基因診斷與治療第組

1、膀胱癌組織(zzh)中TERE1/UBIAD1表達(dá)及Ras-MAPK信號(hào)通路分析殷享亮、劉文彬、韓學(xué)超、許小兵(xio bn)、劉長(zhǎng)濤共二十二頁(yè)膀胱癌介紹(jisho)據(jù)國(guó)際癌癥組織機(jī)構(gòu)統(tǒng)計(jì)，膀胱腫瘤作為(zuwi)泌尿系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，是目前導(dǎo)致人類因腫瘤死亡的第四大原因。在中國(guó)，膀胱癌是排列第十位的常見(jiàn)腫瘤。膀胱癌具有多發(fā)性、復(fù)發(fā)性的特點(diǎn)。共二十二頁(yè)TERE1/UBIAD1簡(jiǎn)介(jin ji)移行上皮反應(yīng)(fnyng)基因(Tansitional epithelial response gene，TERE1)是人類一類新的直接與前列腺癌、膀胱癌有關(guān)的基因。該基因編碼一個(gè)含338個(gè)氨

2、基酸，分子量約為36.skDa的蛋白質(zhì)，廣泛表達(dá)于人類各種正常組織的基因，特別是泌尿系統(tǒng)上皮如前列腺、膀胱、腎臟等TERE1具有多個(gè)疏水結(jié)構(gòu)域，因其編碼UbiA類異戊系轉(zhuǎn)移酶，又稱之為UBIAD1共二十二頁(yè)研究表明在前列腺癌、腎癌及癌細(xì)胞系中，TERE1基因和蛋白表達(dá)水平顯著下降，而通過(guò)基因轉(zhuǎn)染在前列腺癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)TEREI，能顯著減少腫瘤的增殖和維持(wich)基因組的穩(wěn)定推測(cè)(tuc)TERE1/UBIAD1基因可能是一類新的抑癌基因共二十二頁(yè)目的(md)檢測(cè)分析(fnx)臨床膀胱癌組織和正常膀胱組織TERE1/UBIAD1表達(dá)及Ras-MAPK信號(hào)通路的變化。共二十二頁(yè)方法(fngf)

3、采用免疫組化檢測(cè)分析(fnx)人正常膀胱組織及膀胱癌組織中TERE1和端粒逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)的蛋白表達(dá)水平:用RT-PCR及 westemblotting檢測(cè)膀胱癌組織中TEREI和hTERT的表達(dá)水平及Ras-MAPK信號(hào)通路關(guān)鍵分子的變化hTERT作為端粒酶活化的限速酶，在正常組織的增生和腫瘤的發(fā)生中起著至關(guān)重要的作用。研究表明人類多種腫瘤組織中均可檢測(cè)到hTERT的活性表達(dá)，而在正常膀胱組織中卻未檢測(cè)到。共二十二頁(yè)膀胱(png gung)癌及正常膀胱(png gung)組織標(biāo)本中TEREI與hTERT免疫組化結(jié)果共二十二頁(yè)結(jié)果-免疫(miny)組織化學(xué)染色分析 HE染色Normal

4、bladder Bladder carcinoma共二十二頁(yè)TERE1(正常(zhngchng)膀胱組織) （膀胱癌組織）共二十二頁(yè)hTERT正常(zhngchng)膀胱組織 膀胱癌組織共二十二頁(yè)膀胱癌及正常膀胱組織標(biāo)本(biobn)中TERE1與 hTERTmRNA水平Lanel:200bpMarker:Lane2:正常膀胱TERE1(500bp)mRNA水平(shupng);Lane3:膀胱癌標(biāo)本中TERE1mRNA水平;Lane4:正常膀胱組織hTERT(182bP)mRNA水平;Lane5:膀胱癌標(biāo)本中hTETmRNA水平。下方膠圖:對(duì)應(yīng)組織中內(nèi)參 GAPDHmRNA水平。共二十二頁(yè)膀

5、胱癌組織中TERE1表達(dá)水平相對(duì)于正常膀胱組織明顯降低，TEREI表達(dá)水平與癌組織的分級(jí)分期密切相關(guān)，隨著腫瘤惡性( xng)程度增加，癌組織TEREI表達(dá)下降越明顯。膀胱癌組織中檢測(cè)到hTERT明顯表達(dá)，而正常膀胱組織未檢測(cè)到hTERT表達(dá)。共二十二頁(yè)膀胱癌及正常膀胱標(biāo)本(biobn)中TERE1與hTERT蛋白表達(dá)共二十二頁(yè)相對(duì)正常組織，膀胱癌中TERE1蛋白表達(dá)明顯下降，統(tǒng)計(jì)分析具有顯著性差異，P0.01，高惡性( xng)度膀胱組織中未檢測(cè)到TERE1蛋白表達(dá)。正常膀胱組織沒(méi)有檢測(cè)到hTERT蛋白表達(dá)水平，而膀胱癌組織中hTERT明顯高表達(dá)。共二十二頁(yè)Ras-MAPK信號(hào)通路中關(guān)鍵分子

6、在組織(zzh)中蛋白表達(dá)水平共二十二頁(yè)與正常膀胱組織相對(duì)比，膀胱癌組織中磷酸化ERK、磷酸化MEK(1/2)、磷酸化B-Raf(Ser455)及磷酸化C-Raf(Ser338)蛋白(dnbi)表達(dá)水平明顯增加，有顯著性差異(P0.05);而膀胱癌組織與正常膀胱組織中總的ERK、MEK(1/2)、A一Raf、B一Raf、C一Raf及磷酸化A一Raf(Ser299)蛋白表達(dá)水平?jīng)]有明顯差異。未檢測(cè)到膀胱癌組織中磷酸化的C-Raf(Ser259)和磷酸化的C-Raf(Ser289/296)蛋白表達(dá)。共二十二頁(yè)討論(toln)為探討TEREI與膀胱癌的關(guān)系(gun x)，我們的免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:

7、膀胱癌T2、T3一4期TEREI染色陽(yáng)性率與Ta、TI期陽(yáng)性率相比，具有顯著性差異。根據(jù)組織學(xué)分級(jí)，G3一4期TEREI染色陽(yáng)性率與G2期TEREI相比具有顯著性，與GI期陽(yáng)性率相比差異具有極顯著性。共二十二頁(yè)討論(toln)根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄PCR和免疫印跡(yn j)結(jié)果顯示：膀胱癌組織中TEREI核酸轉(zhuǎn)錄與蛋白翻譯水平與正常膀胱組織相比明顯下降。提示TERE1與膀胱癌相關(guān)。隨著腫瘤惡性程度增加，癌組織TERE1表達(dá)下降越明顯，呈負(fù)相關(guān)。共二十二頁(yè)TERE1與膀胱癌的關(guān)系(gun x)我們采用免疫印跡(yn j)分析了膀胱癌組織中Ras-MAPK信號(hào)通路中一系列關(guān)鍵分子的變化。發(fā)現(xiàn):膀胱癌組織中磷

8、酸化ERK、磷酸化MEK(1/2)、磷酸化B-Raf(Ser455)及磷酸化e-Raf(Ser338)蛋白表達(dá)水平明顯增加，有顯著性差(P0.05);共二十二頁(yè)TERE1與膀胱癌的關(guān)系(gun x)而膀胱癌組織與正常膀胱組織中總的ERK、MEK(1/2)、A-Raf、B-Raf、e-Raf及磷酸化A-Raf(Ser299)蛋白表達(dá)沒(méi)有明顯差異(chy)，提示膀胱癌中Ras-MAPK信號(hào)通路明顯被激活共二十二頁(yè)Thank you共二十二頁(yè)內(nèi)容摘要膀胱(png gung)癌組織中TERE1/UBIAD1表達(dá)及Ras-MAPK信號(hào)通路分析。檢測(cè)分析臨床膀胱(png gung)癌組織和正常膀胱(png gung)組織TERE1/UBIAD1表達(dá)及Ras-MAPK信號(hào)通路的變化。Lanel:200bpMarker:。膀胱(png gung)癌組織中TERE1表達(dá)水平相對(duì)于正常膀胱(png gung)組織明顯降低，。Ras-MAPK信號(hào)通路中關(guān)鍵分子在組織中蛋白表達(dá)水平。根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄P