋潑尼松龍 深紅 絮狀灰潑尼松 橙 黃藍綠炔雌醚 橙紅 黃綠 紅色 炔雌醇 橙紅 黃綠 絮狀玫紅醋酸可的松 黃或微 褪色并澄 帶橙 清(二) 官能團的反應腎上腺皮質(zhì)激素藥物呈色四氮唑鹽OH1、C17 醇酮基還原性呈色反應此外還有裴林試液、多倫試液甾酮類激素藥物呈色羰基試劑3酮基和C20酮基常用的羰基試劑：2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物呈色亞硝基鐵氰化納間二硝基酚芳香醛

5、3.甲酮基黃體酮藍紫色亞硝基鐵 氰化納其他甾體淡橙色不顯色有機氟F有機破壞有機氯Cl4.有機鹵素茜素氟藍 硝酸亞鈰硝酸硝酸銀AgCl 呈色 雌激素類藥物紅色偶 氮染料重氮苯磺酸5. 酚羥基含炔基的甾體激素銀鹽沉淀硝酸銀6. 乙炔基的沉淀反應 (三)制備衍生物測定m.p.鹽酸氨基脲苯丙酸諾龍縮氨基脲衍生物1. 縮氨基脲的生成m.p.約180（分解）2. 酯的水解丙酸睪酮堿性條件睪酮m.p.為150 156-3-酮、苯環(huán)、其他共軛結(jié)構(gòu)（四）UV法1. 結(jié)構(gòu)依據(jù)240nm左右280nm左右2. 示例 曲安西龍丙酸倍氯米松 溶劑甲醇乙醇20g/ml濃度20g/ml結(jié)果判斷在238nm處有最大吸收在23

6、9nm處有最大吸收，A為 ，在239nm與263nm 處的吸收度比值為結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C17 OH C17 乙炔基炔雌醇（五）IR法1505cm-13505cm-13300cm-11590cm-13610cm-1酚羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨架振動黃體酮結(jié)構(gòu)特征：-3-酮、C17-酮基1700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1C-H雙鍵（六）TLC法 主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別 方法：對照品法 要求供試品溶液所顯主斑點的顏色和位置與對照品溶液的主斑點相同。（七） HPLC法 主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟

7、輕松軟膏） 方法：對照品法 要求在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對照品峰的tR一致。三、 特殊雜質(zhì)檢查（一）其他甾體的檢查 檢查意義：其他甾體與甾體激素藥物結(jié) 構(gòu)相似，也有一定的藥理作 用而又互不相同.檢查方法（具有一定分離能力） TLC法（高低濃度對比法） HPLC法（類似高低濃度對比法）（1）TLC法（高低濃度對比法） 判定方法： 規(guī)定雜質(zhì)斑點數(shù)目 規(guī)定雜質(zhì)斑點顏色例：氫化可的松中其他甾體的檢查供試液：本品+氯仿-甲醇（9：1） 濃度：對照液：供試液（）+氯仿-甲醇（9：1） 60g/ml 層析：供試液 點樣、展開、斑點檢出。 對照液判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點，不得多于3個，其

8、顏 色與對照液的主斑點比較，不得更深。（2）HPLC法（主成分自身對照法） 判定方法： 規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰面積硒的檢查（二）來源 合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫有毒方法藥物氧瓶燃燒二氨基萘比色法測定（三）有機溶劑殘留量的檢查（靈敏度法）甲醇 不得出峰 檢測限丙酮 5.0% 內(nèi)標法 + 校正因子以地塞米松磷酸鈉為例 GC法地塞米松磷酸鈉檢查 甲醇和丙酮 精密稱取本品，置10ml量瓶中，精密加內(nèi)標溶液2ml，加水稀釋至刻度，作為供試液；另精密量取甲醇10l(7.9mg)與丙酮100l(79mg)置100ml量瓶中，精密加內(nèi)標溶液20ml，加水至刻度，作為對照液。照氣相色譜法測定，含丙酮不得

9、過5.0%，并不得出現(xiàn)甲醇峰。（四）游離磷酸鹽的檢查地塞米松磷酸鈉對照品比色法供試液+鉬酸銨+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸 鉬藍：740nm對照液：同上 （對照液 0.0035%KH2PO4）（一）HPLC法USP、BP、JP均采用RPHPLC（大多內(nèi)標法）（甾體激素類藥物常含有結(jié)構(gòu)相似的其他甾體雜質(zhì)，對利用結(jié)構(gòu)特征設計的比色法有干擾）四、含量測定測定對象：甾體激素類藥物的原料和制劑。示例：黃體酮的含量測定色譜條件：固定相 ODS，流動相 甲醇-水 （65:35），檢測波長254nm， 內(nèi)標物 己烯雌酚系統(tǒng)適用性試驗：n 1000，R符合規(guī)定。測定樣品：黃體酮原料、注射液。定量方法：內(nèi)標法對照

10、品溶液供試品溶液己烯雌酚黃體酮（二）UV法-3-酮 240nm（）腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕藥 苯環(huán) 280nm（）雌激素醋酸地塞米松片的含量均勻度檢查（1）配制供試液（2）測定：240nm（3）計算腎上腺皮質(zhì)激素、 雄性激素和蛋白同化激素、孕激素C3酮基（1） 原理異煙腙（黃）酮基異煙肼-3CHCl（縮合）1. 異煙肼比色法（三）比色法異煙腙（黃色）（2）方法對照品法55異煙肼?lián)]去乙醇對照液供試液A暗45（3）討論反應速度（反應專屬性）A.C3= O C17= O 、 C20= O C11= O 不反應反應專屬性 C3酮基B. 溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽甲醇、乙醇無水甲醇無水乙醇C.水分、溫度、O2與光線的影響 含水量腙水解A%不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時 O2與光線無影響t D. 酸的種類和濃度及異煙肼的濃度酸:異煙肼 = 2:1鹽酸濃度0.0074mol/L異煙肼濃度0.00365mol/L最大A 腎上腺皮質(zhì)激素類C17 -醇酮基強還原性（1）原理2. 四氮唑比色法有色甲瓚四氮唑鹽醇酮基-a-17COH -還原三苯甲瓚深紅氯化三苯四氮唑（TTC）紅四氮唑（RT）H藍四氮唑（BT）（2）方法對照品法25氫氧化四甲基銨對照液供試液ATTC4045暗（3）討論A. 基團對反應速度的影響C11= O C11OHC21OH C2