96孔板高通量快速測定食品天然產(chǎn)物總多酚含量TPC_第1頁
96孔板高通量快速測定食品天然產(chǎn)物總多酚含量TPC_第2頁
96孔板高通量快速測定食品天然產(chǎn)物總多酚含量TPC_第3頁
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文檔簡介

1、96孔板高通量測定食品天然產(chǎn)物中的總多酚含量配置試劑準(zhǔn)備 10 毫升稀釋的 Folin-Ciocalteu 試劑(FCR, 2 N, from Sigma, Cat.# F9252-1L ):將1毫升福林酚濃縮液(2N)與9毫升H2O混合。用鋁箔包裹容器，并將其保存在通風(fēng)柜下的儲(chǔ)酸柜中。它應(yīng)該顯示 淺黃色，可以保存幾個(gè)月。7.5% Na2CO3溶液(MW. 105.99):將 0.75g Na2CO3 溶解于 H2O 中， 并使最終體積達(dá)到10ml。沒食子酸母液配制(Mw. 188.1, from Sigma, G-8647):稱取5mg沒食子酸，加10ml甲醇溶液(70%)于離心管中(500

2、ppm)。樣品溶液：您可能需要稀釋樣品，以獲得在線性范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)曲線讀數(shù)。稱取5mg樣品放入離心管中，加入10ml純水，渦旋一分鐘，0.22um微孔濾膜過濾。方法:如下表所示，在1.5毫升離心管中制備一系列濃度增加的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品(0-300 ppm)。沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度.ppm70%甲醇溶液(rL)500 ppm沒食子酸母液(rL)251901050180201001604020012080300801203. 吸取25 UL將上述不同濃度G.A.標(biāo)準(zhǔn)品溶液放入96孔板，每個(gè)濃度重復(fù)3孔。將25 UL樣品(具有不同稀釋度)加到孔中，重復(fù)3個(gè)孔吸取125 mL稀釋的FCR移液至各孔中。輕輕震動(dòng)96孔微孔板，靜置8至10分鐘。吸取125 mL稀釋的Na2CO3溶液至各孔中，反應(yīng)30分鐘。酶標(biāo)儀設(shè)置765 nm讀數(shù).根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算注意事項(xiàng):1.FCR與樣品在酸性條件下發(fā)生反應(yīng)，加入7.5%Na2CO3，顯色要求pH7（以pH 9為最佳）。如果您的樣品用酸化溶劑（1N）提取，可能會(huì)導(dǎo)致最 終反應(yīng)混合物7，導(dǎo)致呈綠色。在這種情況下，您需要用無酸溶劑稀釋樣 品，或在分析前用氫氧化鈉中和樣品。在7pH9的

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