梅毒血清學(xué)檢測(cè)操作規(guī)范

1、梅毒血清學(xué)檢測(cè)操作規(guī)范主要內(nèi)容梅毒概述梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法梅毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范梅毒是一種幾乎可以侵犯全身所有器官，而產(chǎn)生多種癥狀和體征的慢性傳染性疾病。十六世紀(jì)初由歐洲傳入亞洲，后蔓延我國。梅毒又稱為楊梅瘡、廣東瘡、疳瘡、下疳、霉瘡等。 梅毒概述 梅毒螺旋體生物學(xué)特征病原體為蒼白密螺旋體蒼白亞種,不易著色直徑 ，有814個(gè)致密而規(guī)則的 小螺旋，兩端尖直，運(yùn)動(dòng)活躍，運(yùn)動(dòng)方式多樣抵抗力極弱，對(duì)溫度和干燥特別敏感對(duì)青抗生素敏感梅毒傳播途徑性傳播性接觸是主要傳染途徑未經(jīng)治療的患者在感染后1年內(nèi)具有傳染性隨著病期的延長，傳染性越來越小感染后2年，通過性接觸一般無傳染性梅毒傳播途徑母嬰傳播妊娠7周時(shí)，梅毒螺旋體

2、即可通過胎盤傳播未經(jīng)治療者，雖已無性傳播（病期2年），但妊娠時(shí)仍可傳染胎兒，病期越長，傳染性越小梅毒傳播途徑其他途徑輸血傳播接觸傳播 接觸部位附有梅毒螺旋體日常用品、接吻、哺乳、醫(yī)療器械等途徑梅毒的分期一期梅毒硬下疳和/或腹股溝淋巴結(jié)腫大二期梅毒病期在2年內(nèi)有多形性皮疹等三期梅毒病期在2年以上，可有皮膚黏膜損害等隱性（潛伏）梅毒胎傳（先天）梅毒梅毒的診斷病史癥狀實(shí)驗(yàn)室檢查梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢查對(duì)診斷有重要意義梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)病原學(xué)檢測(cè)血清學(xué)檢測(cè)梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的特點(diǎn) 臨床表現(xiàn) 取材部位 檢查方法一期梅毒 潰瘍 淋巴結(jié) 病原學(xué)檢查 血液 血清學(xué)檢查二期梅毒 皮損 淋巴結(jié) 病原學(xué)檢查 血液 血清學(xué)檢查

3、潛伏梅毒 血液 血清學(xué)檢查三期梅毒 血液 血清學(xué)檢查 神經(jīng)梅毒 血液 血清學(xué)檢查 腦脊液 細(xì)胞、蛋白量檢查VDRL等梅毒的病原學(xué)檢測(cè)-顯微鏡檢測(cè)法暗視野顯微鏡檢查鍍銀染色檢查 暗視野顯微鏡檢查標(biāo)本類型：梅毒硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損的滲出液、淋巴結(jié)穿刺液鍍銀染色檢查基本原理：梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染色，從而可以在鏡下觀察到梅毒螺旋體結(jié)果：棕褐色的梅毒螺旋體非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測(cè)（非特異性梅毒抗體）梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測(cè)（特異性梅毒抗體）梅毒血清學(xué)檢測(cè)分類非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測(cè)原理人感染梅毒螺旋體后，組織受到破壞釋放一種類脂成分，與梅毒螺旋體結(jié)合形成完全抗原，刺激機(jī)體在3

4、4周時(shí)產(chǎn)生類脂質(zhì)抗體（反應(yīng)素）?？贵w的作用治療監(jiān)測(cè)和療效監(jiān)測(cè)無保護(hù)作用VDRL(性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn))USR（不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)）RPR(加速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn))TRUST(甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn))非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測(cè)方法抗原基本成分為心磷脂、卵磷脂和膽固醇抗原抗體集合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀肉眼可見的沉淀顆粒試驗(yàn)方法敏感性和特異性基本相似操作簡(jiǎn)單，價(jià)格便宜可定量檢測(cè)非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)VDRLUSRRPRTRUST抗原成分心磷脂、卵磷脂、 膽固醇同前+EDTA+氯化膽堿同前+EDTA+氯化膽堿+活性炭同前+EDTA+氯化膽堿+甲苯胺紅抗原穩(wěn)定性不穩(wěn)定,1天穩(wěn)定4 8 保存12個(gè)

5、月穩(wěn)定4 8 保存12個(gè)月穩(wěn)定4 8 保存12個(gè)月血清試驗(yàn)前處理需滅活不需滅活不需滅活不需滅活反應(yīng)板及結(jié)果判斷玻片，肉眼或顯微鏡玻片，肉眼或顯微鏡紙卡片，肉眼紙卡片，肉眼注釋唯一用于檢查腦脊液的試驗(yàn)，診斷神經(jīng)梅毒結(jié)果容易判斷結(jié)果容易判斷四種非特異性試驗(yàn)方法比較非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)RPR/TRUST基本原理：在心磷脂、卵磷脂和膽固醇等組成的抗原中加入活性炭/甲苯胺紅，與待檢血清中的反應(yīng)素結(jié)合，形成肉眼可見的紅色絮狀物。試驗(yàn)所需儀器測(cè)速要求：1002轉(zhuǎn)/分鐘試驗(yàn)操作定性檢測(cè) (1)加樣：吸取50L血清/漿放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個(gè)圈中 (2)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號(hào)針頭加1滴抗原（

6、） (3)反應(yīng)：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘，立即在亮光下觀察結(jié)果結(jié)果判讀RPRTRUSTTRUST凝集反應(yīng)強(qiáng)度分級(jí)+：抗原顆粒呈粗大團(tuán)塊，凝結(jié)+：抗原顆粒中等團(tuán)塊、凝結(jié)+：顆粒凝結(jié)，與清亮液體呈明顯反差+：抗原顆粒凝結(jié)、均勻肉眼可見：抗原顆粒細(xì)小凝結(jié)，肉眼可辨：圓圈內(nèi)僅見紅色集中于中央一點(diǎn)或均勻分散。試驗(yàn)操作定量檢測(cè) （1）稀釋液準(zhǔn)備：在圈內(nèi)加入50L生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。 （2）加樣：吸取50L血清與各圈中生理鹽水做系列稀釋，并涂布整個(gè)圈內(nèi)。 （3）余同定性試驗(yàn)中。 孔 號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 稀釋倍數(shù) 原倍 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32

7、陽性K 陰性K生理鹽水(ul) - 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 - -樣 品(ul) 棄50.0 - -陽性血清(ul) - - - - - - -陰性血清(ul) - - - - - - - 抗原懸液(ul) 定量檢測(cè)操作步驟非梅毒螺旋體抗原檢測(cè)意義早期梅毒硬下疳出現(xiàn)12周后，血清學(xué)可呈陽性梅毒患者經(jīng)治療后血清滴度可下降并轉(zhuǎn)陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征為什么要做定量檢測(cè)？滴度常與病情活動(dòng)相關(guān)，滴度改變4倍具有臨床意義技術(shù)性標(biāo)本的污染溶血操作失誤生物學(xué)假陽性患者有其他疾病，使梅毒血清試驗(yàn)出現(xiàn)陽性生理機(jī)能發(fā)生變化：少數(shù)孕婦也可發(fā)生生物學(xué)假陽性梅毒血清試驗(yàn)

8、假陽性因素：急性生物學(xué)假陽性反應(yīng)的疾病麻疹、風(fēng)疹、水痘、牛痘疹傳染性單核細(xì)胞增多癥傳染性肝炎上呼吸道感染、猩紅熱肺炎鏈球菌肺炎、病毒性肺炎其他，如亞急性心內(nèi)膜炎、斑疹傷寒等急性生物學(xué)假陽性的特點(diǎn)滴度低，一般低于1:8持續(xù)時(shí)間短，多在疾病消退后6日內(nèi)轉(zhuǎn)陰用梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)檢測(cè)陰性慢性生物學(xué)假陽性反應(yīng)的疾病系統(tǒng)性紅斑狼瘡、盤狀紅斑狼瘡干燥綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎自身免疫學(xué)溶血性貧血、橋本氏甲狀腺炎風(fēng)濕性心臟病、慢性腎炎、肝硬化系統(tǒng)性硬化癥、毒品癮者孕婦、老年人慢性生物學(xué)假陽性特點(diǎn)可持續(xù)6個(gè)月以上，甚至終身滴度低，一般低于1:8用梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)檢測(cè)呈陰性梅毒血清反應(yīng)假陰性前帶現(xiàn)象：在非梅

9、毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)中，二期梅毒患者血清中存在高濃度的抗體時(shí)出現(xiàn)的弱陽性或陰性反應(yīng)的結(jié)果。若將血清稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)即可出現(xiàn)陽性結(jié)果合并HIV感染的梅毒患者，梅毒血清試驗(yàn)可呈陰性技術(shù)操作血清固定（耐血清性）指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)在一定時(shí)期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)早期的血清固定常與治療量不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)性梅毒有一定的關(guān)系FTA-ABSTPPA/ TPHATP-ELISA發(fā)光法膠體金法梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測(cè)TPPA基本原理TPPA稱為梅毒螺旋體明膠凝集實(shí)驗(yàn)用超聲裂解梅毒螺旋體制備抗原，致敏明膠顆粒致敏粒子與待檢血清中的抗梅毒螺旋體特異性抗體結(jié)合產(chǎn)生肉眼可見的凝集。TP

10、PA操作步驟試劑準(zhǔn)備：恢復(fù)室溫加稀釋液：每份樣本做4孔，加標(biāo)本稀釋液加至微量反應(yīng)板孔內(nèi)，第1孔100L，第24孔各25L樣本稀釋：取血清25L加至第1孔，混勻后取25L至第2孔，混勻后取25L至第3孔，混勻后取25L至第4孔，混勻后棄去25L加對(duì)照液：第3孔加未致敏顆粒25L，第4孔加致敏 顆粒25L混合：將反應(yīng)板置振蕩器振蕩30秒反應(yīng)：孵育2h觀察結(jié)果TPPA結(jié)果判讀觀察第3孔，不出現(xiàn)凝集為有效試驗(yàn)TPPA結(jié)果判斷觀察凝集反應(yīng)強(qiáng)度：分級(jí)如下 4+3+：顆粒光滑覆蓋整個(gè)孔底，有時(shí)邊緣有折疊 2+：顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán) 1+：顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán) ：顆粒模糊覆蓋，邊緣有明顯的小環(huán) 一：顆粒緊密沉積孔底中央或形成一小點(diǎn)梅毒螺旋體抗原檢測(cè)意義優(yōu)點(diǎn)敏感性高，特異性強(qiáng)對(duì)非特異性試驗(yàn)進(jìn)行證實(shí)缺點(diǎn)通常終身持續(xù)陽性不能區(qū)分現(xiàn)癥感染和既往感染不能作為療效觀察指標(biāo)梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果解釋TRUST/RPRTPPA 臨床意義陰性陰性 排除梅毒（一期梅毒的早早期）陽性陽性 現(xiàn)癥梅毒（梅毒孕婦所生的嬰兒除外）陽性陰性 生物學(xué)假陽性陰性陽性 早期梅毒經(jīng)治療后 （早期梅毒）先天梅