課題3　分解纖維素的微生物的分離 (4)

1、分解纖維素的微生物的分離2、纖維素復(fù)合酶的組成及作用： 是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)；棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物。一、纖維素和纖維素酶1、纖維素：纖維素 纖維二糖 CX酶C1酶葡萄糖苷酶P27C1、CX酶 葡萄糖苷酶 葡萄糖3、纖維素酶作用分解濾紙實(shí)驗(yàn)：ABP27搖床振蕩1h二、纖維素分解菌的篩選纖維素剛果紅紅色復(fù)合物纖維素分解酶以纖維素分解菌為中心的透明圈抄P28上練一練：1、下列關(guān)于纖維素酶的說法，錯(cuò)誤的是（ ）A、纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種B、纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖C、纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞壁D、葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖2、利用剛果紅法可以篩選

2、出纖維素分解菌，下列說法錯(cuò)誤的是（ ）A、剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物 B、剛果紅能與纖維二糖形成紅色復(fù)合物 C、剛果紅不能與葡萄糖形成紅色復(fù)合物D、若培養(yǎng)基上產(chǎn)生了透明圈，則說明已篩選出了纖維素分解菌D B三、實(shí)驗(yàn)操作流程圖土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落P28確保能分離到所需微生物樹葉腐殖土埋濾紙30天振蕩培養(yǎng)1-2天變混濁培養(yǎng)后加剛果紅培養(yǎng)前加剛果紅注意：該步驟也可省略，但纖維素分解菌較少。多次資料一 ：土壤取樣 選擇纖維素豐富的環(huán)境，如樹林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等等。 生物與環(huán)境的互相依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中

3、纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土壤中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境P28旁欄思考題為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？ 纖維素分解菌的含量高。將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？ 人工設(shè)置適宜環(huán)境,使纖維素分解菌聚集。紙埋深10cm土壤。P28左P29有選擇作用，以纖維素粉作為主要碳源，只有能分解纖維素的微生物可以大量繁殖。資料二：選擇培養(yǎng)液體培養(yǎng)基，因配方中無凝固劑有，只有以纖維素為碳源的微生物才可繁殖生長用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（有多種菌落）與之對(duì)照P29旁欄思考題 2為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？P29右只能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物迅速繁

4、殖。羧甲基纖維素鈉P29先吃淀粉，再吃纖維素培養(yǎng)前加剛果紅培養(yǎng)后加剛果紅纖維素菌淀粉菌（模糊）降解色素菌纖維素菌漂洗浮色P29培養(yǎng)后加剛果紅（操作繁瑣）培養(yǎng)前加剛果紅（倒平板時(shí)加，操作簡便）纖維素菌（明顯）淀粉菌（模糊）降解色素菌（明顯）基本上是纖維素菌可能菌落混雜。方法一：培養(yǎng)后加剛果紅優(yōu)點(diǎn)：顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。缺點(diǎn)：操作繁瑣，剛果紅會(huì)使菌落間發(fā)生混雜。方法二：培養(yǎng)前加剛果紅優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，不存在菌落間混雜。缺點(diǎn)1：產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈（可能選到淀粉菌）；缺點(diǎn)2：有些微生物在培養(yǎng)時(shí)能降解色素，形成明顯的透明圈（可能選到降解色素菌）。旁欄思考題1這兩種方法各有哪些

5、優(yōu)點(diǎn)與不足？抄P29三、實(shí)驗(yàn)操作流程圖土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落抄P28確保能分離到所需微生物樹葉腐殖土埋濾紙30天振蕩培養(yǎng)1-2天變混濁培養(yǎng)后加剛果紅培養(yǎng)前加剛果紅注意：該步驟也可省略，但纖維素分解菌較少。多次課題2:土壤取樣選擇培養(yǎng)基直接分離菌落(分解尿素的細(xì)菌)（尿素為唯一氮源）選擇培養(yǎng)稀釋涂布平板法課題3:土壤取樣選擇培養(yǎng)基(纖維素分解菌)（纖維素為主要碳源）稀釋涂布平板法鑒別培養(yǎng)基透明圈挑選菌落（剛果紅染色法）P28左1本實(shí)驗(yàn)的流程與課題2中的實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？ P28左課題2是將土樣直接稀釋涂布在以尿素為唯一氮源的選擇性培養(yǎng)

6、基上分離得到菌落。本課題將土樣先不稀釋，通過選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖后，再將菌液稀釋涂布在鑒別培養(yǎng)基上選出菌落。纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基物理性質(zhì)唯一C源作用液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基纖維素粉CMC-Na使纖維素分解菌迅速增殖鑒別與篩選纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基比較1、復(fù)習(xí)微生物技術(shù)2、選擇培養(yǎng)基的操作方法四、操作提示：P29將土樣加入裝有30ml選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下震蕩培養(yǎng)12天，直至培養(yǎng)液變渾濁。也可重復(fù)選擇培養(yǎng)幾次。五、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)抄P29a、選樹林中富含腐殖多的土；b、潮濕、枯枝落葉多；c、分解纖維素的菌數(shù)量多。a、選樹林中富含腐殖

7、多的土；b、潮濕、枯枝落葉多；c、分解纖維素的菌數(shù)量多。抄P30由于所取土樣的環(huán)境不同，可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。P30P30六、課題延伸1.確定得到的是纖維素分解菌的方法纖維素酶測定法一般是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量的測定。2.纖維酶的發(fā)酵法固體發(fā)酵液體發(fā)酵閱讀“課題延伸”，回答：1.為了確定分離得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行 實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有 發(fā)酵和 發(fā)酵。2.纖維素酶測定方法是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素所產(chǎn)生的 含量進(jìn)行定量測定。發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶液體固體葡萄糖練一練1、在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌，符合下列哪一生物學(xué)觀點(diǎn)？（ ） A、生物結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)的觀點(diǎn) B、生物結(jié)構(gòu)與功能整體性觀點(diǎn) C、生物與環(huán)境相適應(yīng)的觀點(diǎn) D、生物發(fā)展進(jìn)化的觀點(diǎn)2、從土壤中分離獲得某種微生物的步驟是（ ） 土壤