蛋白質(zhì)電泳相關(guān)試劑及緩沖液

1、說明：如下常規(guī)試劑配制方法僅供參考蛋白質(zhì)電泳相關(guān)試劑及緩沖液（一）30（W/V）丙烯酰胺溶液組分濃度 30（W/V） Acrylamide配制量 100ml配制方法 1稱取下列試劑，置于250ml燒杯中。Acrylamide 29gBIS 1g2向燒杯中加入約80ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?；最后定容?00ml，用0.45m濾膜過濾除雜。3置于棕色瓶中4保存。（注意：丙烯酰胺具有強(qiáng)烈的神經(jīng)毒性，可通過皮膚吸收并具有累積性。配制時應(yīng)戴手套操作）（二）40（W/V）丙烯酰胺溶液組分濃度 40（W/V） Acrylamide配制量 100ml配制方法 1稱取下列試劑，置于200ml燒杯中Acryl

2、amide 38gBIS 2g2向燒杯中加入約80ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙猓蛔詈蠖ㄈ葜?00ml，用0.45m濾膜過濾除雜。3置于棕色瓶中4保存。（注意：丙烯酰胺具有強(qiáng)烈的神經(jīng)毒性，可通過皮膚吸收并具有累積性。配制時應(yīng)戴手套操作）（三）10（W/V）過硫酸銨組分濃度 10（W/V） 過硫酸銨配制量 10ml配制方法 1稱取1g過硫酸銨。2加入10ml的去離子水后攪拌溶解，貯存于4。（注意：10過硫酸銨溶液在4保存能使用兩周左右，過期會失去催化效果）（四）5X TrisGlycine Buffer組分濃度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5（W/V） SDS配制量 1

3、L配制方法 1稱取下列試劑，置于1L的燒杯中Tris 15.1gGlycine 94gSDS 5.0g2加入約800ml的去離子水，攪拌溶解。3加入去離子水定容至1L后，室溫保存。（五）2X SDSPAGE Loading Buffer組分濃度 100mM TrisHCl （pH 6.8）4（W/V） SDS0.2（W/V） 溴酚藍(lán)20（V/V） 甘油2（W/V） 巰基乙醇配制量 5ml配制方法 1稱取下列試劑，置于15ml塑料離心管中 1M TrisHCl （pH 6.8） 0.5mlSDS 0.2g溴酚藍(lán) 10mg甘油 1ml2加入去離子水溶解定容至5ml。3小份分裝，0.5ml一管，室溫

4、保存。4使用前將25l的巰基乙醇加入混勻。（六）5X SDSPAGE Loading Buffer組分濃度 250mM TrisHCl （pH 6.8）10（W/V） SDS0.5（W/V） 溴酚藍(lán)50（V/V） 甘油5（W/V） 巰基乙醇配制量 5ml配制方法 1稱取下列試劑，置于15ml塑料離心管中 1M TrisHCl （pH 6.8） 1.25mlSDS 0.5g溴酚藍(lán) 25mg甘油 2.5ml2加入去離子水溶解定容至5ml。3小份分裝，0.5ml一管，室溫保存。4使用前將25l的巰基乙醇加入混勻二，核酸電泳相關(guān)試劑及緩沖液（一）50X TAE Buffer （pH8.5）組分濃度 2

5、M Tris醋酸，100mM EDTA 配制量 1L配制方法 1稱取下列試劑，置于1L燒杯中Tris 242.2gNa2EDTA2H2O 37.2g2加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?，再加?7.1ml的醋酸，充分?jǐn)噭?加去離子水將溶液定容至1L后，室溫保存。（二）10X TBE Buffer （pH8.3）組分濃度 890mM Tris醋酸，20mM EDTA 配制量 1L配制方法 1稱取下列試劑，置于1L燒杯中Tris 108gNa2EDTA2H2O 7.44g硼酸 55g 2加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?加去離子水將溶液定容至1L后，室溫保存。（三）10X MOPS

6、 Buffer組分濃度 200mM MOPS，20mM NaAc，10mM EDTA 配制量 1L配制方法 1稱取41.8g MOPS，置于1L燒杯中，加入約800mlDEPC處理水，攪拌溶解。 2用1M NaOH調(diào)節(jié)pH至7.0。3再加入一下試劑1M NaAc（DEPC處理） 20ml0.5M EDTA（pH8.0）（DEPC處理） 20ml4用DEPC處理水將溶液定容至1L。5用0.45m濾膜過濾除雜，室溫避光保存。（注意：溶液見光或高溫滅菌后會變黃，仍可以使用，但變黑則不能使用） （四）溴化乙錠（10mg/ml）組分濃度 10mg/ml 溴化乙錠配制量 100ml配制方法 1稱取1.0g

7、溴化乙錠，加入到200ml容器中。2加入去離子水100ml，充分?jǐn)嚢钄?shù)小時完全溶解溴化乙錠。3將溶液轉(zhuǎn)入棕色瓶，室溫避光保存。4溴化乙錠最終工作濃度為0.5g/ml。（五）6X DNA Loading Buffer（單染料）組分濃度 0.25（W/M） 溴酚藍(lán)30（W/M） 甘油配制量 10ml配制方法 1稱取下列試劑，置于15ml塑料離心管中 溴酚蘭 25mg2向離心管中6ml去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?加入3ml甘油混勻，最終用去離子水定容至10ml，室溫保存。 （六） 6X DNA Loading Buffer（雙染料）組分濃度 0.25（m/M） 溴酚藍(lán)0.25（m/M） 二甲苯腈藍(lán)FF

8、30（m/M） 甘油配制量 10ml配制方法 1稱取下列試劑，置于15ml塑料離心管中溴酚蘭 25mg二甲苯腈藍(lán)FF 25mg2向離心管中6ml去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?加入3ml甘油混勻，最終用去離子水定容至10ml，室溫保存。（七）10X RNA Loading Buffer（單染料）組分濃度 10mM EDTA 0.25（m/M） 溴酚藍(lán)50（m/M） 甘油配制量 10ml配制方法 1稱取下列試劑，置于15ml塑料離心管中0.5M EDTA（pH 8.0） 200l溴酚蘭 25mg 2向離心管中4mlDEPC處理水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?加入5ml甘油混勻，用DEPC處理水定容至10ml，室溫

9、保存。 （八）10X RNA Loading Buffer（單染料）組分濃度 10mM EDTA 0.25（W/V） 溴酚藍(lán)0.25（W/V） 二甲苯腈藍(lán)FF50（V/V） 甘油配制量 10ml配制方法 1稱取下列試劑，置于15ml塑料離心管中0.5M EDTA（pH 8.0） 200l溴酚蘭 25mg 二甲苯腈藍(lán)FF 25mg2向離心管中4mlDEPC處理水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?加入5ml甘油混勻，用DEPC處理水定容至10ml，室溫保存。三，分子生物學(xué)常用試劑 （一），氨芐青霉素組分濃度 100mg/ml 氨芐青霉素配制量 50ml配制方法 1稱取5g Ampicillin置于50ml塑料離心

10、管中。2加入40ml滅菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。30.22m濾膜過濾除菌，小份分裝（1ml一管）后，置于20保存。（二），卡那霉素組分濃度 50mg/ml卡那霉素配制量 50ml配制方法 1稱取2.5g 卡那霉素置于50ml塑料離心管中。2加入40ml滅菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。30.22m濾膜過濾除菌，小份分裝（1ml一管）后，置于20保存。（三）RNase A組分濃度 10mg/ml RNase A 配制量 50ml配制方法 1取0.5g RNase A置于50ml塑料離心管中。2加入40ml滅菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。3100煮沸15min,緩慢冷卻至

11、室溫，小份分裝（1ml一管）后，置于20保存。（四）IPTG組分濃度 24mg/ml IPTG 配制量 50ml配制方法 1稱取1.2g IPTG置于50ml塑料離心管中。2加入40ml滅菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。3用0.22m濾膜過濾除菌，小份分裝（1ml一管）后，置于20保存。（五）X-Gal組分濃度 20mg/ml X-Gal 配制量 50ml配制方法 1稱取1g X-Gal置于50ml塑料離心管中。2加入40mlDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解之后定容至50ml。3小份分裝（1ml一管）后，置于20保存。（六）DTT組分濃度 1M DTT 配制量 10ml配制方法 1稱

12、取1.54g DTT置于15ml塑料離心管中。2加入8ml的10mM NaAc（pH5.2），充分混合溶解之后定容至10ml。3用0.22m濾膜過濾除菌，小份分裝（1ml一管）后，置于20保存。（七）EDTA溶液組分濃度 0.5M EDTA配制量 1L配制方法 1 稱取186.1g Na2EDTA2H2O置于1L燒杯中。2 加入800ml的去離子水，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢琛? 用NaOH調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH值至8.0（約20gNaOH），當(dāng)pH接近8.0時， EDTA方可完全溶解，加入去離子水定容至1L。4小份分裝后，高溫高壓滅菌，室溫保存。四，于定量PCR檢測的SYBRGreen I 核酸染料 采

13、用瓊脂糖電泳或聚丙烯酰胺電泳方法檢測雙鏈DNA時，SYBRGreen I最靈敏的熒光染料，當(dāng)其結(jié)合到核酸上時，會產(chǎn)生很強(qiáng)的熒光及高量子產(chǎn)額，DNA/SYBRGreen I復(fù)合物的量子產(chǎn)額約為0.8。由于與核酸結(jié)合后能產(chǎn)生很強(qiáng)的信號，背景極低，并且對核酸的親和力高，因此SYBR染料可在低濃度條件下使用。SYBRGreen I的最低檢出限：20pg DNA（254nm）；60pg DNA（300nm 紫外透射）；此外，SYBRGreen I還可以用于檢測寡核苷酸（1-2ng，300nm紫外透射），比EB靈敏20至100倍。 SYBRGreen I用于電泳檢測DNA時，既可預(yù)染，也可電泳后再進(jìn)行染色

14、。SYBRGreen I用于瓊脂糖電泳檢測DNA后，可直接將DNA轉(zhuǎn)移至膜上，進(jìn)行后續(xù)核酸印跡雜交反應(yīng)。此外，SYBRGreen I與DNA的結(jié)合對多種常用的限制性內(nèi)切酶活性無抑制作用，可直接進(jìn)行消化或連接。 SYBRGreen I主要用于溶液中DNA的定量，特別適用于熒光定量PCR檢測（即實時PCR）。SYBRGreen I原液是無水DMSO配制10,000倍濃縮液。配制工作液時需用TAE、TE或TBE緩沖液。 SYBRGreen I應(yīng)避光存放，原液保存于20；工作液保存于4，最好存于密封聚丙烯容器。 圖示為DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)電泳SYBR GREEN I染色圖。本品為美國MP公司生產(chǎn) 規(guī)格、價格如下：