NQO1基因多態(tài)性與食管癌易感性的病例對照研究

1、NQO1基因多態(tài)性與食管癌易感性的病例比擬研究周美麗，陳華芳，史習(xí)舜，周紫荊，李國梁，潘培川，陳子龍，吳清波【摘要】目的研究NQ1基因多態(tài)性與食管癌易感性的干系。要領(lǐng)接納1：2配對的病例比擬研究，運(yùn)用PR,RFLP技能檢測NQ1基因609T多態(tài)性。效果NQ1609、T和TT各基因型在病例組中的頻度別離為27.1、43.7和29.2%，在比擬組別離為32.8、50.0和17.2，兩組間的漫衍差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。攜帶NQ1609TT基因型的個別患食管癌的風(fēng)險(xiǎn)高于攜帶609或609T基因型者R=2.019，95I=1.1123.663。吃蔥蒜與NQ1基因型TT之間存在次相乘模子的交互作用(R=9.84

2、9，95I=3.73325.985)；飲燙茶與NQ1TT傷害基因型之間存在次相乘模子的交互作用(R=4.847，95I=1.81712.929)。結(jié)論NQ1609TT基因型是食管癌的傷害因素之一；609TT基因型食管癌產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)的作用有顯著的放大效應(yīng)?！娟P(guān)鍵詞】食管腫瘤病例比擬研究NQ1基因多態(tài)性交互作用Aase,ntrlStudynthePlyrphissfNQ1andSuseptibilityfEsphagealanerKeyrds:esphagealneplass;ase,ntrlstudy;NQ1geneplyrphiss;interatin代謝酶基因多態(tài)性是差異個別代謝酶活性差異的重要

3、緣故原由，從而影響個別患癌的易感性。依靠復(fù)原型輔酶/：醌氧化復(fù)原酶(NQ1)又稱D,硫辛酰胺脫氫酶，催化醌類及其衍生物產(chǎn)生復(fù)原反響轉(zhuǎn)化為氫醌，為人體內(nèi)一種緊張的相反響酶。而醌是一類在天然界中普及存在的有毒化合物，能誘發(fā)哺乳動物細(xì)胞癌變和壞死。研究創(chuàng)造NQ1存在多態(tài)性，即609T，這個變異使酶活性明顯低落。我們以福建省食管癌高發(fā)區(qū)安溪縣為研究現(xiàn)場，在舉行環(huán)境因素視察研究的同時，對NQ1基因多態(tài)性與食管癌的干系舉行了探究，并結(jié)合安溪高發(fā)區(qū)的環(huán)境傷害因素對基因與環(huán)境的交互作用舉行了開端闡發(fā)。1質(zhì)料與要領(lǐng)1.1研究工具病例組為2022年11月至2022年8月間，經(jīng)安溪縣病院內(nèi)窺鏡及病理診斷確診為食管癌

4、的新發(fā)病例，剔除年事75歲及體質(zhì)衰弱者。比擬組按12配對，選擇與病例居住同一墟落、無血緣干系、同民族、同性別、年事相差3歲以內(nèi)的同期同院的非腫瘤患者如心腦血管疾并外傷等患者為比擬。病例和比擬均為安溪縣住民，并為本地常住戶口(20年以上)。1.2視察要領(lǐng)及內(nèi)容接納同一體例的視察表，由顛末培訓(xùn)稽核及格的視察員直接扣問每名研究工具后填寫。視察內(nèi)容重要有：一樣平常環(huán)境、一樣平常生存舉動風(fēng)俗如吸煙、飲酒、飲茶等、飲食風(fēng)俗、飲食布局、居住史、家庭消耗環(huán)境，消化體系疾病史及食管癌家屬史等。1.3NQ1基因多態(tài)性的檢測運(yùn)用聚合酶鏈反響限定性片斷長度多態(tài)性PR,RFLP技能檢測研究工具的NQ1609T基因型。抽

5、取各研究工具外周血5l，置于一次性生化采血管中，離心分層，分裝上層血清和下層血凝塊，置于低溫冰箱70保存。接納通例高鹽沉淀法提取基因組DNA1。(1)引物序列為：PrierF：5,AAGAGAAATTT,3，PrierR：5,GGTTTTTATTT,3，由上海博亞生物技能合成。(2)PR擴(kuò)增反響體系：反響總體積為25l，此中含10PRbuffer2.5l，1.5l/Lgl2，200l/LdNTPs，引物F、R各0.2l/L，TaqDNA聚合酶BI產(chǎn)物1.5U，基因組DNA80ng100ng。(3)PR循環(huán)參數(shù)：95預(yù)變性5in，然后94變性30s、56復(fù)性30s、72延伸45s，35個循環(huán)后，

6、72延伸10in。酶切體系為20l，包羅：10buffer2l，Hinf內(nèi)切酶NEB產(chǎn)物0.5l5U，超純水7.5l，PR擴(kuò)增產(chǎn)物10l。酶切反響條件為：37水浴6h。酶切產(chǎn)物用2瓊脂糖凝膠含溴化乙錠、電壓90V電泳1h。NQ1基因型的斷定：酶切片斷僅195bp者為純合野生基因型；195bp、119bp和76bp者為雜合基因型T；119bp和76bp者為純合突變基因型TT見圖1。1.4統(tǒng)計(jì)闡發(fā)要領(lǐng)全部數(shù)據(jù)接納SPSS12.0軟件創(chuàng)立數(shù)據(jù)庫。運(yùn)用2查驗(yàn)比力NQ1基因頻率的Hardy,Einberg遺傳平衡查驗(yàn)，NQ1609T基因在病例組和比擬組漫衍的特點(diǎn)和差異。運(yùn)用叉生闡發(fā)的原理不雅察NQ160

7、9T基因型、環(huán)境因素、遺傳因素之間的交互作用。參照文獻(xiàn)3的要領(lǐng)評價交互作用：多因素Lgisti回歸模子中包羅單獨(dú)遺傳因素、單獨(dú)環(huán)境因素和兩因素配合構(gòu)成變量的效應(yīng)，g、e和eg別離為三者的回歸系數(shù)，也即Rg、Re和Reg的天然對數(shù)。交互作用系數(shù)eg/e，1，表現(xiàn)遺傳因素對環(huán)境表露效應(yīng)有放大作用；1，表現(xiàn)遺傳因素對環(huán)境表露效應(yīng)有削弱作用；1，那么兩者沒有交互作用。當(dāng)RegReRg為交互作用的相乘模子；RegReRg為交互作用的的超相乘模子；RegReRg為交互作用的次相乘模子；RegReRg-1時，那么為相加模子。2效果2.1病例組和比擬組一樣平常特性的形貌本次研究按12配對，共有96對完成了問卷

8、視察和實(shí)行室檢測，此中男性58對60.42，女性38對39.58，性別比為1.531。食管癌病例組和比擬組在性別、年事、經(jīng)濟(jì)狀態(tài)及文化程度等方面的漫衍差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但職業(yè)漫衍差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與比擬組比擬，食管癌患者以農(nóng)夫?yàn)橹?，文盲所占比重較高見表1。2.2NQ1基因型頻率及遺傳平衡查驗(yàn)食管癌病例組和比擬組NQ1基因型漫衍及等位基因頻率見表2、3、4。NQ1609、T和TT各基因型在病例組中的漫衍別離為27.1、43.7和29.2%，在比擬組中的漫衍別離為32.8、50.0和17.2，表白NQ1各基因型在病例組和比擬組的漫衍差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義23.966，P0.046。與609和609T基因

9、型比擬，609TT基因型與食管癌的產(chǎn)生有明顯性關(guān)聯(lián)，在年事、性別和住址等因素調(diào)解后R2.019，95I=1.1123.663。病例組與比擬組609T等位基因頻率別離為51.0和42.0，兩組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義2=4.052，P=0.044。2.3NQ1基因多態(tài)性與各傷害因素的交互作用的闡發(fā)別離闡發(fā)NQ1609、T、TT基因型及傷害基因型TT與食管癌產(chǎn)生相干傷害因素的交互作用。經(jīng)年事、性別、居住地、經(jīng)濟(jì)狀態(tài)及文化程度等因素調(diào)解后，僅創(chuàng)造TT基因型與不吃蔥蒜之間存在交互作用見表5。未創(chuàng)造NQ1基因多態(tài)性與飲酒、高鹽飲食、食用紅薯干、食管癌家屬史及食用奇怪蔬菜之間存在交互作用。與食用蔥蒜史之間交互

10、作用闡發(fā)效果表現(xiàn)，在TT基因型存在時，不吃蔥蒜者患食管癌的風(fēng)險(xiǎn)增大，R值為9.849，而吃蔥蒜者R值落至2.739，TT基因型與不吃蔥蒜存在次相乘模子的交互作用表5。2.4飲烏龍茶與食管癌的干系本次研究創(chuàng)造飲燙茶的人群R5.749較飲溫茶或涼茶的人群R0.252更易患食管癌，而且茶葉質(zhì)量越好患食管癌的風(fēng)險(xiǎn)越低R0.210,95%I:0.0840.529。交互作用闡發(fā)中創(chuàng)造喝燙茶與NQ1基因多態(tài)性及食管癌家屬史之間存在明顯的交互作用，效果見表6、7。表6表現(xiàn)，單獨(dú)表露于飲燙茶的預(yù)計(jì)相對傷害性Re為3.478，當(dāng)同時攜帶NQ1TT傷害基因型時，其Reg值升至4.847，增長了表露于飲燙茶的傷害效應(yīng)

11、，兩者的交互作用切合次相乘模子。而食管癌家屬史與飲燙茶之間的交互作用為超相乘效應(yīng)，同時表露于食管癌家屬史和飲燙茶者產(chǎn)生食管癌的風(fēng)險(xiǎn)R8.396顯著高于單獨(dú)表露于食管癌家屬史者R1.874或飲燙茶者R2.584見表7。3討論NQ1，即NAD(P)H：醌氧化復(fù)原酶，是體內(nèi)一種緊張的相反響酶。NQ1以NAD(P)H為受體，可將NADH或NADPH的電子通報(bào)給醌類及其衍生物，產(chǎn)生雙電子復(fù)原反響，天生低毒的氫醌類化合物，其催化特性在于無單電子復(fù)原產(chǎn)物半醌及自由基等氧化產(chǎn)物形成，制止了對細(xì)胞的損傷，低落具有致癌性和致畸性的醌類化合物的危害4。NQ1與其他、相代謝酶一起構(gòu)成了體內(nèi)對外源致癌物質(zhì)的代謝網(wǎng)絡(luò)，在

12、機(jī)體的解毒代謝中發(fā)揮著緊張作用。在正凡人群中,該酶的活性存在差異。20世紀(jì)90年代初期，有研究創(chuàng)造NQ1基因DNA609位點(diǎn)上存在/T間單核苷酸多態(tài)性，大概改變了酶的二級布局，使酶的活性低落，增長了氧自由基的天生5，6。純合野生基因型具有完全的NQ1酶活性,雜合基因型T的酶活性較純合野生型低落3倍，純合突變基因型TT的酶活性那么完全喪失7，8。因此，NQ1缺陷可低落細(xì)胞解毒致癌物的本領(lǐng)，從而影響細(xì)胞代謝途徑，增長致癌物負(fù)荷并能導(dǎo)致某些易感個別惡性變。由于NQ1在醌類化合物的解毒歷程中起著很緊張的作用，以是它的基因多態(tài)性日益受到人們的器重。經(jīng)研究創(chuàng)造NQ1多態(tài)性與大腸癌9、肺癌10、白血病11，

13、12等有明顯相干性。交互作用闡發(fā)效果表白：不吃蔥蒜與NQ1TT基因型之間的交互作用切合次相乘模子，這與蔥蒜此中所含化合物對機(jī)體氧化復(fù)原代謝酶系的誘導(dǎo)作用有關(guān)。本次研究未創(chuàng)造食管癌家屬史與NQ1基因之間存在交互作用，但是在同時表露于食管癌家屬史和TT傷害基因型產(chǎn)生食管癌的風(fēng)險(xiǎn)會高于單獨(dú)表露于這兩個傷害因素者。而ZhangJ等研究創(chuàng)造，在中國人群中，表露于上消化道腫瘤家屬史者會增長產(chǎn)生食管癌的風(fēng)險(xiǎn)R2.18，95%I=1.144.1713，提示攜帶NQ1純合突變基因型造成的NQ1酶活性的缺乏大概為家屬中上消化道腫瘤聚攏的遺傳機(jī)制之一。這些效果均進(jìn)一步說明白食管癌的產(chǎn)生是環(huán)境因素和遺傳因素彼此作用的

14、效果。如今已有大量的研究資料表白飲茶對食管癌具有庇護(hù)作用，這重要與茶葉中含有的茶多酚、茶色素、L,茶氨酸有關(guān)，這些物質(zhì)具有抗氧化作用，可以掃除體內(nèi)的氧自由基，按捺生物大分子DNA、卵白質(zhì)等的氧化損傷14。實(shí)行效果創(chuàng)造無論是綠茶照舊紅茶都可在甲基芐基亞硝胺(NBzA)和甲基烷基亞硝胺(ANA)的動物模子中淘汰鼠的腫瘤產(chǎn)生15。本次研究創(chuàng)造飲用質(zhì)量好的烏龍茶是食管癌的庇護(hù)因素，而飲燙茶是食管癌的傷害因素，這大概與安溪縣是烏龍茶的重要產(chǎn)地，本地住民飲茶征象比力普及，但是差異經(jīng)濟(jì)程度的人群飲用茶葉的質(zhì)量差異，而茶葉質(zhì)量越好，其含有的有用身分較一樣平常茶葉多，而含有較少的有害物質(zhì)，從而低落食管癌的發(fā)病風(fēng)

15、險(xiǎn)。飲燙茶在本地是住民飲茶的一個普及風(fēng)俗，已有實(shí)行證明70以上燙食對食管黏膜上皮細(xì)胞的增殖周期會產(chǎn)生嚴(yán)峻影響，而且為細(xì)胞在有害代謝產(chǎn)物作用下產(chǎn)生癌變制造了有利條件16。這也是國表里大量盛行病學(xué)研究效果同等證明了熱刺激是食管癌發(fā)病因素之一的根據(jù)。因此不良的飲茶風(fēng)俗可以低落飲茶的庇護(hù)作用，這是致癌或抗癌因素的稠濁與交互作用的效果。飲茶風(fēng)俗與基因、遺傳因素的交互作用闡發(fā)表現(xiàn)：飲燙茶與NQ1TT傷害基因型之間存在次相乘效應(yīng)的交互作用，而食管癌家屬史與飲燙茶之間的交互作用為超相乘效應(yīng)，同時表露于食管癌家屬史和飲燙茶者產(chǎn)生食管癌的風(fēng)險(xiǎn)R8.396顯著高于單獨(dú)表露于食管癌家屬史R1.874或飲燙茶者R2.5

16、84。綜上所述，NQ1基因609T多態(tài)性大概是安溪縣食管癌高發(fā)的傷害因素之一，TT基因型是食管癌的傷害基因型，其與多種環(huán)境因素之間存在交互作用，從而加強(qiáng)或削弱了它對食管癌的傷害效應(yīng)。在人群防治食管癌歷程中，應(yīng)思量到易感基因與環(huán)境因素的交互作用，綜合闡發(fā)多種代謝酶之間的協(xié)同作用，從而有針對性地舉行舉動干預(yù)和化學(xué)防范，以低落食管癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1SalazarLA,HirataH,avalliSA,etal.ptiizedpredurefrDNAislatinfrfreshandrypreservedlttedhuanbldusefulinlinialleulartestingJ.lin

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