藥物分析學(xué)：各論第二章 芳胺類藥物

1、各論 第二章 含氮類藥物的分析有機(jī)含氮類藥物的分類第一節(jié) 芳胺類藥物的分析1、對(duì)氨基苯甲酸酯結(jié)構(gòu)通式（1）主要化學(xué)性質(zhì)芳伯氨基：顯重氮化-偶合反應(yīng)酯鍵或酰胺鍵：水解反應(yīng)脂烴胺側(cè)鏈?zhǔn)灏返樱喝鯄A性（2）典型藥物 2、芳酰胺類藥物結(jié)構(gòu)通式（1）主要化學(xué)性質(zhì)水解后芳伯氨基特性水解產(chǎn)物易酯化酚羥基的特性(對(duì)乙酰氨基酚)弱堿性：脂烴胺側(cè)鏈?zhǔn)灏返泳哂袎A性非水滴定法與金屬離子發(fā)生沉淀反應(yīng)（2）典型藥物3、鑒別（1）重氮化-偶合反應(yīng)（鹽酸普魯卡因）芳伯氨基或潛在芳伯氨基，均可發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成的重氮鹽可與堿性-萘酚偶合生成有色的偶氮染料。示例1-1 苯佐卡因和鹽酸普魯卡因的芳香第一胺類鑒別試驗(yàn)：取供試

2、品約50mg，加稀鹽酸1ml，必要時(shí)緩緩煮沸使溶解，放冷，加0.1mol/l亞硝酸鈉溶液數(shù)滴，滴加堿性-萘酚試液數(shù)滴，視供試品不同，生成由橙黃到猩紅色沉淀。（2）水解產(chǎn)物反應(yīng)(鹽酸普魯卡因) 鹽酸普魯卡因堿水解可生成二乙氨基乙醇蒸汽均有堿性；苯佐卡因水解后生成乙醇可發(fā)生碘仿反應(yīng)。鹽酸普魯卡因的鑒別方法：取本品約0.1g，加水2ml溶解后，加10%氫氧化鈉溶液1ml，即生成白色沉淀(普魯卡因)；加熱，變?yōu)橛蜖钗?普魯卡因)；繼續(xù)加熱，發(fā)生的蒸氣(部分普魯卡因水解，生成溶于水的對(duì)氨基苯甲酸鈉，以及揮發(fā)性的二乙氨基乙醇)能使?jié)駶?rùn)的紅色石蕊試紙變?yōu)樗{(lán)色；熱至油狀物消失(全部水解，生成可溶于水的對(duì)氨基苯

3、甲酸鈉)后，放冷，加鹽酸酸化，即析出白色沉淀(對(duì)氨基苯甲酸)。此沉淀能溶于過量的鹽酸。（3）與重金屬離子反應(yīng)鹽酸利多卡因的鑒別方法:取本品0.2g，加水20ml溶解后，取溶液2ml，加硫酸銅試液0.2ml與碳酸鈉試液1ml，即顯藍(lán)紫色；加三氯甲烷2ml，振搖后放置，三氯甲烷層顯黃色。（4）酚羥基(對(duì)乙酰氨基酚)（5）制備衍生物測(cè)定熔點(diǎn)eg. 鹽酸丁卡因（6）紫外吸收光譜特征eg. 鹽酸布比卡因（7）紅外吸收光譜eg. 鹽酸普魯卡因的紅外吸收?qǐng)D譜(氯化鉀壓片)4、雜質(zhì)檢查eg. 鹽酸普魯卡因(對(duì)氨基苯甲酸) 雜質(zhì)來源：水解產(chǎn)生對(duì)氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇 結(jié)果導(dǎo)致注射液變黃、療效下降、毒性增加原料

4、藥及注射用滅菌粉末中雜質(zhì)限量 ：0.5% 注射液中雜質(zhì)限量 ：1.2%檢查方法：HPLC 雜質(zhì)對(duì)照品法5、含量測(cè)定（1）亞硝酸鈉滴定法原理：芳伯氨基藥物在酸性溶液中與亞硝酸鈉定量反應(yīng)，生成重氮鹽，用永停法或外指示劑法指示反應(yīng)終點(diǎn)。永停滴定法： 鉑鉑電極系統(tǒng)。用亞硝酸鈉液滴定，終點(diǎn)前，溶液中無亞硝酸，線路無電流通過，電流計(jì)指針指零。終點(diǎn)時(shí)溶液中有微量亞硝酸存在，電極即起氧化還原反應(yīng)，線路中遂有電流通過，此時(shí)電流計(jì)指針突然偏轉(zhuǎn)，并不再回復(fù)，即為終點(diǎn)。外指示劑法：*常用碘化鉀淀粉糊劑或指示液，滴定到達(dá)終點(diǎn)時(shí)，稍過量的亞硝酸鈉在酸性溶液中氧化碘化鉀，析出的碘遇淀粉即顯藍(lán)色（2）非水溶液滴定法 基于鹽酸

5、丁卡因、鹽酸利多卡因和鹽酸布比卡因側(cè)鏈烴胺氮具有弱堿性。加冰醋酸20ml與醋酐20ml溶解后，照電位滴定法，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定第二節(jié) 苯乙胺類藥物的分析1、苯乙胺類藥物基本結(jié)構(gòu)腎上腺素（1）主要化學(xué)性質(zhì)烴氨基側(cè)鏈(仲胺)：弱堿性；酚羥基：易氧化，可與金屬離子絡(luò)合呈色；手性碳原子：光學(xué)活性(具有旋光活性)。（2）典型藥物2、鑒別（1）與三氯化鐵的反應(yīng)(鄰苯二酚) （2）氧化反應(yīng)（3）與甲醛硫酸反應(yīng)（4）雙縮脲反應(yīng)（5）Rimini反應(yīng)脂肪伯氨基的專屬反應(yīng)；丙酮不含有甲醛（6）吸收光譜特征 紫外；紅外化學(xué)性質(zhì)的比較3、特殊雜質(zhì)的檢查（1）酮體檢查生產(chǎn)工藝：酮體氫化還原制得，若氫

6、化不完全則引入酮體雜質(zhì)，所有的典型藥物中都要檢查檢查的原理：酮體在310nm處有紫外吸收而藥物沒有。（2）光學(xué)純度檢查大多數(shù)苯乙胺類擬腎上腺素藥物分子結(jié)構(gòu)中存在手性碳原子，通過比旋度測(cè)定控制藥物的質(zhì)量（3）有關(guān)物質(zhì)的檢查鹽酸去氧腎上腺素和硫酸沙丁醇等，TLC主成份自身對(duì)照法，不得更深(0.5%) HPLC離子對(duì)色譜法4、含量測(cè)定原料：非水溶液滴定法、溴量法制劑：比色法、提取容量法、紫外分光光度法、高效液相色譜法（1）非水滴定法（非水溶液堿量法）原理：在冰醋酸中堿性加強(qiáng)條件溶劑：冰醋酸；滴定液：高氯酸；指示劑：結(jié)晶紫；加入醋酸汞的目的：消除氫鹵酸的干擾終點(diǎn)判定：指示劑藍(lán)綠色、電位終點(diǎn)（2）比色法

7、 利用分子結(jié)構(gòu)中的酚羥基與鐵離子絡(luò)合呈色，測(cè)定鹽酸異丙腎上腺素和鹽酸多巴胺注射液；利用重氮化-偶合反應(yīng)呈色，測(cè)定鹽酸克倫特羅栓劑。（3）HPLC法：本法主要用測(cè)定本類藥物的制劑及體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究。（4）亞硝酸鈉法鹽酸克侖特羅分子結(jié)構(gòu)中含有芳伯氨基，在酸性溶液中可與亞硝酸鈉定量發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成重氮鹽，可用永停滴定法（5）溴量法利用分子結(jié)構(gòu)中的酚羥基的鄰、對(duì)位活潑氫能與過量溴發(fā)生定量取代反應(yīng)，再用碘量法測(cè)定剩余剩余的溴。（掌握指示劑：淀粉，前面已講過）練習(xí)題1鹽酸普魯卡因注射液中檢查的特殊雜質(zhì)是（ D）A.水楊醛 B. 間氨基酚 C.水楊酸 D.對(duì)氨基苯甲酸 E. 氨基酚2對(duì)乙酰氨基酚中檢查

8、的特殊雜質(zhì)是 (C)A.水楊醛 B. 間氨基酚 C. 對(duì)氨基酚 D.苯甲酸 E.苯酚3腎上腺素和鹽酸去氧腎上腺素中檢查的特殊雜質(zhì)是 (D)A.水楊醛 B. 間氨基酚 C. 對(duì)氨基酚 D.酮體 E. 苯甲酸第四節(jié) 苯并二氮雜類藥物的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)代表藥物：二、鑒別試驗(yàn)(一) 化學(xué)鑒別試驗(yàn)1、沉淀反應(yīng)阿普唑侖 + 遇硅鎢酸白色沉淀，藥典中也用于鑒別。2、水解后呈芳伯胺反應(yīng) 氯氮卓和奧沙西泮，其反應(yīng)如下：3、硫酸-熒光反應(yīng) 本類藥物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，顯不同顏色的熒光。例如：地西泮黃綠色艾司唑侖天藍(lán)色4、分解產(chǎn)物的反應(yīng) 本類藥物多為有機(jī)氯化合物，用氧瓶燃燒法破壞，顯氯化物反應(yīng)。

9、Ch.P用于地西泮和三唑侖藥物的鑒別。5、氯化銅焰色反應(yīng)分子結(jié)構(gòu)中含有氯元素的藥物，在銅網(wǎng)上燃燒發(fā)出CuCl2綠色火焰。此反應(yīng)藥典未用于本類藥物鑒別。（二）紫外特征吸收和紅外吸收光譜紅外吸收光譜：已用于地西泮、阿普唑侖、艾司唑侖、鹽酸氟西泮、氯硝西泮和奧沙西泮的鑒別。（三）TLC法1、常用的五種苯并二氮雜卓類藥物的TLC法 按常規(guī)法點(diǎn)樣10l于硅膠G薄層板上，以苯-丙酮（3 ：2）為展開劑,飽和15min，用上行法展開15cm，揮發(fā)溶劑，用稀硫酸噴霧，于105干燥30min，置紫外燈下檢視熒光斑點(diǎn)。2、酸水解產(chǎn)物的TLC法 利用苯并二氮雜卓類藥物經(jīng)酸水解產(chǎn)生的二苯甲酮衍生物進(jìn)行鑒別。由于不同的

10、苯并二氮雜卓類藥物水解后可能會(huì)獲得相同的二苯甲酮衍生物，因此本法的專屬性較差。三、特殊雜質(zhì)檢查（一）有關(guān)物質(zhì)檢查Ch.P 收載的八種本類藥物，除氯氮卓外，其余均作此項(xiàng)檢查。其檢查方法除了三唑侖采用GC法外，其余均用TLC法進(jìn)行檢查。USP(24)和BP(2000)中對(duì)氯氮卓都規(guī)定了此項(xiàng)檢查，而且均用TLC法進(jìn)行檢查。1、地西泮中有關(guān)物質(zhì)的檢查地西泮在合成過程中因其副反應(yīng)，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化學(xué)結(jié)構(gòu)不清的有關(guān)物質(zhì)，可采用TLC法中的高低濃度對(duì)比法進(jìn)行檢查。2、氯氮卓中有關(guān)物質(zhì)的檢查USP(24)用TLC法檢查氯氮卓中的有關(guān)物質(zhì)，并規(guī)定其分解產(chǎn)物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得 過

11、0.01%；中間體7-氯-1，3-二氫-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮雜卓-2-酮-4-氧化物含量不得過0.1%。3、氯氮卓中有關(guān)物質(zhì)的反相高效液相色譜法（二）降解產(chǎn)物的檢查地西泮注射液列入此項(xiàng)檢查，因本品在貯藏過程中有可能分解成2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮等雜質(zhì)。采用HPLC法進(jìn)行檢查。第五節(jié) 吡啶類藥物的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1、基本結(jié)構(gòu)與代表藥物吡啶類藥物均含吡啶環(huán)，基本結(jié)構(gòu)為：2、主要理化性質(zhì)（1）吡啶環(huán)弱堿性：非水堿量法測(cè)定含量或沉淀反應(yīng)鑒別吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng)（2）二氫吡啶環(huán)還原性：氧化還原反應(yīng)鑒別或氧化還原滴定法測(cè)定含量不穩(wěn)定性：其分析應(yīng)避光操作，同時(shí)應(yīng)檢查引入的特殊雜質(zhì)（3）取代基異

12、煙肼：位上酰肼基 還原性：氧化還原反應(yīng)鑒別或氧化還原滴定法含量測(cè)定 可與某些羰基試劑發(fā)生縮合反應(yīng)，鑒別或比色法含量測(cè)定 酰胺鍵易水解引入特殊雜質(zhì)游離肼尼可剎米：位上酰胺基 易水解，遇堿水解后，釋放出具有堿性的乙胺，能使?jié)駶?rùn)的紅色石蕊試紙變藍(lán)色，故可以此進(jìn)行鑒別。硝苯地平：硝基具有氧化性光譜特征二、鑒別試驗(yàn)1、吡啶環(huán)的反應(yīng)（1）吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng)本反應(yīng)適用于吡啶環(huán)的或位上的氫被羧基衍生物所取代的吡啶類藥物。 戊烯二醛反應(yīng)（knig反應(yīng)）eg. 尼可剎米的鑒別：取本品1滴，加水50ml，搖勻，分取2ml，加溴化氰試液2ml與2.5苯胺溶液3ml，搖勻，溶液漸顯黃色。二硝基氯苯反應(yīng)eg. BP異煙肼注

13、射液的鑒別：取本品適量（約相當(dāng)于異煙肼25mg），加乙醇5ml，加硼砂0.1g及5的2,4-二硝基氯苯乙醇溶液5ml，水浴蒸干，繼續(xù)加熱10min，殘?jiān)蛹状?0ml攪拌溶解后，即顯紫紅色沉淀反應(yīng)eg. 尼可剎米的鑒別：取本品2滴，加水1ml，搖勻，加硫酸銅試液2滴與硫氰酸銨試液3滴，即生成草綠色沉淀。2、二氫吡啶的解離反應(yīng)二氫吡啶類藥物與堿作用，二氫吡啶環(huán)1,4-位氫均可發(fā)生解離，形成p-共軛而發(fā)生顏色變化，可用于鑒別。eg. 硝苯地平的鑒別：取本品約25mg，加丙酮1ml溶解，加20氫氧化鈉溶液35滴，振搖，溶液顯橙紅色。3、酰肼基的反應(yīng)（1）還原反應(yīng)eg. 異煙肼的鑒別：取本品約10mg

14、，置試管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸銀試液1ml，即發(fā)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。（2）縮合反應(yīng)4、分解產(chǎn)物的反應(yīng)eg. 尼可剎米的鑒別：取本品10滴，加氫氧化鈉試液3ml，加熱，即發(fā)生二乙胺的臭氣，能使?jié)駶?rùn)的紅色石蕊試紙變藍(lán)色。5、重氮化-偶合反應(yīng)eg. BP硝苯地平的鑒別：取本品25mg，加10ml混合溶液（鹽酸水乙醇=1.53.55），溫?zé)幔尤脘\粒0.5g，放置5min，濾過，濾液加亞硝酸鈉溶液（10g/L）5ml，放置2min，再加入氨基磺酸銨溶液（50g/L）2ml，搖勻，加入鹽酸萘乙二胺溶液（5g/L）2ml，即顯紅色（持續(xù)5min以上）。6、紫外光譜與紅外光譜7、高效液相色譜法三、特殊雜質(zhì)檢查1、異煙肼中游離肼的檢查雜質(zhì)來源：原料殘存、降解產(chǎn)生檢查方法：TLC四、含量測(cè)定1、氧化還原滴定法（1）溴酸鉀滴定法異煙肼與