experiment普通光學(xué)顯微鏡的使用

1、普通光學(xué)顯微鏡的使用1一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?復(fù)習(xí)顯微鏡低倍鏡和高倍鏡的使用技術(shù)，了解油鏡的基本原理，掌握油鏡的使用方法，觀察枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌染色裝片。2二、實(shí)驗(yàn)原理 （一）油鏡頭的辨認(rèn) 油鏡頭有OI(oil immersion)或HI（homogeneneous immersion）字樣，其放大倍數(shù)和數(shù)值孔徑最大，而工作距離最短。 （二）顯微鏡的分辨率 分辨率是指顯微鏡能分辨出物體兩點(diǎn)間最小距離（D）的能力。D值愈小表明分辨率愈高。D值與光線的波長(zhǎng)（）成正比，與物鏡的數(shù)值孔徑（NA）成反比。顯微鏡性能的優(yōu)劣不單是看它的總放大倍數(shù)，更重要的是看它分辯率的大小。3 縮短光波長(zhǎng)和增大數(shù)值孔

2、徑都可提高分辨率。 數(shù)值孔徑NA指光線投射到物鏡上的最大角度（稱鏡口角,）的一半正弦與介質(zhì)折射率（n）的乘積 影響數(shù)值孔徑大小的因數(shù)，一是鏡口角，二是介質(zhì)的折射率。 當(dāng)鏡與裝片之間的介質(zhì)為空氣時(shí)，光線會(huì)發(fā)生折射，不僅使進(jìn)入物鏡的光線減少，降低了視野的照明度，而且會(huì)減少鏡口角。當(dāng)以香柏油（n=1.515）為介質(zhì)時(shí)，由于它的折射率與玻璃相近，光線經(jīng)過(guò)載玻片后可直接通過(guò)香柏油進(jìn)入物鏡而不發(fā)生折射，從而增加數(shù)值孔徑達(dá)到提高分辨率的目的。 4三、實(shí)驗(yàn)材料和用具1.菌種：枯草芽孢桿菌(Bacillus subitilis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的染色裝片。2.溶劑或

3、試劑：香柏油、二甲苯。3.儀器及其它用品：顯微鏡、擦鏡紙。5四、操作步驟(一)觀察前的準(zhǔn)備 1將顯微鏡置于平穩(wěn)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，鏡座距實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊沿約為34cm。坐正，練習(xí)用左眼觀察。 2調(diào)節(jié)光源 3. 調(diào)節(jié)目鏡及數(shù)值孔徑大小(二)低倍鏡觀察染色裝片(三)高倍鏡觀察6(四)油鏡觀察1升高鏡筒，將油鏡轉(zhuǎn)至工作位置。在玻片標(biāo)本區(qū)域滴加香柏油。2從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器慢慢降下鏡筒，使油鏡浸在油中幾乎與裝片接觸，但不可壓及裝片，以免壓碎玻片，損壞鏡頭。3將光線調(diào)亮，目鏡觀察，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒徐徐上升(切忌反方向旋轉(zhuǎn))，當(dāng)視野中有物像出現(xiàn)時(shí)，再用細(xì)調(diào)節(jié)器校正焦距，直至物像看清為止。仔細(xì)觀察并繪圖。7(五)鏡檢完畢后的處理1上升鏡筒，取下載玻片。2擦鏡紙擦去鏡頭上的香柏油，再用擦鏡紙沾少許二甲苯擦掉殘留的香柏油，最后再用干凈的擦鏡紙擦干殘留的二甲苯。3將各部分還原。將接物鏡呈“八”字形降下，不可使其正對(duì)聚光器，同時(shí)降下聚光器，轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡使其鏡面垂直于鏡座。最后套上鏡罩，對(duì)號(hào)放入鏡箱中，置陰涼干燥處存放。8五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告 分別繪出在高倍鏡和油鏡下觀察到的枯草芽孢桿菌及金黃色葡萄球菌的形態(tài)，注明物鏡放大倍數(shù)和總放大率。六、問(wèn)題和思考 1用油鏡便于觀察細(xì)菌