血庫實驗室技術(shù)和結(jié)果分析

1、血 庫 實 驗 室 技 術(shù)和結(jié)果分析血庫實驗室技術(shù) 一、實驗操作的一般原則 二、常用紅細胞血清學技術(shù) 三、血清學檢測的注意事項 四、實驗室工作的幾點體會一、實驗操作的一般原則（一）.使用商品化試劑前，必須認真閱讀試劑使用說明書；（二）.所有的實驗過程必須嚴格遵循實驗室所制定的標準操作規(guī)程進行，任何人員不得隨意更改步驟 ；（三）.實驗所用的試管及玻片都應(yīng)清潔（最好不要重復使用），并且做好明確清楚的標記；（四）.在實驗過程中應(yīng)先加血清，并檢查確認每個試管，再加入細胞；一、實驗操作的一般原則（五）.判讀結(jié)果時，應(yīng)該先判讀對照管，只有在對照管結(jié)果符合預(yù)期結(jié)果時，才可進一步判讀試驗結(jié)果；（六）.判讀結(jié)果

2、時，要對實驗結(jié)果進行逐一判斷，不要多個試管同時進行；（七）.要完整記錄所有的試驗現(xiàn)象，如抗體鑒定中的溶血；（八）.及時記錄實驗結(jié)果，不要憑記憶補做記錄；一、實驗操作的一般原則（九）.在記錄實驗結(jié)果時注意陰、陽性的書寫，以避免書寫不清楚發(fā)生混淆，而導致的最終結(jié)果的錯報；建議對陽性結(jié)果用繁體字“陽”字記錄；陰性結(jié)果應(yīng)記錄“陰”或“O”；（十）.在正確完整的記錄了所有的結(jié)果后，才能對實驗結(jié)果進行分析說明 ；（十一）.在實驗記錄單上應(yīng)標明：試劑的廠家、批號、實驗日期、室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果、實驗操作者及復核者；一、實驗操作的一般原則（十二）.實驗全過程中應(yīng)避免樣本間的交叉污染；（十三）.操作過程中，嚴格按照實驗

3、室生物安全的相關(guān)要求做好個人防護；（十四）.不合格標本不能接受做血型定型和交叉配血試驗。二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（一）紅細胞血清學的免疫學基礎(chǔ)（二）標本（三）鹽水介質(zhì)凝集試驗（四）膠體介質(zhì)凝集試驗（五）酶處理細胞的凝集試驗（六）抗球蛋白試驗（七）微柱凝膠試驗（八）聚凝胺的運用（九）抗體效價滴定（十）吸收放散試驗（十一）凝集抑制試驗（十二）新生兒溶血病的免疫學檢查（十三）免疫性溶血病輸血反應(yīng)的調(diào)查二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（一）紅細胞血清學的免疫學基礎(chǔ)-凝集反應(yīng)1.凝集反應(yīng)定義 2.凝集反應(yīng)的兩個階段3.凝集反應(yīng)的特點1. 凝集反應(yīng)定義 細菌、螺旋體、紅細胞或細胞性抗原等顆粒性抗原，或可溶性抗

4、原（或抗體）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒后，它們與相應(yīng)抗體（或抗原）發(fā)生特異性反應(yīng)，在適當電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象?？乖乖懦饪乖贵w凝集反應(yīng)Y抗原抗原抗原YYYYYYYYYYYYYYYYY2.凝集反應(yīng)的兩個階段第一階段：抗原抗體的特異性結(jié)合；第二階段：出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。3.凝集反應(yīng)的特點Z電位：顆粒性抗原表面雙層離子云所形成的電位差?？乖贵w特異性互補結(jié)合時，抗體橋聯(lián)作用克服Z電位而使顆粒聚集在一起。IgM類抗體：完全抗體，分子量大，抗體橋聯(lián)作用足以克服Z電位，使顆粒聚集在一起； IgG類抗體：不完全抗體，分子量小，抗體橋聯(lián)作用不足以克服Z電位，顆粒不能聚集；3.凝集反應(yīng)的特

5、點在實驗時，為促使凝集現(xiàn)象的出現(xiàn)，可采取以下措施： a.加電解質(zhì)或蛋白質(zhì)，降低離子強度縮短顆粒間的距離； b.加入右旋糖苷或葡聚糖，增加試驗溶液的粘滯度； c.用胰酶或神經(jīng)氨酸酶處理，改變表面結(jié)構(gòu)； d.以離心方法克服顆粒間的排斥力等。二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（一）紅細胞血清學的免疫學基礎(chǔ)（二）標本（三）鹽水介質(zhì)凝集試驗（四）膠體介質(zhì)凝集試驗（五）酶處理細胞的凝集試驗（六）抗球蛋白試驗（七）微柱凝膠試驗（八）聚凝胺的運用（九）抗體效價滴定（十）吸收放散試驗（十一）凝集抑制試驗（十二）新生兒溶血病的免疫學檢查（十三）免疫性溶血病輸血反應(yīng)的調(diào)查二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（二）標本：1.血樣的采集

6、2.紅細胞懸液的配制3.標本的保存1.血樣的采集.紅細胞標本： 作為抗原的紅細胞標本，可用末梢血，直接用生理鹽水配制成懸液；在多數(shù)情況下是靜脈采血，用ACD或CPD血液保存液抗凝，或乙二胺四乙酸二鈉（Na2-EDTA）抗凝，血液與保存液之比為4:1，每毫升血用5%的Na2。用于抗球蛋白試驗的紅細胞標本要抗凝，原因為：不抗凝標本在溫度較低的情況下，自身冷抗體會與紅細胞作用，活化補體，使紅細胞上結(jié)合有C3b和C4b，造成抗球蛋白試驗的假陽性。1.血樣的采集 .血清標本：取靜脈血慢慢注入干燥管內(nèi)，置37恒溫箱，待凝固后用玻璃棒攪動血塊，使之與管壁剝離，然后置4 過夜、離心分離血清。必要時血液凝固后即

7、離心分離血清，但分出的血清較少，同時也沒有4 過夜吸收冷自身抗體的作用。 需要補體參與的血清學試驗，要用新鮮血清，或添加新鮮AB型血清作為補體來源；而有些試驗用的血清或做試劑用的血清則要經(jīng)56 30min滅活補體后使用。 一般試驗避免使用血漿，防止纖維蛋白原的干擾。 2.紅細胞懸液的配制.用于血型鑒定、交叉配血的紅細胞至少要用大量的生理鹽水洗一遍，通過洗滌可以去除吸附在紅細胞表面的血型物質(zhì)、血漿蛋白質(zhì)、抗凝劑等成分。.配制懸液時應(yīng)將最后一次洗滌的紅細胞 3000轉(zhuǎn)/分 離心30分鐘壓積，在不去除上層鹽水的情況下，吸取一定量的壓積細胞按體積百分比配制成所需要濃度的懸液。 一般洗滌壓積的紅細胞1滴

8、，加8滴生理鹽水，配制成的濃度為10%的細胞懸液。10%的懸液：測定抗體親和力； 2%的懸液：滴定抗體效價； 5%的懸液：常用于血型鑒定或間抗試驗。3.標本的保存血清標本： 不稀釋的血清標本如加防腐劑（10%的疊氮鈉防腐，最終濃度為0.1%）可在4保存數(shù)月，但要防止干涸；如在-20 可保存數(shù)年，抗體活性基本不變。紅細胞標本:一般試驗用的凝血標本要在5天之內(nèi)使用，以不溶血為準。如用ACD或CPD血液保存液可保存3周，各種保存的紅細胞在使用之前都要用生理鹽水洗滌一遍。在操作的每一環(huán)節(jié)中所用的鹽水盡可能使用注射用生理鹽水，在高溫環(huán)境里的使用間歇，鹽水也應(yīng)置4 貯存，防止長菌。 生理鹽水稀釋的血清只限

9、當天使用。 用作交叉配血的供、受者標本要在4保存一周，以便在出現(xiàn)輸血反應(yīng)時可備查用。二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（一）紅細胞血清學的免疫學基礎(chǔ)（二）標本（三）鹽水介質(zhì)凝集試驗（四）膠體介質(zhì)凝集試驗（五）酶處理細胞的凝集試驗（六）抗球蛋白試驗（七）微柱凝膠試驗（八）聚凝胺的運用（九）抗體效價滴定（十）吸收放散試驗（十一）凝集抑制試驗（十二）新生兒溶血病的免疫學檢查（十三）免疫性溶血病輸血反應(yīng)的調(diào)查二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（三）鹽水介質(zhì)凝集試驗1.概述2.方法3.離心的要求4.試驗記錄5.緡錢狀凝集的處理 1.鹽水介質(zhì)凝集試驗概述 鹽水介質(zhì)凝集試驗中的抗原是用鹽水作為介質(zhì)的紅細胞懸液，紅細胞上的抗

10、原決定簇與相應(yīng)的抗體分子特異性結(jié)合，紅細胞交叉聯(lián)接形成肉眼可見的凝集反應(yīng)。鹽水介質(zhì)凝集試驗用于IgM抗體的檢出與鑒定、鹽水配血試驗，以及某些血型系統(tǒng)的血型鑒定，如ABO、MN、P等。 在鹽水介質(zhì)中，凝集是IgM抗體的行為，但在ABO血型系統(tǒng)中，A、B抗原位點多，當IgG抗A、抗B的濃度足夠大時，在鹽水介質(zhì)中也能發(fā)生凝集。2.鹽水介質(zhì)凝集試驗的方法 平板法：有玻璃片、陶瓷板、搪瓷板、塑料板、以及防剩漏的血型紙等多種質(zhì)地的平板可供選用，現(xiàn)在多用的帶凹的專用板，操作方便。操作時在平板上做好標記，加一滴待檢血清或試劑血清，再加紅細胞鹽水懸液1滴，混勻后放置于室溫，并不時轉(zhuǎn)動反應(yīng)板，以加速反應(yīng)的發(fā)生。反

11、應(yīng)快的在混勻后數(shù)秒即出現(xiàn)凝集，最遲在15分鐘內(nèi)肉眼觀察結(jié)果，亦可用低倍鏡觀察。2.鹽水介質(zhì)凝集試驗的方法 試管法：為推薦方法。根據(jù)需要取小試管一支或數(shù)支，做好標記，每管加血清2滴，再加所需濃度的相應(yīng)紅細胞懸液1滴，然后根據(jù)抗體的性質(zhì)置于37，或18-22，或4作用一小時，觀察結(jié)果。常用的臺式小離心機以1000轉(zhuǎn)/分 離心 1min觀察后結(jié)果。2.鹽水介質(zhì)凝集試驗的方法 在鹽水凝集試驗，一般設(shè)兩個對照：一個是有相應(yīng)抗原的紅細胞與抗體反應(yīng)作為陽性對照；另一個是不帶抗原的紅細胞與血清反應(yīng)作為陰性對照。只有對照管的結(jié)果正確，試驗結(jié)果才可靠。3.鹽水介質(zhì)凝集試驗中離心的要求 在鹽水法測定血型和交叉配血時

12、，多采用立即離心法。正確操作應(yīng)該是將紅細胞懸液加到血清后立刻離心。對于ABO血型系統(tǒng)，如果在室溫放置2分鐘后離心，可能使3+-4+的凝集減弱為0（-）-1+，并有明顯或不明顯的溶血。如果在室溫放置5分鐘后離心，原來有的凝集可能消失，并有溶血。還有些標本在延遲離心后，本應(yīng)有的凝集會變?yōu)榧炔荒植蝗苎蚨l(fā)現(xiàn)不了ABO血型的不配合，這種情況多發(fā)生在O型血清與其他型的紅細胞試驗中，發(fā)生率在2%-3%左右。4.鹽水介質(zhì)凝集試驗實驗記錄判讀結(jié)果前應(yīng)預(yù)先設(shè)計好記錄冊，在記錄冊上標記好細胞樣本和血清樣本的位置，一邊觀察，一邊記錄結(jié)果。常用的記錄符號及所示的凝集強度如下： 4+：一個大凝塊，背景透明，無游

13、離細胞； 3+：數(shù)個大凝集塊，背景透明，無游離細胞； 2+：許多小凝集塊，肉眼可見，大小均勻，背景基本透明，有游離細胞。 1+：很小的凝集塊，肉眼還可見，背景不透明，游離細胞較多，常要用顯微鏡觀察。 0（-）：無凝集，無溶血，全是游離細胞，要用顯微鏡觀察。 pH:部分溶血。 H：完全溶血。5.鹽水介質(zhì)凝集試驗中緡錢狀凝集的處理緡錢狀凝集，也稱錢串狀凝集，是一種紅細胞的假性凝集，一般紅細胞在自身血漿中沉降時可以看到緡錢狀的形成。在血漿球蛋白異常時，如高球蛋白血癥、巨球蛋白血癥時會出現(xiàn)緡錢狀；另外在患者使用大分子右旋糖酐和羥乙基淀粉溶液作為血容量擴張劑時也可產(chǎn)生緡錢狀凝集。實驗中遇到緡錢狀凝集時，

14、可將血清進行適當稀釋后進行試驗；在顯微鏡下觀察到緡錢狀凝集時加一滴生理鹽水通常就可以消除。緡錢狀凝集一般不影響間抗試驗，嚴重的可在37孵育前加1-2滴生理鹽水，孵育過程中搖動數(shù)次。二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（四）膠體介質(zhì)凝集試驗1.原理2.常用的膠體介質(zhì)3.方法二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（一）紅細胞血清學的免疫學基礎(chǔ)（二）標本（三）鹽水介質(zhì)凝集試驗（四）膠體介質(zhì)凝集試驗（五）酶處理細胞的凝集試驗（六）抗球蛋白試驗（七）微柱凝膠試驗（八）聚凝胺的運用（九）抗體效價滴定（十）吸收放散試驗（十一）凝集抑制試驗（十二）新生兒溶血病的免疫學檢查（十三）免疫性溶血病輸血反應(yīng)的調(diào)查1.膠體介質(zhì)凝集試驗原理

15、IgG抗體在鹽水介質(zhì)里通常不發(fā)生凝集，但如果用膠體介質(zhì)配制紅細胞懸液，膠體介質(zhì)縮短了紅細胞間的距離，當紅細胞上的抗原與遇到血清中與它相對應(yīng)的IgG抗體，二者發(fā)生特異性結(jié)合，并出現(xiàn)肉眼能觀察到的凝集現(xiàn)象。2.膠體介質(zhì)凝集試驗常用的介質(zhì) 用以構(gòu)成膠體介質(zhì)的物質(zhì)有：牛血清白蛋白，人白蛋白，AB型血清，受檢者本人血清，阿拉伯樹膠等。其中以AB型血清取材方便，牛白蛋白效果好，使用較多。人AB型血清：無額外抗體、含A，B血型物質(zhì)少、促進凝集強的可備用。牛白蛋白：商品化、常用22%的濃度（促凝效果最好）、30%的濃度（有利于檢出部分弱的Rh抗體）、7%的濃度（有利于IgG 抗-A和抗-B的檢出）。3.膠體介

16、質(zhì)凝集試驗的方法 膠體介質(zhì)配血法：在兩支小試管中分別加供者和受者的5%鹽水紅細胞懸液1滴，然后加適量的生理鹽水，混勻，離心去上清，瀝干。再分別加受者和供者的血清兩滴，混勻，立即離心，輕輕搖動觀察結(jié)果，如有凝集或溶血，表示不配合，不必進行下面的試驗，如沒有凝集或溶血，再各加兩滴AB型血清或牛白蛋白溶液，37孵育一小時，讀取結(jié)果。也可孵育15-30分鐘轉(zhuǎn)入抗球蛋白試驗。 白蛋白鋪層法：是一種比較簡單實用的方法。操作時在做好標記的試管內(nèi)加2-3滴血清，在加5%鹽水紅細胞懸液1滴，混勻，置37孵育15-30分鐘。3400轉(zhuǎn)/分 離心15秒，不要搖動紅細胞扣。然后沿管壁加2滴牛白蛋白溶液，使其在紅細胞扣

17、上形成一薄層，不要混合，置37孵育5-10分鐘，輕輕搖動，讀取結(jié)果。二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（一）紅細胞血清學的免疫學基礎(chǔ)（二）標本（三）鹽水介質(zhì)凝集試驗（四）膠體介質(zhì)凝集試驗（五）酶處理細胞的凝集試驗（六）抗球蛋白試驗（七）微柱凝膠試驗（八）聚凝胺的運用（九）抗體效價滴定（十）吸收放散試驗（十一）凝集抑制試驗（十二）新生兒溶血病的免疫學檢查（十三）免疫性溶血病輸血反應(yīng)的調(diào)查二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（五）酶處理細胞的凝集試驗1.原理2.常用的酶3.方法4.關(guān)于酶處理紅細胞凝集素1.酶處理細胞的凝集試驗原理 紅細胞表面有豐富的唾液酸，在中性環(huán)境里紅細胞帶負電荷，所以紅細胞之間是相互排斥的。蛋

18、白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細胞表面的負電荷，從而使紅細胞距離縮短，IgG內(nèi)抗體分子就能與有相應(yīng)抗原的紅細胞產(chǎn)生凝集。酶法能顯著增強Rh和Kidd系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng)，但同時會破壞M、N、S、s、Fya和 Fyb抗原，對它們不能用酶處理的方法。2.酶處理細胞的凝集試驗常用的酶.常用的酶有菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶等。.酶的配制和保存：配制略。保存-20可以保存2個月。用前融化，當日用不完必須棄去。在配制酶溶液時要注意個人防護。另外，各種酶粉都容易潮解，要注意密封保存。3.酶處理細胞的凝集試驗的方法.一期法酶試驗。.二期法酶試驗。4.酶處理細胞凝集素 酶處理細胞凝集素：是指有一些抗體能

19、與胰酶、木瓜酶、菠蘿酶等酶處理的細胞發(fā)生凝集，但不與未處理的細胞反應(yīng)，原因可能是酶處理后某些抗原位點得以暴露，且不同酶暴露的位點不完全相同，把這類能與酶處理后的紅細胞發(fā)生凝集的抗體可稱為酶處理細胞凝集素。通常不引起輸血反應(yīng)。二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（一）紅細胞血清學的免疫學基礎(chǔ)（二）標本（三）鹽水介質(zhì)凝集試驗（四）膠體介質(zhì)凝集試驗（五）酶處理細胞的凝集試驗（六）抗球蛋白試驗（七）微柱凝膠試驗（八）聚凝胺的運用（九）抗體效價滴定（十）吸收放散試驗（十一）凝集抑制試驗（十二）新生兒溶血病的免疫學檢查（十三）免疫性溶血病輸血反應(yīng)的調(diào)查二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（六）抗球蛋白試驗1.原理2.抗球蛋白

20、試劑3.方法4.試劑對照細胞的制備5.增強抗球蛋白試驗的方法6.結(jié)果分析7.臨床應(yīng)用1.抗球蛋白試驗原理 抗球蛋白試驗又稱Coombs試驗，原理為：紅細胞表面包被了IgG抗體分子，或補體分子C3、C4的片段，但不能出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。IgG抗體和補體都是人球蛋白，用它們免疫動物，或者通過雜交瘤技術(shù)可以得到抗球蛋白，這類抗球蛋白的特異性針對IgG分子的FC段或補體C3、C4的片段，可以和包被在紅細胞上的IgG抗體和補體作用，從而起到搭橋的作用，使紅細胞發(fā)生凝集?？骨虻鞍自囼炗址QCoombs試驗抗球蛋白試驗2.抗球蛋白試劑多特異性抗球蛋白試劑：曾稱為廣譜抗球蛋白試劑，試劑中應(yīng)含有抗-IgG和抗-C3d。

21、一般用雜交瘤技術(shù)制備的單克隆抗體比較純一。它主要用于配血試驗和直接抗球蛋白試驗，尤其適用于自身免疫性溶血性貧血的直接抗球蛋白試驗。單特異性抗球蛋白試劑：主要為抗-IgG和抗-C3d兩種。其中抗-IgG用于配血試驗，及抗體的檢出和鑒定；對溫抗體型的自身免疫性溶血性貧血的患者，一般先用多特異性抗球蛋白試劑做直接抗球蛋白試驗，如出現(xiàn)陽性，再用抗-IgG和抗-C3d來分型。另外，冷凝集素病是由IgM引起的，但包被的在紅細胞上的IgM在洗滌過程中容易解離，留在紅細胞上的主要為補體片段，所以冷抗體引起的自身免疫性溶血性貧血一般是補體型的。3.抗球蛋白試驗方法直接抗球蛋白試驗間接抗球蛋白試驗（1）直接Coo

22、mbs試驗不完全抗體檢測紅細胞上抗體（2）間接Coombs試驗檢測血清中的抗紅細胞抗體4.抗球蛋白試驗試劑對照細胞的制備 在直抗和間抗試驗中，陰性結(jié)果都要用試劑對照細胞檢查，也就是要用IgG和補體致敏的紅細胞去驗證實驗結(jié)果的可靠性。4.抗球蛋白試驗試劑對照細胞的制備 IgG致敏的紅細胞的制備 37 、15-30minO型Rh（+）cell+IgG抗-D 配成5%的懸液備用 3次以上鹽水洗滌 4.抗球蛋白試驗試劑對照細胞的制備 補體致敏的紅細胞的制備 置20ml10%的蔗糖溶液于一只大試管中，加4-6滴新鮮血液，或加2滴洗滌過的壓積紅細胞和4滴AB型新鮮血清，孵育 37 、15-30min；用生

23、理鹽水洗滌3次以上配制成3%的細胞懸液備用。（4 可保存48小時） 5.增強抗球蛋白試驗的方法酶法：對某些Rh、Lewis、Kidd系統(tǒng)抗體的反應(yīng)有明顯增強作用。低離子介質(zhì)法：紅細胞用低離子強度的溶液配制成的懸液做間抗試驗，可縮短致敏時間15min。牛白蛋白法：在間抗試驗的試管中加2滴30%的牛白蛋白溶液，可縮短致敏時間15min。聚乙二醇法：在間抗試驗的試管中加4滴10%分子量為4000的聚乙二醇(PEG)溶液，可縮短致敏時間15min。6. 抗球蛋白試驗的結(jié)果分析陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，受檢管凝集者為陽性，不凝集者應(yīng)再進一步加入試劑對照細胞，如果凝集為則實驗結(jié)果為陰性。如陽性或陰

24、性對照出現(xiàn)不規(guī)則結(jié)果應(yīng)分析原因，重新試驗。6. 抗球蛋白試驗的結(jié)果分析注意事項：離心過度，紅細胞不易散開，可導致假陽性。紅細胞在鹽水洗滌時已有凝集，可導致假陽性。紅細胞洗滌時應(yīng)迅速、連續(xù)，不應(yīng)中途停止。標本采集后立即進行試驗，延遲試驗或中途停止試驗，可使抗體從細胞上丟失（直抗）?？骨虻鞍籽鍑栏癜凑詹僮髡f明書使用，否則可產(chǎn)生前帶或后帶反應(yīng)，導致假陰性。6. 抗球蛋白試驗的結(jié)果分析注意事項：紅細胞上吸附抗體太少，或Coombs陰性自身免疫性溶血性貧血直抗試驗可呈假陰性反應(yīng)。全凝集或冷凝集血標本及臍帶血標本含有Wharton膠、洗滌不充分，血標本中有很多網(wǎng)織紅細胞，以及抗球蛋白血清中含有抗運鐵蛋白

25、時，都可使紅細胞凝集，出現(xiàn)假陽性。陰性結(jié)果應(yīng)核實：在試管中再加一滴IgG致敏紅細胞，如陽性則表示試管內(nèi)的抗球蛋白血清確未被消耗。7.抗球蛋白實驗的臨床應(yīng)用新生兒溶血?。℉DN）：胎兒紅細胞已被母親血型抗體致敏時。自身免疫性溶血性貧血（AIHI）：自身抗體吸附自身紅細胞時。溶血性輸血反應(yīng)：輸入紅細胞被受者不完全抗體致敏時。藥物性貧血：甲基多巴類藥物、青霉素等產(chǎn)生的不完全抗體吸附于紅細胞時。二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（一）紅細胞血清學的免疫學基礎(chǔ)（二）標本（三）鹽水介質(zhì)凝集試驗（四）膠體介質(zhì)凝集試驗（五）酶處理細胞的凝集試驗（六）抗球蛋白試驗（七）微柱凝膠試驗（八）聚凝胺的運用（九）抗體效價滴定（

26、十）吸收放散試驗（十一）凝集抑制試驗（十二）新生兒溶血病的免疫學檢查（十三）免疫性溶血病輸血反應(yīng)的調(diào)查(七).微柱凝膠試驗原理: 凝膠具有分子篩效應(yīng)和親和效應(yīng)，在微柱凝膠介質(zhì)中紅細胞抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合，利用凝膠的空間位阻經(jīng)低速離心，凝集的紅細胞懸浮在凝膠的上層，而未和抗體結(jié)合的紅細胞則沉于凝膠的底部（管底尖部）。微柱凝膠試驗原理 將紅細胞和抗血清加在凝膠上部反應(yīng)，離心后觀察凝集的紅細胞，被阻擋在小柱中凝膠的上部或中央，證明發(fā)生凝集反應(yīng)，判斷凝集反應(yīng)陽性,游離的紅細胞，被擠過裝有過濾介質(zhì)的小柱，而到達小柱的底部，證明未發(fā)生凝集判斷陰性. 二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（一）紅細胞血清學的免疫學基礎(chǔ)

27、（二）標本（三）鹽水介質(zhì)凝集試驗（四）膠體介質(zhì)凝集試驗（五）酶處理細胞的凝集試驗（六）抗球蛋白試驗（七）微柱凝膠試驗（八）聚凝胺的運用（九）抗體效價滴定（十）吸收放散試驗（十一）凝集抑制試驗（十二）新生兒溶血病的免疫學檢查（十三）免疫性溶血病輸血反應(yīng)的調(diào)查（八）.聚凝胺的運用原理： Poly是一種帶高價陽離子的多聚物，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可中和紅細胞表面的負電荷，使紅細胞之間距離減少，能引起正常紅細胞可逆性的非特異性凝聚。而當血清中含有IgG抗體與紅細胞上相應(yīng)得抗原結(jié)合在聚凝胺的作用下發(fā)生凝集，凝聚和凝集在表面上是不能區(qū)分的，再加枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負電荷與聚凝胺正電荷中和，重懸后凝

28、聚現(xiàn)象消失，而真正的凝集是不會消失的。1 紅細胞間有一定間距2 加入聚凝胺后，可以縮短紅細胞之間的距離，使其非特異性凝集3 加入枸櫞酸鈉，可以中和聚凝胺4 紅細胞的非特異性凝集消失聚凝胺原理示意圖1聚凝胺枸櫞酸鈉1 紅細胞上已有不完全抗體致敏2 加入聚凝胺后，縮短紅細胞之間的距離，讓不完全抗體可以同時與兩個紅細胞結(jié)合使其特異性凝集3 加入枸櫞酸鈉中和聚凝胺4 由于不完全抗體的結(jié)合，紅細胞的特異性凝集不消失聚凝胺原理示意圖2聚凝胺枸櫞酸鈉不完全抗體二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（一）紅細胞血清學的免疫學基礎(chǔ)（二）標本（三）鹽水介質(zhì)凝集試驗（四）膠體介質(zhì)凝集試驗（五）酶處理細胞的凝集試驗（六）抗球蛋白

29、試驗（七）微柱凝膠試驗（八）聚凝胺的運用（九）抗體效價滴定（十）吸收放散試驗（十一）凝集抑制試驗（十二）新生兒溶血病的免疫學檢查（十三）免疫性溶血病輸血反應(yīng)的調(diào)查（九）.抗體效價滴定1. 原理2.方法與IgG抗體的區(qū)分1.抗體效價滴定原理 將血清經(jīng)連續(xù)倍比稀釋后與選定的紅細胞進行反應(yīng)，通常以肉眼觀察到的最后一個“+”的凝集管作為判斷的終點，終點血清稀釋度的倒數(shù)為效價或滴度。 2.抗體效價滴定方法 取小試管若干，依次編號。每管加鹽水（或）ml準確吸取等量血清加入第1管，充分混勻，即為1:2血清稀釋液。然后從第1管吸?。ɑ颍﹎l，加入第2管，充分混勻后再吸取（或）ml加入第3管，依次稀釋到第n管，

30、稀釋度為1:2n。與IgG抗體的區(qū)分 在有些血清里同一特異性的抗體有IgM也有IgG，如抗-A、抗-B、抗-M、抗-E等。區(qū)分IgM和IgG并測IgG的效價，有一定實用意義，特別是對新生兒溶血病的免疫學檢測是必不可少的。在鹽水介質(zhì)中凝集是IgM抗體的性質(zhì)，要檢出IgG抗體必須將IgM抗體破壞，常用的方法是巰基試劑處理法。 常用試劑為：2-巰基乙醇（2-ME）應(yīng)用液。巰基試劑區(qū)分IgM與IgG的原理待檢血清2-ME(巰基乙醇)IgM抗體分子裂解IgG抗體分子不被滅活保持血清學特性(致敏相應(yīng)紅細胞)IgA抗體分子部分滅活失去與相應(yīng)紅細胞凝集的作用二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（一）紅細胞血清學的免疫學

31、基礎(chǔ)（二）標本（三）鹽水介質(zhì)凝集試驗（四）膠體介質(zhì)凝集試驗（五）酶處理細胞的凝集試驗（六）抗球蛋白試驗（七）微柱凝膠試驗（八）聚凝胺的運用（九）抗體效價滴定（十）吸收放散試驗（十一）凝集抑制試驗（十二）新生兒溶血病的免疫學檢查（十三）免疫性溶血病輸血反應(yīng)的調(diào)查（十）.吸收、放散試驗1.吸收試驗:抗原與抗體的結(jié)合是特異性的，因此具有抗體活性的血清加入相應(yīng)抗原后，抗體的活性下降或消失，這種作用稱為吸收試驗。2.放散試驗是抗原與抗體的結(jié)合是可逆的，在物理條件改變時，抗體又會從抗原抗體復合物上分離下來，將抗體由抗原抗體復合物上分離下來的試驗稱為放散試驗。二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（一）紅細胞血清學的免

32、疫學基礎(chǔ)（二）標本（三）鹽水介質(zhì)凝集試驗（四）膠體介質(zhì)凝集試驗（五）酶處理細胞的凝集試驗（六）抗球蛋白試驗（七）微柱凝膠試驗（八）聚凝胺的運用（九）抗體效價滴定（十）吸收放散試驗（十一）凝集抑制試驗（十二）新生兒溶血病的免疫學檢查（十三）免疫性溶血病輸血反應(yīng)的調(diào)查（十一）.凝集抑制試驗 概述：抗體能與有相應(yīng)抗原的紅細胞發(fā)生特異性凝集，體液中的可溶性抗原物質(zhì)能與該抗體發(fā)生特異的中和，抑制了抗體凝集紅細胞的作用。用這種可溶性物質(zhì)來抑制抗體與紅細胞凝集的試驗，稱為凝集抑制試驗。常用于ABH或Lewis分泌狀態(tài)的檢查，幫助ABO亞型的確認以及特殊情況下（紅細胞標本完全溶血） ABO血型的鑒定。二、常用

33、的紅細胞血清學技術(shù)（一）紅細胞血清學的免疫學基礎(chǔ)（二）標本（三）鹽水介質(zhì)凝集試驗（四）膠體介質(zhì)凝集試驗（五）酶處理細胞的凝集試驗（六）抗球蛋白試驗（七）微柱凝膠試驗（八）聚凝胺的運用（九）抗體效價滴定（十）吸收放散試驗（十一）凝集抑制試驗（十二）新生兒溶血病的免疫學檢查（十三）免疫性溶血病輸血反應(yīng)的調(diào)查（十二）.新生兒溶血病的免疫學檢查1.發(fā)病機理2.標本的要求3.母嬰標本的ABO血型檢測4.新生兒標本的檢查5.母親標本的檢查1.新生兒溶血病發(fā)病機理 新生兒溶血病起源于胎兒從父親方面繼承了一些母親沒有的紅細胞抗原，使得母嬰血型不合，母體存在與胎兒RBC血型抗原相應(yīng)的免疫性抗體（IgG類），此免

34、疫性抗體可以通過胎盤進入胎兒體內(nèi)，并包被在胎兒RBC上，在分娩前后加速胎兒RBC破壞發(fā)生溶血，造成胎兒發(fā)生以溶血為主要損害的一種被動免疫性疾病。1.新生兒溶血病發(fā)病機理 無論是哪種血型系統(tǒng)不合，必須具備以下兩條才能引起新生兒溶血?。℉DN）： 1.母親血漿中必須有與胎兒不相合的抗體； 2.此種抗體能通過胎盤進入胎兒體內(nèi)。 1.新生兒溶血病發(fā)病機理 國內(nèi)常見的血型不合引起的新生兒溶血為ABO及Rh血型不合，其中以ABO不合者居多，Rh不合者次之。ABO-HDN一般母親均為O型，嬰兒為A或B型（以A型較多），多發(fā)生在第一胎。Rh-HDN一般母親多為Rh-、子代為Rh+，多發(fā)生于第二胎，發(fā)病較重。如孕婦曾有輸血史或流產(chǎn)史，也可發(fā)生在第一胎。2.標本的要求一般要求新生兒標本為不抗凝血；母親標本為抗凝血。標本量4-5ml。3.母嬰標本的血型檢測 取母嬰的洗滌紅細胞、血清（血漿）按常規(guī)方法做ABO、Rh血型鑒定。4.新生兒標本的檢查新生兒溶血病患兒標本須做下面三項試驗：直接抗球蛋白試驗游離IgG抗體測定放散試驗5.母親標本的檢查IgG抗-A、抗-B效價的測定ABO意外抗體的檢查有關(guān)血型抗原的檢查二、常用的紅細胞血清學技術(shù)（一）紅細胞血清學的免疫學基礎(chǔ)（二）標本（三）鹽水介質(zhì)凝集試驗（四）膠體介質(zhì)凝集試驗（五）酶處理細胞的凝集試驗（六）抗球蛋白試驗（七）微柱凝膠試驗（八