第三章__組織培養(yǎng)ppt課件

1、第三章 園林植物苗木培育技術(shù)3.4組織培育育苗植物組織培育：根據(jù)植物細(xì)胞的全能性原理，將植物的器官、組織、細(xì)胞，接種到人工配制的培育基上，在人工控制的條件下，進(jìn)展離體培育，使其產(chǎn)生完好植株的過程。試管苗3.4.1植物組織培育技術(shù)的適用性特點(diǎn)1植株組培快繁、周期短、節(jié)省資料2運(yùn)用廣泛3.4.2植物組織培育的育苗技術(shù) 1根本條件1實(shí)驗(yàn)室洗滌室稱量室3.4.2植物組織培育的育苗技術(shù) 1根本條件1實(shí)驗(yàn)室培育基制備室滅菌室3.4.2植物組織培育的育苗技術(shù) 1根本條件1實(shí)驗(yàn)室接種室緩沖室3.4.2植物組織培育的育苗技術(shù) 1根本條件1實(shí)驗(yàn)室培育室3.4.2植物組織培育的育苗技術(shù) 1根本條件1實(shí)驗(yàn)室培 養(yǎng) 室

2、準(zhǔn) 備 室滅菌室貯藏室接種室緩沖室植物組織培育實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃表示圖為了減少污染，實(shí)驗(yàn)室最好設(shè)一走廊且走廊上方最好安裝紫外燈；培育室最好設(shè)在南面，設(shè)大玻璃窗，以雙層玻璃窗為最好。假設(shè)培育室是設(shè)在房屋的邊側(cè)，其東邊或西邊的墻上也可設(shè)置大玻璃窗；培育室房間及門要小，而且密閉性要好，最好裝移門；無菌操作室要小，要設(shè)緩沖間，也最好裝移門，且門要稍大一些。3.4.2植物組織培育的育苗技術(shù) 1根本條件2儀器設(shè)備和器具酸度計(jì)細(xì)菌過濾器超凈任務(wù)臺3.4.2植物組織培育的育苗技術(shù) 1根本條件2儀器設(shè)備和器具高壓蒸汽滅菌鍋3.4.2植物組織培育的育苗技術(shù) 1根本條件2儀器設(shè)備和器具3.4.2植物組織培育的育苗技術(shù) 1根

3、本條件2儀器設(shè)備和器具3.4.2植物組織培育的育苗技術(shù) 1根本條件3培育容器3.4.2植物組織培育的育苗技術(shù) 2操作技術(shù)1玻璃器皿洗滌3.4.2植物組織培育的育苗技術(shù) 2操作技術(shù)2培育基配制培育基的重要性根本培育基：指只含有維持離體植物細(xì)胞根本生命活動所需的營養(yǎng)成分的培育基。通常包括水分、無機(jī)營養(yǎng)成分和有機(jī)營養(yǎng)成分，不包括激素和天然有機(jī)附加物。完全培育基：指在根本培育基的根底上另外附加激素或天然有機(jī)附加物所組成的培育基。培育基的構(gòu)成培育基水無機(jī)鹽類有機(jī)營養(yǎng)大量元素化合物微量元素化合物氨基酸類糖類維生素類植物生長調(diào)理劑生長素類細(xì)胞分裂素類凝固劑組織培育時(shí)，植物激素的運(yùn)用規(guī)律 在生長素存在的條件下

4、，細(xì)胞分裂素的作用有加強(qiáng)的趨勢，但二者在運(yùn)用上有一定的順序關(guān)系，處置順序不同，培育物的分化形狀也不同。規(guī)律如下：先用生長素處置，后用細(xì)胞分裂素處置，有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞不容易分化，容易產(chǎn)生多倍體細(xì)胞。先用細(xì)胞分裂素處置，后用生長素處置，細(xì)胞分裂也分化。用生長素和細(xì)胞分裂素同時(shí)處置，細(xì)胞脫分化后分化頻率提高。但二者的運(yùn)用濃度比值可以決議器官分化方向：生長素/細(xì)胞分裂素比值高時(shí)，有利于根分化，抑制芽構(gòu)成。反之，有利于芽分化，抑制根構(gòu)成。比值適中時(shí)，促進(jìn)愈傷組織的構(gòu)成和生長。高無機(jī)鹽含量的培育基 代表類型：MS，LS，BL，ER硝酸鉀含量較高的培育基 代表類型：B5，N6，SH中等無機(jī)鹽含量的培育

5、基 代表類型：Nitsch，Miller低無機(jī)鹽含量的培育基 代表類型：White，WS，HE培育基的配方成 分使用濃度(mg/L)成 分使用濃度(mg/L)硝酸鉀（KNO3）1900碘化鉀（KI）0.83硝酸銨（NH4NO3）1650硼酸（H3BO3）6.2磷酸二氫鉀（KH2PO4）170硫酸鋅（ZnSO47 H2O）8.6硫酸鎂（MgSO47H2O）370鉬酸鈉（Na2MoO42 H2O）0.25氯化鈣（CaCl22H2O）440硫酸銅（CuSO45 H2O）0.025硫酸亞鐵（FeSO47H2O）27.8氯化鈷（CoCl26 H2O） 0.025硫酸錳（MnSO44H2O）22.3甘氨酸

6、2乙二胺四乙酸二鈉（Na2EDTA）37.3鹽酸硫胺素（VB1）0.1肌醇100鹽酸吡哆醇（VB6）0.5蔗糖30000煙酸（VB5或VPP）0.5瓊脂7000MS培育基配方 成 分使用濃度(mg/L)成 分使用濃度(mg/L)硝酸鉀（KNO3）2500碘化鉀（KI）0.75硫酸銨（NH4）2SO4）134硼酸（H3BO3）3.0磷酸二氫鉀（KH2PO4）150硫酸鋅（ZnSO47 H2O）2.0硫酸鎂（MgSO47H2O）250鉬酸鈉（Na2MoO42 H2O）0.25氯化鈣（CaCl22H2O）150硫酸銅（CuSO45 H2O）0.025硫酸亞鐵（FeSO47H2O）27.8氯化鈷（Co

7、Cl26 H2O） 0.025硫酸錳（MnSO44H2O）10鹽酸硫胺素（VB1）10乙二胺四乙酸二鈉（Na2EDTA）37.3鹽酸吡哆醇（VB6）1.0肌醇100煙酸（VB5或VPP）1.0蔗糖20000瓊脂7000B5培育基配方 成 分使用濃度(mg/L)成 分使用濃度(mg/L)硝酸鉀（KNO3）80硫酸錳（MnSO44H2O）7氯化鉀（KCl）65硼酸（H3BO3）1.5硝酸鈣（Ca (NO3) 24H2O300硫酸鋅（ZnSO47 H2O）3硫酸鎂（MgSO47H2O）720硫酸鐵（Fe(SO4)3）2.5碘化鉀（KI）0.75鹽酸硫胺素（VB1）0.1硫酸鈉（NaSO4）200鹽酸

8、吡哆醇（VB6）0.1磷酸氫鈉（NaH2PO4H2O）16.5煙酸（VB5或VPP）0.5甘氨酸3蔗糖20000White培育基配方 根本培育基母液的配制 單配法 混配法 按照防止難溶性沉淀構(gòu)成的原那么和物質(zhì)種類的不同，將根本培育基配方所包括的物質(zhì)進(jìn)展分組根本培育基配方中物質(zhì)劃分組數(shù)的多少，即配制母液數(shù)的多少可根據(jù)實(shí)踐情況而定，如MS培育基可以配制三液式、四液式、五液式等例如：MS培育基五液式大量元素母液鈣鹽母液微量元素母液鐵鹽母液有機(jī)營養(yǎng)成分母液3.4.2植物組織培育的育苗技術(shù) 2操作技術(shù)3外植體消毒、接種接種：把處置好的資料經(jīng)無菌操作程序放置到培育基上，這一過程外植體器皿和器具的洗滌洗滌劑

9、：無磷中性的肥皂粉、洗衣粉和洗潔精常用清洗方法：洗滌劑清洗法、超聲波清洗法 消毒 器皿消毒器具的滅菌方法消毒 器皿消毒干熱滅菌法高壓蒸汽滅菌法濕熱滅菌法火焰灼燒滅菌法高溫蒸汽滅菌法消毒 培育基消毒培育基濕熱滅菌最少時(shí)間液體容積（ml）121所需時(shí)間（min）20-50157520 250-50025 1000301500-200035-40培育基高壓蒸汽滅菌濕熱滅菌操作滅菌后培育基的存放：鍋內(nèi)加水放入消毒桶裝入培育基蓋好鍋蓋接通電源加熱排盡鍋內(nèi)冷空氣到達(dá)滅菌溫度時(shí)開場計(jì)時(shí)并堅(jiān)持足夠長的時(shí)間繼續(xù)加熱切斷電源壓力表指針歸零時(shí)翻開鍋蓋取出培育基并存放好高壓蒸汽滅菌鍋平安運(yùn)用本卷須知：滅菌前外層鍋內(nèi)要

10、參與足夠的水,滅菌完成后要將鍋內(nèi)的水排放干凈。在滅菌過程中及滅菌后，壓力表壓力指針歸零之前,不能翻開鍋蓋,以免發(fā)生危險(xiǎn)。留意日常維護(hù)和檢查,及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題,及時(shí)修繕，保證運(yùn)用平安可靠。運(yùn)用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)展物品滅菌時(shí)的本卷須知：消毒鍋內(nèi)放置的物品要有一定的縫隙，便于高溫蒸汽上下回流，到達(dá)良好滅菌效果。鍋內(nèi)冷空氣必需完全排盡，否那么壓力表的指針雖然到達(dá)了規(guī)定的壓力，但由于鍋內(nèi)冷空氣的存在，并不能到達(dá)相應(yīng)的溫度，因此影響滅菌效果。進(jìn)展培育基滅菌時(shí)，鍋內(nèi)到達(dá)規(guī)定的滅菌溫度后，在嚴(yán)厲堅(jiān)持滅菌溫度的同時(shí)，還要嚴(yán)厲堅(jiān)持滅菌時(shí)間。時(shí)間過長會破壞培育基內(nèi)一些化學(xué)成分的有效性，時(shí)間過短那么達(dá)不到滅菌效果。過濾除菌

11、法消毒 培育基消毒消毒 無菌操作室內(nèi)的滅菌方法消毒 外植體的外表滅菌 化學(xué)消毒劑滅菌法70%酒精、HgCl2、次氯酸鈉、過氧化氫、次氯酸鈣等外植體外表滅菌操作前的預(yù)備任務(wù)： 無菌水、漂洗瓶、切割用器皿和金屬器具均經(jīng)過高溫高壓滅菌并整齊擺放在超凈任務(wù)臺上。 滅菌劑配制好并整齊擺放在超凈任務(wù)臺上。外植體外表滅菌的普經(jīng)過程外植體取材備用無菌水充分漂洗35次無菌條件下，消毒劑處置無菌條件下，70%酒精外表消毒30S60S預(yù)處置影響外植體消毒效果的要素： 消毒劑種類 消毒劑運(yùn)用濃度 消毒處置時(shí)間接種 全部應(yīng)在無菌條件下進(jìn)展外植體接種操作前的預(yù)備任務(wù)接種 全部應(yīng)在無菌條件下進(jìn)展外植體接種的詳細(xì)步驟切割外植體培育瓶傾斜接近酒精燈火焰瓶蓋外部在火焰上旋轉(zhuǎn)灼燒數(shù)秒鐘旋開瓶蓋，扣放在酒精燈旁邊瓶口在火焰上旋轉(zhuǎn)灼燒數(shù)秒鐘用無菌鑷子將外植體均勻放置在培育基上瓶蓋在火焰上灼燒兩圈蓋緊瓶蓋接種 全部應(yīng)在無菌條件下進(jìn)展常用外植體的種類莖尖帶節(jié)莖段節(jié)間部莖段葉片和葉柄