細(xì)菌與病毒的微生物學(xué)檢查法[可修改版ppt]課件

1、細(xì)菌與病毒的微生物學(xué)檢查法教學(xué)大綱掌握內(nèi)容標(biāo)本的采集和送檢原則病原菌的檢驗(yàn)程序細(xì)菌感染的血清學(xué)診斷及常用方法了解內(nèi)容病原體的抗原成分、核酸及其他成分的檢測(cè)方法病原學(xué)檢查的目的進(jìn)行病因?qū)W診斷指導(dǎo)合理用藥觀察治療進(jìn)行傳染病的流行病學(xué)調(diào)查標(biāo)本的采集和送檢六原則無菌操作：避免雜菌污染不同期不同標(biāo)本用抗生素以前采集病變明顯部位運(yùn)送注意保存采集雙份血清第一節(jié) 細(xì)菌感染的微生物學(xué)檢查法可疑細(xì)菌感染采集標(biāo)本血清學(xué)實(shí)驗(yàn)雙份血清直接形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌成分檢測(cè)特異性抗體檢測(cè)細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定形態(tài)學(xué)檢查生化學(xué)檢查血清學(xué)鑒定藥物敏感實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（毒力）實(shí)驗(yàn)抗原檢測(cè)核酸檢測(cè)直接凝集實(shí)驗(yàn)協(xié)同凝集實(shí)驗(yàn)乳膠凝集實(shí)驗(yàn)免疫熒光檢測(cè)ELISA

2、等核酸雜交聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）DNA芯片凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中和試驗(yàn)ELISA等細(xì)菌學(xué) 診斷 檢測(cè)病原菌成分檢測(cè)患者血清中特異性抗體細(xì)菌病原學(xué)檢查法形態(tài)學(xué)檢查分離培養(yǎng),純培養(yǎng)生化試驗(yàn)血清學(xué)鑒定藥物敏感試驗(yàn)毒力實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)抗原核酸一、細(xì)菌學(xué)診斷（一）形態(tài)學(xué)檢查光學(xué)顯微鏡檢查法：細(xì)菌染色檢查法革蘭染色法抗酸染色法負(fù)染法暗視野檢查：用于檢查活菌、螺旋體及其動(dòng)力熒光顯微鏡腦脊液的直接涂片染色-肺炎鏈球菌鏈球菌淋病奈瑟球菌-膿液直接涂片結(jié)核分枝桿菌霍亂弧菌暗視野顯微鏡鉤端螺旋體肺炎雙球菌病原菌的分離培養(yǎng)/直接涂片大小形態(tài)顏色表面性狀透明度溶血性Flame sterilize wire loop

3、, metal forceps, etc before and after use in a hooded Bunsen burner 細(xì)菌動(dòng)力的檢測(cè)化膿性球菌葡萄球菌鏈球菌腸道桿菌大腸埃希菌沙門氏菌志賀菌細(xì)菌形態(tài)無特異性可采用生化學(xué)檢查法-鑒別細(xì)菌的重要方法（二）生化試驗(yàn) 糖發(fā)酵試驗(yàn) H2S試驗(yàn) 枸櫞鹽利用試驗(yàn)鑒定中最重要的生化反應(yīng)乳糖發(fā)酵試驗(yàn)?zāi)c道非致病菌（埃希菌屬）發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣腸道致病菌（志賀菌屬、沙門菌屬等）不發(fā)酵乳糖 （三）血清學(xué)鑒定利用含已知的特異性抗體的免疫血清，檢測(cè)未知的細(xì)菌抗原，對(duì)細(xì)菌進(jìn)行種的鑒定 志賀菌屬、沙門菌屬常用方法是玻片凝集試驗(yàn)測(cè)定抗生素或其他抗微生物制劑在體外

4、抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的能力方法： 擴(kuò)散法、稀釋法（四）藥物敏感試驗(yàn)MIC & MBC最低抑菌濃度，MIC最低殺菌濃度，MBC全自動(dòng)分析儀全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀全自動(dòng)生化分析儀（五）檢測(cè)毒力-動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1. 常用動(dòng)物 MouseGuinea Pig Rabbit Dog Monkey接種途徑皮內(nèi) 皮下 腹膜內(nèi) 靜脈 顱內(nèi) 椎管內(nèi) 鼻內(nèi) 灌胃毒力檢測(cè)半數(shù)致死量 LD50半數(shù)感染量 ID50二、檢測(cè)病原菌成分抗原的檢測(cè)核酸的檢測(cè)（一）抗原的檢測(cè)利用已知的特異性Ab檢測(cè)Ag的方法常用的方法有玻片凝集協(xié)同凝集試驗(yàn)ELISA免疫熒光法ELISA（二）核酸檢測(cè)方法聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）核酸雜交技術(shù)Southern blot

5、Northern blotDot blotIn situ hybridization基因芯片(Gene chip)16S rRNA16sRNA基因序列分析只存在于原核細(xì)胞型微生物的染色體基因中16sRNA，23sRNA, 5sRNA可變區(qū)和保守區(qū)保守區(qū)：所有的細(xì)菌所共有可變區(qū)：屬和種的特異性PCRGene Chip三、抗體的檢測(cè)用已知細(xì)菌或其Ag檢測(cè)相應(yīng)的特異性Ab及其量的多少，作為某些病原菌感染的輔助診斷急性期和恢復(fù)期雙份血清，恢復(fù)期效價(jià)升高4倍有診斷價(jià)值方法玻片或試管凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、 冷凝集試驗(yàn)、ELISA局限難以早期診斷第二節(jié) 病毒感染的微生物學(xué)檢查法形態(tài)學(xué)病毒的分離鑒

6、定在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的鑒定指標(biāo)病毒成分的檢測(cè)病毒抗體的檢測(cè)（一）病毒的形態(tài)學(xué)檢查 電子顯微鏡（ EM） 免疫電鏡, IEM光學(xué)顯微鏡（CM）包涵體內(nèi)基小體（Negri body）HAVNegri body動(dòng)物接種：動(dòng)物模型雞胚接種： 914d組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)組織培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng) 原代細(xì)胞培養(yǎng)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)傳代細(xì)胞培養(yǎng)三大培養(yǎng)方法（二）病毒的分離培養(yǎng)的方法血凝抑制實(shí)驗(yàn)中和實(shí)驗(yàn)PCR檢測(cè)病毒分離培養(yǎng)及鑒細(xì)胞病變（cytopathy) 紅細(xì)胞吸附 (hemadsorption)病毒干擾作用 (viral interference)中和試驗(yàn) (neutralization test, NT)空斑形成試驗(yàn)

7、(plaque formation)病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的鑒定指標(biāo)細(xì)胞病變細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE） 細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）A：未感染病毒的HeLa細(xì)胞；B：被柯薩奇病毒B3感染后，細(xì)胞變圓、皺縮，細(xì)胞折光性減弱；C：被腺病毒感染后，細(xì)胞腫脹，折光性增強(qiáng)，呈葡萄狀排列。200 50%組織細(xì)胞感染量 TCID50:根據(jù)有無細(xì)胞病變來判斷病毒感染性和毒力的指標(biāo) 細(xì)胞病變紅細(xì)胞吸附：血凝素（HA）病毒干擾作用中和試驗(yàn)病毒數(shù)量及感染性的檢測(cè)空斑形成試驗(yàn)紅細(xì)胞凝集紅細(xì)胞吸附病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的鑒定指標(biāo)plaque空斑形成試驗(yàn)用于病毒濃度的精確定量和測(cè)定抗病毒藥物的作用一個(gè)空斑是由一個(gè)病毒大量復(fù)制而成，稱為

8、空斑形成單位（Plaque forming unit，PFU）。病毒的感染量用PFU/ml表示（三）病毒成分的檢測(cè)病毒抗原的檢測(cè): ELISA 病毒核酸的檢測(cè) 核酸雜交、PCR、 基因芯片病毒成分的檢測(cè)（四）病毒抗體的檢測(cè)中和試驗(yàn)（NT）血凝抑制試驗(yàn)（HT）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CF）ELISA法蛋白印跡技術(shù)小 結(jié)細(xì)菌感染的微生物學(xué)檢查法病原體檢查核酸的檢測(cè)抗原、抗體的檢測(cè)病毒感染的微生物學(xué)檢查法電鏡及免疫電鏡病毒的分離培養(yǎng)和鑒定核酸的檢測(cè)抗原、抗體的檢測(cè)小結(jié)抗細(xì)菌免疫固有免疫獲得性免疫抗病毒免疫固有免疫干擾素獲得性免疫問 題采集標(biāo)本的原則？病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的鑒定指標(biāo)？干擾素的概念及其抗病毒機(jī)制自檢內(nèi)容1. 機(jī)體抗結(jié)核分枝桿菌的感染免疫主要依賴A. 屏障結(jié)構(gòu) B. 細(xì)胞免疫 C.抗體的中和作用D.非特異性免疫分子 E. 吞噬細(xì)胞的吞噬作用2. 滅活和清除游離病毒主要依靠A.干擾素 B.抗體 C.細(xì)胞因子 D.非特異