家兔血清球蛋白分離與純度鑒定（二）

1、 家兔血清球蛋白分離與純度鑒定 （二）一、目的與要求了解血清蛋白質(zhì)電泳分離的原理、方法及臨床意義。 二、實驗原理 蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，可帶正電荷也可帶負(fù)電荷。帶電荷的蛋白質(zhì)分子在電場中向相反的電極移動，稱為電泳。血清中各種蛋白質(zhì)在PH 8.6的緩沖液中都帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動。移動的速度主要決定于帶電荷的多少和分子的大小。電荷多、分子小，移動就快；反之就慢。因此，利用電泳時各種蛋白質(zhì)分子移動的速度不同，可將血清蛋白質(zhì)分成白蛋白、1、2、球蛋白等幾條區(qū)帶。人類血清蛋白的PI和分子量 PI and relative molecular mass of the human serum prot

2、eins Protein PI relative molecular mass Albumin 4.88 69 000 1- globulin 5.60 200 000 2- globulin 5.60 300 000 - globulin 5.12 90000150000 - globulin 6.357.30 158000300000 A albumin 1- 2- - -globulin 正常人血清蛋白醋酸纖維素膜電泳圖譜點樣線陰極陽極三、操作步驟（一）點樣：約23l 成功的關(guān)鍵！（二）通電：電壓110-130v，電流為0.4-0.6mA/cm寬，通電45-60min。（三）染色：氨基黑

3、10B， 3-5min。（四）漂洗：3-4次，至薄膜底色洗凈為止。（五）定量：取試管6支，編號，將電泳薄膜按蛋白質(zhì)區(qū)帶剪開，分別置于試管中。另于空白部位剪一與白蛋白面積相同的薄膜條放入空白管中。向白蛋白管和空白管中加入0.4mol/L NaOH 4ml，其余各管2ml，需反復(fù)振搖使其充分洗脫。30min后，用分光光度計進(jìn)行比色，波長650nm，以空白管作對照，讀取白蛋白及1、2、球蛋白各管的光密度。四、結(jié)果與計算Tube number album 1、 2、 -globulin Total Absorbance （1）T=2A album+ A1+ A2+ A+ A（2）計算每一電泳條帶的百分含量白蛋白%2ODalbum=T1-%=OD1T2-%=OD2 T-%=OD T-%= OD T正常值A(chǔ)：0.600.74, 1: 0.020.04, 2: 0.040.09,0.060.11，:0.100.19是非題1.帶電荷的蛋白質(zhì)分子在電場中向相同的電極移動，叫電泳。NO2.蛋白電泳時電荷多、分子小，移動就快；反之就慢。YES3.點樣是成功的關(guān)鍵！YES單選題1.電泳時，可將血清蛋白質(zhì)分成白蛋白、1、2、和球蛋白等幾條區(qū)帶。CA3 B C r D 2.本實驗染蛋白的試劑是：CA 考馬斯亮藍(lán) B 硝酸銀