梅毒血清學(xué)檢測操作規(guī)范

1、梅毒血清學(xué)檢測操作規(guī)范主要內(nèi)容梅毒概述梅毒血清學(xué)檢測方法梅毒檢測技術(shù)規(guī)范梅毒是一種幾乎可以侵犯全身所有器官，而產(chǎn)生多種癥狀和體征的慢性傳染性疾病。十六世紀(jì)初由歐洲傳入亞洲，后蔓延我國。梅毒又稱為楊梅瘡、廣東瘡、疳瘡、下疳、霉瘡等。 梅毒概述 梅毒螺旋體生物學(xué)特征病原體為蒼白密螺旋體蒼白亞種,不易著色直徑 ，有814個致密而規(guī)則的 小螺旋，兩端尖直，運(yùn)動活躍，運(yùn)動方式多樣抵抗力極弱，對溫度和干燥特別敏感對青抗生素敏感梅毒傳播途徑性傳播性接觸是主要傳染途徑未經(jīng)治療的患者在感染后1年內(nèi)具有傳染性隨著病期的延長，傳染性越來越小感染后2年，通過性接觸一般無傳染性梅毒傳播途徑母嬰傳播妊娠7周時，梅毒螺旋體

2、即可通過胎盤傳播未經(jīng)治療者，雖已無性傳播（病期2年），但妊娠時仍可傳染胎兒，病期越長，傳染性越小梅毒傳播途徑其他途徑輸血傳播接觸傳播 接觸部位附有梅毒螺旋體日常用品、接吻、哺乳、醫(yī)療器械等途徑梅毒的分期一期梅毒硬下疳和/或腹股溝淋巴結(jié)腫大二期梅毒病期在2年內(nèi)有多形性皮疹等三期梅毒病期在2年以上，可有皮膚黏膜損害等隱性（潛伏）梅毒胎傳（先天）梅毒梅毒的診斷病史癥狀實(shí)驗(yàn)室檢查梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢查對診斷有重要意義梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)病原學(xué)檢測血清學(xué)檢測梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測的特點(diǎn) 臨床表現(xiàn) 取材部位 檢查方法一期梅毒 潰瘍 淋巴結(jié) 病原學(xué)檢查 血液 血清學(xué)檢查二期梅毒 皮損 淋巴結(jié) 病原學(xué)檢查 血液 血清學(xué)檢查

3、潛伏梅毒 血液 血清學(xué)檢查三期梅毒 血液 血清學(xué)檢查 神經(jīng)梅毒 血液 血清學(xué)檢查 腦脊液 細(xì)胞、蛋白量檢查VDRL等梅毒的病原學(xué)檢測-顯微鏡檢測法暗視野顯微鏡檢查鍍銀染色檢查 暗視野顯微鏡檢查標(biāo)本類型：梅毒硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損的滲出液、淋巴結(jié)穿刺液鍍銀染色檢查基本原理：梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染色，從而可以在鏡下觀察到梅毒螺旋體結(jié)果：棕褐色的梅毒螺旋體非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測（非特異性梅毒抗體）梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測（特異性梅毒抗體）梅毒血清學(xué)檢測分類非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測原理人感染梅毒螺旋體后，組織受到破壞釋放一種類脂成分，與梅毒螺旋體結(jié)合形成完全抗原，刺激機(jī)體在3

4、4周時產(chǎn)生類脂質(zhì)抗體（反應(yīng)素）?？贵w的作用治療監(jiān)測和療效監(jiān)測無保護(hù)作用VDRL(性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn))USR（不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)）RPR(加速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn))TRUST(甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn))非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測方法抗原基本成分為心磷脂、卵磷脂和膽固醇抗原抗體集合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀肉眼可見的沉淀顆粒試驗(yàn)方法敏感性和特異性基本相似操作簡單，價格便宜可定量檢測非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)VDRLUSRRPRTRUST抗原成分心磷脂、卵磷脂、 膽固醇同前+EDTA+氯化膽堿同前+EDTA+氯化膽堿+活性炭同前+EDTA+氯化膽堿+甲苯胺紅抗原穩(wěn)定性不穩(wěn)定,1天穩(wěn)定4 8 保存12個

5、月穩(wěn)定4 8 保存12個月穩(wěn)定4 8 保存12個月血清試驗(yàn)前處理需滅活不需滅活不需滅活不需滅活反應(yīng)板及結(jié)果判斷玻片，肉眼或顯微鏡玻片，肉眼或顯微鏡紙卡片，肉眼紙卡片，肉眼注釋唯一用于檢查腦脊液的試驗(yàn)，診斷神經(jīng)梅毒結(jié)果容易判斷結(jié)果容易判斷四種非特異性試驗(yàn)方法比較非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)RPR/TRUST基本原理：在心磷脂、卵磷脂和膽固醇等組成的抗原中加入活性炭/甲苯胺紅，與待檢血清中的反應(yīng)素結(jié)合，形成肉眼可見的紅色絮狀物。試驗(yàn)所需儀器測速要求：1002轉(zhuǎn)/分鐘試驗(yàn)操作定性檢測 (1)加樣：吸取50L血清/漿放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個圈中 (2)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原（

6、） (3)反應(yīng)：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘，立即在亮光下觀察結(jié)果結(jié)果判讀RPRTRUSTTRUST凝集反應(yīng)強(qiáng)度分級+：抗原顆粒呈粗大團(tuán)塊，凝結(jié)+：抗原顆粒中等團(tuán)塊、凝結(jié)+：顆粒凝結(jié)，與清亮液體呈明顯反差+：抗原顆粒凝結(jié)、均勻肉眼可見：抗原顆粒細(xì)小凝結(jié)，肉眼可辨：圓圈內(nèi)僅見紅色集中于中央一點(diǎn)或均勻分散。試驗(yàn)操作定量檢測 （1）稀釋液準(zhǔn)備：在圈內(nèi)加入50L生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。 （2）加樣：吸取50L血清與各圈中生理鹽水做系列稀釋，并涂布整個圈內(nèi)。 （3）余同定性試驗(yàn)中。 孔 號 1 2 3 4 5 6 7 8 稀釋倍數(shù) 原倍 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32

7、陽性K 陰性K生理鹽水(ul) - 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 - -樣 品(ul) 棄50.0 - -陽性血清(ul) - - - - - - -陰性血清(ul) - - - - - - - 抗原懸液(ul) 定量檢測操作步驟非梅毒螺旋體抗原檢測意義早期梅毒硬下疳出現(xiàn)12周后，血清學(xué)可呈陽性梅毒患者經(jīng)治療后血清滴度可下降并轉(zhuǎn)陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征為什么要做定量檢測？滴度常與病情活動相關(guān)，滴度改變4倍具有臨床意義技術(shù)性標(biāo)本的污染溶血操作失誤生物學(xué)假陽性患者有其他疾病，使梅毒血清試驗(yàn)出現(xiàn)陽性生理機(jī)能發(fā)生變化：少數(shù)孕婦也可發(fā)生生物學(xué)假陽性梅毒血清試驗(yàn)

8、假陽性因素：急性生物學(xué)假陽性反應(yīng)的疾病麻疹、風(fēng)疹、水痘、牛痘疹傳染性單核細(xì)胞增多癥傳染性肝炎上呼吸道感染、猩紅熱肺炎鏈球菌肺炎、病毒性肺炎其他，如亞急性心內(nèi)膜炎、斑疹傷寒等急性生物學(xué)假陽性的特點(diǎn)滴度低，一般低于1:8持續(xù)時間短，多在疾病消退后6日內(nèi)轉(zhuǎn)陰用梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)檢測陰性慢性生物學(xué)假陽性反應(yīng)的疾病系統(tǒng)性紅斑狼瘡、盤狀紅斑狼瘡干燥綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎自身免疫學(xué)溶血性貧血、橋本氏甲狀腺炎風(fēng)濕性心臟病、慢性腎炎、肝硬化系統(tǒng)性硬化癥、毒品癮者孕婦、老年人慢性生物學(xué)假陽性特點(diǎn)可持續(xù)6個月以上，甚至終身滴度低，一般低于1:8用梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)檢測呈陰性梅毒血清反應(yīng)假陰性前帶現(xiàn)象：在非梅

9、毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)中，二期梅毒患者血清中存在高濃度的抗體時出現(xiàn)的弱陽性或陰性反應(yīng)的結(jié)果。若將血清稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)即可出現(xiàn)陽性結(jié)果合并HIV感染的梅毒患者，梅毒血清試驗(yàn)可呈陰性技術(shù)操作血清固定（耐血清性）指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)在一定時期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)早期的血清固定常與治療量不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)性梅毒有一定的關(guān)系FTA-ABSTPPA/ TPHATP-ELISA發(fā)光法膠體金法梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測TPPA基本原理TPPA稱為梅毒螺旋體明膠凝集實(shí)驗(yàn)用超聲裂解梅毒螺旋體制備抗原，致敏明膠顆粒致敏粒子與待檢血清中的抗梅毒螺旋體特異性抗體結(jié)合產(chǎn)生肉眼可見的凝集。TP

10、PA操作步驟試劑準(zhǔn)備：恢復(fù)室溫加稀釋液：每份樣本做4孔，加標(biāo)本稀釋液加至微量反應(yīng)板孔內(nèi)，第1孔100L，第24孔各25L樣本稀釋：取血清25L加至第1孔，混勻后取25L至第2孔，混勻后取25L至第3孔，混勻后取25L至第4孔，混勻后棄去25L加對照液：第3孔加未致敏顆粒25L，第4孔加致敏 顆粒25L混合：將反應(yīng)板置振蕩器振蕩30秒反應(yīng)：孵育2h觀察結(jié)果TPPA結(jié)果判讀觀察第3孔，不出現(xiàn)凝集為有效試驗(yàn)TPPA結(jié)果判斷觀察凝集反應(yīng)強(qiáng)度：分級如下 4+3+：顆粒光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊 2+：顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán) 1+：顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán) ：顆粒模糊覆蓋，邊緣有明顯的小環(huán) 一：顆粒緊密沉積孔底中央或形成一小點(diǎn)梅毒螺旋體抗原檢測意義優(yōu)點(diǎn)敏感性高，特異性強(qiáng)對非特異性試驗(yàn)進(jìn)行證實(shí)缺點(diǎn)通常終身持續(xù)陽性不能區(qū)分現(xiàn)癥感染和既往感染不能作為療效觀察指標(biāo)梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果解釋TRUST/RPRTPPA 臨床意義陰性陰性 排除梅毒（一期梅毒的早早期）陽性陽性 現(xiàn)癥梅毒（梅毒孕婦所生的嬰兒除外）陽性陰性 生物學(xué)假陽性陰性陽性 早期梅毒經(jīng)治療后 （早期梅毒）先天梅