HLADRB1高分辨測(cè)序分型與48例非親緣性臍血移植者GVHD相關(guān)性分析

1、HLA-DRB1高區(qū)分測(cè)序分型與48例非親緣性臍血移植者GVHD相干性闡發(fā)楊昕，廖燦，李焱，黃以寧，許遵鵬，湯雪薇，吳潔瑩，陳勁松，吳韶清【摘要】1998年6月至2022年7月，廣州臍血庫(kù)向海內(nèi)21家移植中央提供非親緣異基因臍血移植54例。本研究接納PR產(chǎn)物直接測(cè)序法對(duì)HLA-DRB1舉行高區(qū)分分型PR-sequeningbasedtypingPR-SBT，并結(jié)合HLA-SSP低區(qū)分分型效果，探究非親緣性臍血移植供/受者HLA-DRB1等位基因及其亞型與臍血移植GVHD產(chǎn)生率的干系。使用鹽析或柱提法提取48例非親緣性臍血及移植患者全血DNA，接納HLA-SBT要領(lǐng)別離對(duì)HLA-DRB1等位基因

2、舉行高區(qū)分分型，并與HLA-SSPHLA-sequeningspeifipriers低區(qū)分效果舉行比力闡發(fā)。效果表白：接納雙盲法對(duì)48例非親緣性臍血移植供/受者樣本HLA-DRB1舉行高區(qū)分分型，效果HLA-DRB1等位基因亞型匹配全相合病例的GVHD產(chǎn)生率25%明顯低于不完全相合病例的GVHD產(chǎn)生率65.6%P=0.008。結(jié)論：對(duì)HLA-DRB1接納高區(qū)分分型要領(lǐng)在非親緣性臍血移植HLA分型方面具有緊張的臨床應(yīng)用代價(jià)?！娟P(guān)鍵詞】非親緣性臍血移植rrelativeAnalysisbeteenHLAHighReslutinTypingandGVHDin48asesReEivedUnrelate

3、dUbilialrdBldTransplantatinAbstratUnrelatedubilialrdbldunitsfr54asesin21transplantentersereprvidedbyGuangzhurdBldBankinhinafr1998t2022.ThisstudyasaiedtidentifyHLA-DRB1allelesbyeansfPRsequeningbasedtypingethds(SBT)andtanalyzetherrelatinbeteenHLA-DRB1allelesandGVHDinunrelatedubilialrdbldtransplantatin

4、(UBT).48utf54patientsreeivedUBTereflledup.DNAereextratedfrrypreservatinbldfreipients/dnrsithUBT，HLA-DRB1allelestypingerednebySBT.paredithlreslutinresultsfHLA-DRB1alleles，highreslutinresultsereanalyzedtseeanyrrelatinbeteenHLA-DRB1allelesandGVHD.byduble-blindstatistiallyanalysisfHLA-DRB1highreslutinin

5、48dnr/reipienttypingsinUBT.TheresultsshedthattheinidenefGVHD(25%)inpatientshhasHLA-DRB1allelesathedithdnrssignifiantlyler(65.6%)thanthatinthepatientsithHLA-DRB1allelesisathed(P=0.008).ItisnludedthatHLA-DRB1byhighreslutintypingethdisiprtantinlinialappliatininUBT.Keyrdsunrelatedubilialrdbldtransplanta

6、tin；HLA-DRB1allele；GVHDHLA高區(qū)分分型要領(lǐng)的創(chuàng)立，進(jìn)一步展現(xiàn)了異基因造血干胞移植與HLA等位基因的干系。有研究表白，HLA-DRB1等位基因差異與GVHD之間存在強(qiáng)相干性，并且DRB1不相合與存活期收縮嚴(yán)密相干1。但是，如今的研究表白并不是全部等位基因差異與它的不相容是同等的，有些HLA等位基因的不相合是可以耐受的2，3。因此，接納HLA高區(qū)分分型對(duì)移植供受體舉行回首性研究，不但可以對(duì)HLA血清學(xué)分型起到積極的校正作用，并且對(duì)研究哪些HLA等位基因相合可以顯著削弱GVHD，哪些等位基因不相合可以耐受等方面以及訂定相對(duì)個(gè)別化的HLA分型計(jì)謀都具有緊張的臨床應(yīng)用代價(jià)。本研究

7、接納以測(cè)序?yàn)榈鬃拥腍LA分型技能HLA-sequeningbasedtypingHLA-SBT對(duì)可隨訪(fǎng)的48例臍血移植病例HLA-DRB1分型舉行了回首型闡發(fā)，以查明HLA低高區(qū)分分型環(huán)境下的匹配程度與GVHD的相干性，開(kāi)端探究了HLA-DRB1等位基因匹配程度對(duì)非親緣臍血移植GVHD的影響。質(zhì)料和要領(lǐng)研究工具選擇臍血泉源捐贈(zèng)的臍血全部來(lái)自廣州市婦嬰病院產(chǎn)科。這些臍血于第三產(chǎn)程網(wǎng)羅，臍血的分散、冷凍、保存以及相干的檢測(cè)詳見(jiàn)文獻(xiàn)2。移植供受體選擇來(lái)自21家移植中央共74例非親緣性臍血移植病例，剔除多份臍血移植病例13例，無(wú)法統(tǒng)計(jì)闡發(fā)病例7例及待隨訪(fǎng)病例6例，選擇48例非親緣性臍血移植供受者舉行統(tǒng)

8、計(jì)闡發(fā)。移植受者一樣平常環(huán)境、疾病狀態(tài)以及移植后隨訪(fǎng)資料由各個(gè)移植中央提供(表1。Table1.Inidenefdiseasesin48UBTreipients略實(shí)行要領(lǐng)移植供/受體DNA提取均接納GTDNA提取試劑盒舉行提齲HLA-SSP分型接納neLabda公司的HLA-SSP分型試劑盒舉行分型。HLA-SBT要領(lǐng)接納ABIPRIS3100型測(cè)序儀舉行闡發(fā)。PR擴(kuò)增：DNA4l與PRixFrensi公司提供16l混淆，再參加Gld酶0.3l舉行擴(kuò)增反響。PR條件如下：9510分鐘；9620秒，6030秒，723分鐘，36個(gè)循環(huán)；保存在4；消化：向PR產(chǎn)物中參加3lExSAP-IT，舉行消化

9、反響：3720分鐘，8015分鐘；測(cè)序反響：消化后產(chǎn)物Sequeningix混淆后，舉行測(cè)序反響：9620秒，602分鐘，25個(gè)循環(huán)。測(cè)序反響產(chǎn)物用NaA/EDTA去除多余的Sequeningix，并用100%及80%EtH沉淀和純化DNA；電泳：參加15l甲酰胺，置于ABTPris3100測(cè)序儀中舉行電泳；效果闡發(fā)：使用athTls及TNavigatr軟件對(duì)電泳效果舉行闡發(fā)，得出HLA高區(qū)分配型效果。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)接納SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包和hi-squaretest闡發(fā)。效果非親緣性臍血移植供/受者HLA分型要領(lǐng)相合性48例非親緣性臍血移植供、受者HLA接納PR-SBT技能在低區(qū)分程度HLA

10、基因型星號(hào)后2位數(shù)與SSP分型效果符合，HLA-DRB1等位基因全相合38例79.2%，不全相合10例20.8%。接納HLA-SBT高區(qū)分率分型效果提示：HLA-DRB1等位基因亞型全相合16例33.3%，1/2位點(diǎn)相合25例52.1%，2/2位點(diǎn)相合7例14.6%。SBT分型效果與GVHD產(chǎn)生率48例非親緣性臍血移植供受者中，GVHD產(chǎn)生25例52.08%。對(duì)以上48例非親緣性臍血移植供/受者HLA-DRB1等位基因亞型闡發(fā)效果表白，16例HLA-DRB1等位基因亞型全相合病例中，GVHD產(chǎn)生4例25%；32例HLA-DRB1等位基因亞型不完全相合中，GVHD產(chǎn)生21例65.6%，此中25例

11、HLA-DRB1等位基因亞型1/2位點(diǎn)不相合病例中，GVHD產(chǎn)生16例64%；7例HLA-DRB1等位基因亞型完全不相合的病例中，5例產(chǎn)生了GVHD71.4%。統(tǒng)計(jì)闡發(fā)表現(xiàn)，48例非親緣性臍血移植HLA-DRB1等位基因亞型相合與不完全相合和完全不相合受者GVHD產(chǎn)生率具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P=0.008(表2)。Table2.HLAathingandurrenefGVHDin48asesreeivedunrelatedUBT略多因素闡發(fā)按照48例非親緣臍血移植隨訪(fǎng)資料，將年事，體重，有核細(xì)胞輸入量TN輸入量，D34+細(xì)胞輸入量，G-SF輸入量，V熏染及HLA-DRB1匹配環(huán)境等影響GVHD的多

12、個(gè)因素舉行Kruskal-allis查驗(yàn)，創(chuàng)造患者年事和HLA-DRB1等位基因匹配與否與GVHD產(chǎn)生率具有統(tǒng)計(jì)學(xué)相干性年事因素P=0.03，HLA-DRB1匹配因素P=0.009，未創(chuàng)造其他因素與GVHD有明顯相干性。對(duì)年事因素及HLA-DRB1匹配環(huán)境舉行Partialrrelatins闡發(fā)，操縱年事因素后HLA-DRB1匹配環(huán)境同GVHD仍具有明顯相干性r=0.3731，P=0.01。討論HLA高區(qū)分分型要領(lǐng)的創(chuàng)立，進(jìn)一步展現(xiàn)了異基因造血干細(xì)胞移植與HLA等位基因的干系。有研究表白，單個(gè)等位基因的不匹配如碧眼兒HLA-A*0201和HLA-A*0205亞型可以引起嚴(yán)峻的移植物抗宿主病gr

13、aftversushstdisease，GVHD4。也有報(bào)道，DRB1等位基因差異與GVHD之間存在強(qiáng)相干性，并且DRB1不合與存活期收縮嚴(yán)密相干5。但是如今的研究表白，并不是全部等位基因差異與它的不相容是同等的，有些HLA等位基因的不相合是可以耐受的。在Nihlsn等6對(duì)HLA-DP抗原的報(bào)道中，接納混淆淋巴細(xì)胞造就ixedlyphyteulture，L要領(lǐng)不雅察到最猛烈的LR反響與DPB1*0301和DPB1*0201有關(guān)，低LR反響與DPB1*0401和DPB1*0402有關(guān)。因此，有需要尋到哪些HLA等位基因不相合是移植病人可以耐受的，哪些HLA等位基因相合是必須的，使HLA在造血干細(xì)

14、胞移植中的應(yīng)用遠(yuǎn)景更遼闊7-10。本研究通過(guò)對(duì)廣州臍血庫(kù)近5年來(lái)48例非親緣性臍血移植供受者HLA-DRB1等位基因效果舉行等位基因亞型闡發(fā)，以為HLA-DRB1等位基因亞型分型在臍血移植HLA分型方面具有必然的科研及臨床應(yīng)用代價(jià)。在本研究效果中，HLA-DRB1等位基因亞型0/2、1/2和2/2位點(diǎn)不相合的患者GVHD產(chǎn)生率別離為25%4/16、64.0%16/25和71.4%5/7。通過(guò)單因素統(tǒng)計(jì)闡發(fā)創(chuàng)造，HLA-DRB1匹配與否與GVHD產(chǎn)生率具有強(qiáng)相干性P0.01。將HLA-DRB1匹配環(huán)境與年事、體重、TN輸入量、D34+細(xì)胞輸入量，G-SF輸入量，V熏染等因素舉行多因素統(tǒng)計(jì)闡發(fā)，HLA-DRB1與GVHD仍具有明顯相干性r=0.3731，P=0.01，說(shuō)明HLA-DRB1分型接納高區(qū)分要領(lǐng)可以顯著削弱GVHD的產(chǎn)生率。因此，在非親緣性臍血移