DB4117∕T 321-2021 動物病原微生物實驗室環(huán)境控制指南

1、 ICS 65.020.99CCS B404117駐 馬 店 市 地 方 標 準DB4117/T 3212021動物病原微生物實驗室環(huán)境控制指南2021- 09-29發(fā)布2021-10-29實施 DB 4117/T 3212021前言本文件按照GB/T 1.12020標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本文件為首次發(fā)布。I DB 4117/T 3212021動物病原微生物實驗室環(huán)境控制指南12范圍本文件規(guī)定了動物病原微生物實驗室環(huán)境控制。本文件適用于動物病原微生物實驗室環(huán)境條件的要求、控制、監(jiān)測和記錄。本文件所述動物病原微生物實驗室以下均簡稱為實驗室。規(guī)范性引用文件下

2、列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 4789.3食品安全國家標準食品微生物學檢驗大腸桿菌群計數(shù)GB/T 4789.4食品安全國家標準食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗GB/T 4789.10食品安全國家標準食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗GB/T 4789.15食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數(shù)GB/T 4789.35食品安全國家標準食品微生物學檢驗乳酸菌檢驗GB/T 18204.3公共場所衛(wèi)生檢驗方法第3部分：空氣微生物GB/T

3、25916.1潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境生物污染控制第1部分3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.13.2病原微生物能夠使人或者動物致病的微生物。潔凈區(qū)空氣懸浮粒子濃度受控的專用空間，其建造和使用方式使區(qū)域內(nèi)進入的、產(chǎn)生的、滯留的粒子最少，區(qū)域內(nèi)溫度、濕度、壓力等其他相關(guān)參數(shù)按要求受控。3.3菌落總數(shù)檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下（如培養(yǎng)基、培養(yǎng)基溫度和培養(yǎng)時間等）培養(yǎng)后，所得每g（mL）檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。3.4浮游菌懸浮在空氣中的帶菌微粒。1 DB 4117/T 32120213.5沉降菌降落在表面的帶菌微粒。4環(huán)境要求4.1實驗室設計和建造應符合實驗室生物安全通用要求等國家規(guī)定和要求

4、。4.2實驗室設計和建造應達到BLS-2實驗室設計標準。4.3實驗室的設計應保證對生物、化學、輻射和物理等危險源的防護水平控制在經(jīng)過評估的可接受程度，為關(guān)聯(lián)的辦公區(qū)和鄰近的公共空間提供安全的工作環(huán)境及防止危害環(huán)境。4.4房間的門應安裝門鎖，門鎖應便于內(nèi)部快速打開。需要時（如：正操作危險材料時），房間入口處應有警示標識。4.54.64.74.8實驗室的走廊和通道應不妨礙人員和物品通過，并應設計緊急撤離路線，緊急出口應有明顯標識。有效隔離不相容的實驗室活動區(qū)域，實驗室的工作區(qū)域應與辦公室區(qū)域明顯分開。實驗室內(nèi)溫度、濕度、照度、噪聲和潔凈度等室內(nèi)環(huán)境參數(shù)應符合工作要求和衛(wèi)生等相關(guān)要求。實驗室工作面積

5、和總體布局應能滿足從事檢驗工作的需要，實驗室布局采用單方向工作流程，避免交叉污染。4.9一般樣品檢驗應在潔凈區(qū)（包括超凈工作臺或潔凈實驗室）進行，潔凈區(qū)域應有明顯的標示。4.104.114.12實驗室在有關(guān)規(guī)范、方法和程序有要求或?qū)Y(jié)果有影響時，需對環(huán)境條件進行監(jiān)測、控制并記錄。實驗室環(huán)境不應影響檢驗結(jié)果的準確性。實驗室的生物安全防護設施還應考慮動物實驗等過程產(chǎn)生的潛在生物危險的防護。5環(huán)境控制5.1控制原則5.1.15.1.25.1.3微生物風險的控制應注重防控結(jié)合，以防為主。對等級較高或反復發(fā)生微生物污染的風險點要進行重點管控，并制定相應的控制方案。檢驗檢測過程中涉及到微生物或生物制品時應

6、開展生物安全防護，應確保生物安全條件和狀態(tài)不超過容許水平，應避免實驗室人員、來訪人員及環(huán)境受到損害，符合相關(guān)法規(guī)、標準的要求。5.2設施和設備控制平面布局5.2.1實驗室平面布局環(huán)境如下：a)b)實驗室應設洗手池，宜設置在靠近實驗室的出口處。實驗室的墻壁、天花板和地面應易清潔、不滲水、耐化學品和消毒滅菌劑的腐蝕。地面應平整、防滑、不應鋪設地毯。c)d)e)應根據(jù)工作性質(zhì)和流程合理擺放實驗室設備、臺柜、物品等，避免相互干擾、交叉污染。實驗室臺柜等和其擺放應便于清潔，實驗臺面應防水、防腐蝕、耐熱且堅固。實驗室應配備高壓蒸汽滅菌器或其他適當?shù)南緶缇O備，所配備的消毒滅菌設備應以風險評估為依據(jù)。2

7、DB 4117/T 3212021f)實驗室應在操作動物病原微生物樣本的實驗間內(nèi)配備生物安全柜。5.2.2通風空調(diào)實驗室通風空調(diào)系統(tǒng)要求如下：a)b)c)實驗室可利用自然通風。如果采用機械通風，應避免交叉污染。若操作有毒、刺激性、放射性揮發(fā)物質(zhì)，應配備適當?shù)呢搲号棚L柜。應按產(chǎn)品的設計要求安裝和使用生物安全柜，如果生物安全柜的排風在室內(nèi)循環(huán)，室內(nèi)應具備通風換氣的條件；如果使用管道排風的生物安全柜，應通過獨立于建筑物其他公共通風系統(tǒng)的管道排出。5.2.3供水供電實驗室供水供電要求如下：a)b)供水和排水管道應不滲漏，下水應有防回流設計。應有可靠的電力供應。必要時，重要設備（如：培養(yǎng)箱、生物安全柜、

8、冰箱等）應配置備用電源。5.3實驗室區(qū)域控制5.3.1微生物實驗室需具備污染區(qū)和潔凈區(qū)，污染區(qū)及潔凈區(qū)需分開，并應達到 BSL-2實驗室基本要求。建立環(huán)境清潔制度，包括地面、墻裙、頂面、門窗、紗窗及通風排氣網(wǎng)罩等應定期進行清潔；預防積塵等造成污染。5.3.2污染區(qū)空氣潔凈度應滿足ISO 8級（潔凈度D級），其中，浮游菌應不超過200 cfu/m，沉降3菌應不超過100 cfu/4小時（90 mm）,表面微生物應不超過50 cfu/碟（55 mm）;溫度為2026；相對濕度30 %65 %；噪音75分貝；照度300勒克斯。5.3.3潔凈區(qū)空氣潔凈度應滿足ISO5級（潔凈度B級），其中，浮游菌應不

9、超過10cfu/m，沉降菌3應不超過5cfu/4小時（90mm）,表面微生物應不超過5cfu/碟（55mm）;溫度為2026；相對濕度30 %70 %；噪音75分貝；照度300勒克斯。5.3.4生物安全柜潔凈度應滿足ISO 4.8級（潔凈度A級），其中，浮游菌應不超過1 cfu/m，沉降3菌應不超過1cfu/4小時（90mm）,表面微生物應不超過1cfu/碟（55mm）;溫度為2025；相對濕度30 %60 %；噪音75分貝；照度500勒克斯。5.4實驗室空氣控制5.4.1實驗室應安裝紫外線燈或臭氧發(fā)生器等消毒設施設備，定期對微生物實驗室進行滅菌消毒處理，并建立消毒驗證方法，對紫外線輻射強度、

10、臭氧濃度進行定期監(jiān)控，以確保滅菌、消毒效果。5.4.2實驗室的通風設施能力應與實驗室功能要求相適應。當發(fā)生微生物、化學品污染物聚集達到不安全濃度或?qū)嶒炇矣腥毖躏L險時，應有充足的通風抽排設施以確保有效地排除或處理。5.5實驗用水控制5.5.15.5.2實驗室用水需達到無菌條件。制定實驗室制水系統(tǒng)（超純水、蒸餾水）的微生物控制程序，規(guī)定清潔維護、消毒的頻次及方法要求，確保充分考慮到不同季節(jié)波動等情況；水質(zhì)處理設備應定期維護并記錄；應定期監(jiān)測并在停用重新啟用時必須進行相應處理并監(jiān)測合格。3 DB 4117/T 32120215.5.3盡量縮短制備好的水的存儲時間，根據(jù)實際情況，自主選用定期加熱處理后

11、的水、使用臭氧氧化或加裝紫外燈照射等措施消毒控制微生物的滋生。5.6微生物保存控制5.6.1應當制定嚴格的安全保管制度，做好微生物菌種和樣本進出和儲存的記錄、建立檔案制度、并制定專人負責。5.6.2微生物菌種保存期間，要定期檢查菌種存放設施的溫度和濕度、菌株有無污染，如發(fā)現(xiàn)異常應重新移植培養(yǎng)后更換。5.7實驗室安防控制實驗室應設置安防措施，避免無授權(quán)人員進入，如門禁系統(tǒng)。安防系統(tǒng)設計應優(yōu)先考慮消防、應急要求。5.8實驗室標志控制實驗室應根據(jù)活動類型設置相應安全標志，包括：化學品作業(yè)場所安全警示標志、生物安全警示標志、氣瓶標志等。緊急通道和出入口應設置醒目標志。6環(huán)境監(jiān)測6.1環(huán)境空氣微生物6.

12、1.1細菌總數(shù)監(jiān)測：沉降菌監(jiān)測采用自然沉降法，浮游菌監(jiān)測撞擊法采樣，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基技術(shù)的方法測定微生物實驗室中空氣中的細菌總數(shù),具體操作按照GB/T 18204.3執(zhí)行。6.1.2真菌總數(shù)監(jiān)測：沉降菌監(jiān)測采用自然沉降法，浮游菌監(jiān)測撞擊法采樣，沙氏瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)技術(shù)的方法測定實驗室空氣中的真菌總數(shù)，具體操作按照GB/T 18204.3執(zhí)行。-溶血性鏈球菌監(jiān)測：采用撞擊法采樣、血瓊脂培養(yǎng)基計數(shù)的方法測定實驗室空氣中的-溶血性鏈球菌，具體操作按照GB/T 18204.3執(zhí)行。6.1.36.1.4嗜肺軍團菌監(jiān)測：采用液體沖擊法采樣、培養(yǎng)法定性測定公共場所空氣中的嗜肺軍團菌，具體操作按照GB/T 182

13、04.3執(zhí)行。6.2實驗用水微生物6.2.1菌落總數(shù)監(jiān)測：以無菌操作方法用滅菌吸管吸取待測 25mL充分混勻的水樣，進行梯度稀釋后，注入無菌培養(yǎng)皿中，通過平板計數(shù)法對待測水樣培養(yǎng)后測量菌落數(shù)，具體操作按照GB 4789.2執(zhí)行。6.2.2霉菌總數(shù)監(jiān)測：通過平板計數(shù)法對待測水樣培養(yǎng)后測量菌落數(shù)，或通過直接鏡檢計數(shù)法測量，具體操作按照GB 4789.15執(zhí)行。大腸菌群監(jiān)測：通過大腸菌群MPN計數(shù)法通過培養(yǎng)觀察產(chǎn)期情況統(tǒng)計大腸菌群，或通過大腸菌群平板計數(shù)法測量，具體操作按照GB 4789.3執(zhí)行。金黃色葡萄球菌監(jiān)測：進行金黃色葡萄球菌定性檢驗，通過Baird-Parker平板計數(shù)法或金黃色葡萄球菌M

14、PN法進行計數(shù)測量，具體操作按照GB 4789.10執(zhí)行。6.2.36.2.46.2.5乳酸菌監(jiān)測：本標準中的乳酸菌主要為乳桿菌屬、雙歧桿菌屬和鏈球菌屬，使用不同的培養(yǎng)基進行平板計數(shù)，進行乳酸菌總數(shù)計數(shù)、雙擊桿菌計數(shù)、嗜熱鏈球菌計數(shù)及乳桿菌計數(shù)，具體操作按照GB 4789.35執(zhí)行。4 DB 4117/T 32120216.2.66.3沙門氏菌監(jiān)測：具體操作按照GB 4789.4執(zhí)行。表面微生物可使用接觸采樣或拭子采樣對表面微生物進行監(jiān)測，具體操作按照GB/T 25916.1中附錄C執(zhí)行。不同菌種檢測方法參照本文件6.1和6.2進行。7偏移控制如果監(jiān)測結(jié)果表明，設施或環(huán)境條件已發(fā)生偏移，應停止檢驗工作，對此期間出具的檢驗檢測數(shù)據(jù)的有效性應作出分析和判斷處理。及時采取有效措施，在記錄或報告中說明，待調(diào)整滿足要求后方可繼續(xù)。8記錄8.1實驗室建立并保留的實驗檔案應當如實記錄與環(huán)境相關(guān)的實驗活動和設施工作狀態(tài)情況，以