藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)一家兔血漿中頭孢呋辛分析方法的建立

1、實(shí)驗(yàn)一 家兔血漿中頭孢呋辛分析方法的建立藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康募由罾斫馑幋鷦?dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)中體內(nèi)藥物分析的理論知識(shí)、定量分析方法及原理。掌握血漿生物樣本前處理方法。掌握高效液相色譜法（HPLC）的操作方法和注意事項(xiàng)。掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法及繪制注意事項(xiàng)。熟悉生物樣本分析方法驗(yàn)證的流程。實(shí)驗(yàn)原理頭孢呋辛酯在體內(nèi)水解后釋出頭孢呋辛而發(fā)揮其抗菌活性。頭孢呋辛酯脂溶性強(qiáng)，口服吸收良好，吸收后迅速在腸粘膜和門脈循環(huán)中被非特異性酯酶水解為頭孢呋辛，因此，建立HPLC法測(cè)定血漿中頭孢呋辛的濃度。實(shí)驗(yàn)原理內(nèi)標(biāo)法根據(jù)SFDA對(duì)生物樣本分析方法確證的指導(dǎo)原則，對(duì)本方法的專屬性、準(zhǔn)確度、精密度及回收率、線性和穩(wěn)定性等指標(biāo)

2、進(jìn)行了考察本次實(shí)驗(yàn)主要考察線性和準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)操作一、溶液配制1、頭孢呋辛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精密稱取頭孢呋辛10 mg，加入溶液10 mL（甲醇：水=1:1）溶解，得頭孢呋辛濃度為1.0 mg/mL的儲(chǔ)備液，放4冰箱儲(chǔ)存。2、內(nèi)標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)液：精密稱取對(duì)乙酰氨基酚15 mg，加入溶液10 mL（甲醇：水=1:1）溶解，得濃度為1.5 mg/mL的儲(chǔ)備液，放4冰箱儲(chǔ)存。取對(duì)乙酰氨基酚儲(chǔ)備液100 L，加入溶液900 L（甲醇：水=1:1），得濃度為150 g/mL的內(nèi)標(biāo)液。按下表取不同體積頭孢呋辛儲(chǔ)備液于EP管中，用稀釋液溶液（甲醇：水=1：1）進(jìn)行梯度稀釋，制備一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液（1000 L）。取

3、6份空白血漿（80 L），加入不同濃度的頭孢呋辛標(biāo)準(zhǔn)工作液20 L，對(duì)乙酰氨基酚內(nèi)標(biāo)液（150 g/mL）10 L，渦旋10s混勻。標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣本制備按照以下表格制備低、中、高三個(gè)濃度的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)液。取不同濃度的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)液20 L，分別加入80 L空白血漿中，加入乙酰氨基酚內(nèi)標(biāo)液（150 g/mL）10 L，渦旋10s混勻。每個(gè)濃度制備兩份質(zhì)控樣本。質(zhì)控血漿樣本制備（1）待測(cè)樣本（標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控血漿樣本）渦旋10 s，加入甲醇300 L，渦旋1min，靜置3 min。（2）12000 rpm離心5 min，取上清液200 L常溫真空干燥12小時(shí)。（3）待溶劑揮干后，加入100 L甲醇水溶液（水：甲醇 = 8：2）溶解，渦旋1min，12000 rpm離心5 min。（4）取上清液60 L至有內(nèi)稱管的進(jìn)樣瓶（需檢查內(nèi)稱管底部是否有氣泡，否則底部有氣泡影響進(jìn)樣，有氣泡需甩一下），進(jìn)樣20 L。血漿樣本預(yù)處理色譜條件 流動(dòng)相：0.05M磷酸二氫鉀：甲醇梯度洗脫，設(shè)置如下： 檢測(cè)波長：271 nm 結(jié)果記錄：分別記錄各濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品及內(nèi)標(biāo)峰的面積。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。數(shù)據(jù)處理：待實(shí)驗(yàn)四結(jié)束后，一起完成計(jì)算獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控樣本的相應(yīng)數(shù)據(jù)。注意事項(xiàng)注意有機(jī)溶劑的安全使用。注意對(duì)EP管進(jìn)行編號(hào)，避免不同濃