安杰思AFD9600實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀性能驗(yàn)證

1、安杰思AFD9600實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀性能驗(yàn)證摘要】目的:對(duì)杭州安杰思醫(yī)學(xué)科技有限公司的AFD9600實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的 主要性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證，為其檢測(cè)結(jié)果的可靠性提供依據(jù)。方法:依據(jù)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn) 室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在分子診斷領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明(CNAS-CL36)和美國(guó)臨床 實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)制定的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)，驗(yàn)證該儀器精密度、正確度、線性 以及靈敏度指標(biāo)。結(jié)果:AFD9600定量檢測(cè)HBV-DNA低值和高值的批內(nèi)精密度CV 分別為1.6%和 1.3%，其總精密度CV分別為2.1%和 1.6%。正確度:3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 檢測(cè)結(jié)果的偏倚為-1.05%3.49%，均在可接受范圍內(nèi)。線性：線性

2、相關(guān)系數(shù)為 0.9992，直線回歸方程為Y=0.9937X-0.0697。靈敏度：對(duì)HBV-DNA濃度 5x102IU/mL的檢出率均為100%，CV分別為5.97%。結(jié)論:AFD9600的主要性能指 標(biāo)符合實(shí)驗(yàn)要求，可滿(mǎn)足臨床實(shí)驗(yàn)室需求?！娟P(guān)鍵詞】實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀；性能驗(yàn)證；臨床實(shí)驗(yàn)室【中圖分類(lèi)號(hào)】R446【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】2095-1752 (2018)21-0373-02Performance verification of AFD9600 real-time fluorescent quantitative PCR system Zhong Jialing, Wang J

3、iajia, Du qiong, Huang Wenfang.Department of Laboratory Medicine, Sichuan Academy of Medical Science & Sichuan Provincial Peoples Hospital, Chengdu, Sichuan 610072, ChinaAbstract Objective To verificate the main performance of AFD9600 realtime fluorescence quantitative PCR system, to provide the bas

4、is for the reliability of this system. Methods According to the verification criterion of Guidance on the Application of Accreditation Criteria for the Medical Laboratory Quality and Competence in the Field of Molecular Diagnostics (CNAS-CL36) and Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI),

5、the precision, accuracy, linearity range and sensitivity of this system were verificated. Results The coefficients of variation (CV) of within-run precision for the low value and high value HBV-DNA was 0.98% and 1.42% respectively; CV of total precisions for the low value and high value HBV-DNA was

6、2.02% and 1.57% respectively. Compared to the target value, the biases of the 3 standard substance detection results were -1.08%3.67%, which were within the acceptable range. And the linear regression equation was Y = 0.9937X - 0.0697 (r=0.9992). The detectable rate for 5x102IU/mL HBV-DNA concentrat

7、ion were 100%， and the CV was 5.97%. Conclusion The main performance of AFD9600 real- time PCR system conforms to the requirements of clinical laboratory, and can be applied to the clinical detection.Key words Real-time fluorescence quantitative PCR system;Performance verification;Clinical laborator

8、y 實(shí)時(shí)熒光定量PCR因其良好的特異性和靈敏度，以及操作簡(jiǎn)便，被廣泛用于病毒 的定量檢測(cè)。病毒定量結(jié)果的準(zhǔn)確性直接影響臨床醫(yī)生的診治1-2。實(shí)時(shí)熒光定 量PCR儀作為檢測(cè)系統(tǒng)中的重要組成部分，對(duì)其性能進(jìn)行驗(yàn)證對(duì)保證檢測(cè)結(jié)果的 準(zhǔn)確性具有重要意義。AFD9600是由杭州安杰思醫(yī)學(xué)科技有限公司生產(chǎn)的實(shí)時(shí)熒 光定量PCR儀。本文從精密度、正確度、線性及檢測(cè)下限方面對(duì)其性能進(jìn)行了驗(yàn) 證。1.材料和方法1.1材料主要儀器：AFD9600實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（中國(guó)杭州安杰思醫(yī)學(xué)科技有 限公司），低溫高速離心機(jī)，金屬浴等。儀器設(shè)備均在校準(zhǔn)效期內(nèi)。試劑：HBV 核酸定量檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎㄖ袊?guó)達(dá)

9、安基因公司）。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：北 京康徹思坦公司（GBW（E）090137、GBW（E）090138、GBW（E）090139）。檢測(cè)標(biāo)本: 臨床中收集的患者新鮮血清。所有標(biāo)本均于-20C保存。1.2方法1.2.1精密度驗(yàn)證按照CLSI制定的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)EP15-A23要求進(jìn)行分析。收 集非脂血、非溶血的低、高值兩個(gè)水平的患者血清，每天檢測(cè)一個(gè)批次，每水平 重復(fù)測(cè)定4次，連續(xù)測(cè)定4天，計(jì)算批內(nèi)精密度（CV批內(nèi)）和總精密度（CV 總）。按照CNAS-CL364中要求，以能力驗(yàn)證/室間質(zhì)評(píng)的評(píng)價(jià)界限（靶值0.4對(duì) 數(shù)值）作為允許總誤差（TEa），重復(fù)性精密度V3/5TEa，中間精密度小于V4/5TEa 為符

10、合要求。1.2.2正確度驗(yàn)證使用3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行正確度驗(yàn)證。每個(gè)測(cè)定3次，計(jì) 算平均值與靶值的相對(duì)偏倚。按衛(wèi)生部臨檢中心HBV-DNA定量的室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)標(biāo) 準(zhǔn)，偏倚0.98為符合要求。1.2.4檢測(cè)下限驗(yàn)證 選取試劑盒中配套的標(biāo)準(zhǔn)品（2.0 x103IU/mL），用陰 性標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至1.0 x103IU/mL和5x102IU/mL。將標(biāo)本檢測(cè)10次，9次檢出為符 合要求。1.2.5質(zhì)控每次實(shí)驗(yàn)均做室內(nèi)質(zhì)控，質(zhì)控在控時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效。1.2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有定量數(shù)據(jù)經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后采用Excel2007軟件進(jìn)行統(tǒng) 計(jì)分析。2.結(jié)果2.1精密度驗(yàn)證AFD9600檢測(cè)HBV-DNA低值和高值的CV批內(nèi)分

11、別為1.6%和 1.3%，CV總分別為 2.1%和 1.6%。按CNAS-CL36要求，檢測(cè)所得CV值均在允許范圍內(nèi)，驗(yàn)證合格 （見(jiàn)表1）。3.討論隨著實(shí)時(shí)熒光定量PCR的推廣和應(yīng)用，越來(lái)越多的國(guó)產(chǎn)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀現(xiàn)身于 臨床實(shí)驗(yàn)室中。安杰思AFD9600是由杭州安杰思醫(yī)學(xué)科技有限公司生產(chǎn)的96孔實(shí)時(shí)熒光 PCR系統(tǒng)，其以鹵素?zé)糇鳛楣庠?，?個(gè)檢測(cè)通道，激發(fā)光波長(zhǎng)在400800nm。檢測(cè)時(shí)，激 發(fā)光通過(guò)光纖直接照射樣品，產(chǎn)生的熒光發(fā)射信號(hào)通過(guò)光纖、濾光片和透鏡抵達(dá)冷態(tài)CCD照 相機(jī)，完成信號(hào)采集，實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。ISO151895 規(guī)定，儀器必須進(jìn)行相關(guān)的性能驗(yàn)證，才能投入臨床使用。本研究依

12、據(jù)CNAS- CL36和CLSI要求，對(duì)AFD9600的性能進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果顯示，低值和高值的CV批內(nèi)分別為 1.6%和 1.3%，CV總分別為2.1%和1.6%，符合衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)及廠家聲明。正確度驗(yàn)證結(jié)果顯示， 3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果偏倚在-1.05%3.49%，均在可接受范圍內(nèi)。線性范圍驗(yàn)證結(jié)果顯示， 其線性范圍線性可覆蓋102108IU/mL，涵蓋了絕大多數(shù)陽(yáng)性標(biāo)本濃度范圍，相關(guān)系數(shù)為 0.9992，線性關(guān)系良好。靈敏度的驗(yàn)證結(jié)果顯示，其靈敏度可達(dá)到5x102IU/mL，滿(mǎn)足臨床需 求。綜上所述，AFD9600型實(shí)時(shí)熒光定量PRC儀的正確度、精密度、線性范圍、靈敏度均達(dá)到衛(wèi) 生部的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，

13、滿(mǎn)足臨床需要，能夠在臨床分子生物實(shí)驗(yàn)室投入使用。【參考文獻(xiàn)】Berger A,Preiser W.Viral genome quantification as a tool for improving patient management:the example of HIV, HBV, HCV and CMVJ.J Antimicrob Chemother,2002,49(5) :713-721.王鳳嵐，黃朝芳，馮萬(wàn)周.乙肝血清免疫標(biāo)志物及HBV-DNA檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性分析及 臨床應(yīng)用J.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，11(3)： 203-204.Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).User verification of performance for precision and trueness;approved guidelineSecond Edition Document EP15- A2S.Wayne,PA.USA,2005.CNAS-CL36： 2012.醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在分子診斷領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明S. 中國(guó)合格評(píng)審國(guó)家認(rèn)可委