實(shí)驗(yàn)微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌

1、實(shí)驗(yàn)(shyn)一 培養(yǎng)基的配制和滅菌共十六頁(yè)一、目的(md)要求了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過(guò)程。學(xué)習(xí)并掌握高壓(goy)蒸汽滅菌的原理和操作技術(shù)。共十六頁(yè)二、實(shí)驗(yàn)(shyn)原理由人工方法配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)稱為培養(yǎng)基。主要用于微生物的分離、培養(yǎng)、鑒定(jindng)、菌種保藏或積累代謝產(chǎn)物等方面。不同微生物的生長(zhǎng)繁殖需要不同的環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)和酸堿條件，因此需要配制不同的培養(yǎng)基。共十六頁(yè)培養(yǎng)基的種類(zhngli)從培養(yǎng)基的組成成分可分為: 1.合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制而成。 2.半合成培養(yǎng)基：一部分純化學(xué)物質(zhì)和一部分天然物質(zhì)配制而成。

2、3.天然培養(yǎng)基：利用天然來(lái)源的有機(jī)物配制而成。從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為: 1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑。 2.固體培養(yǎng)基：加入2%左右的凝固劑。 3.半固體培養(yǎng)基：加入0.20.5%凝固劑。從培養(yǎng)基的用途可分為: 1.選擇培養(yǎng)基：加入目的菌特別需要的或抑制非目的菌生長(zhǎng)(shngzhng)的物質(zhì)。 2.鑒別培養(yǎng)基：加入能夠和目的菌的代謝產(chǎn)物發(fā)生可見(jiàn)反應(yīng)的物質(zhì)。共十六頁(yè)高壓蒸汽(zhn q)滅菌高壓蒸汽滅菌法是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、發(fā)酵工業(yè)、醫(yī)療保健以及食品檢測(cè)中最常用的一種滅菌方法。高壓蒸汽滅菌是把待滅菌的物品放在一個(gè)可密閉的高壓蒸汽滅菌鍋中進(jìn)行的，通過(guò)加熱，產(chǎn)生(chnshng)大量蒸汽使其中壓力升高，

3、從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100的溫度，導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。當(dāng)蒸汽壓達(dá)到1.055kg/cm2時(shí)，鍋內(nèi)溫度可達(dá)到121，一般維持20min,即可殺死一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體或芽孢，而達(dá)到滅菌目的。注意：高壓蒸汽滅菌開(kāi)始之前，要將鍋內(nèi)的冷空氣排盡。共十六頁(yè)共十六頁(yè)三、實(shí)驗(yàn)(shyn)材料各種藥品：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂等；稱量工具：托盤(pán)天平、量筒、稱量紙、角匙、 pH試紙；分裝工具：鐵架臺(tái)、漏斗；包扎(boz)工具：牛皮紙、扎繩、膠塞。容器：三角瓶（250ml），大試管(每人4支，用3支，1支給老師），小試管（7支/組），培養(yǎng)皿（實(shí)驗(yàn)三每組用16套，實(shí)驗(yàn)五每組用3套，7人一組的每人3套

4、。）（實(shí)驗(yàn)五備用：液體培養(yǎng)基，150ml/組，無(wú)菌水300ml/組，無(wú)菌生理鹽水150ml/組，無(wú)菌槍頭1盒/組）共十六頁(yè)四、實(shí)驗(yàn)(shyn)步驟1、細(xì)菌(xjn)培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）：600 ml/組 配方：NaCl 0.5、蛋白胨 1、牛肉膏 0.3，瓊脂2.0， pH 7.5 (使用1N NaOH和 1N HCL調(diào)節(jié))。 配制: 計(jì)算-稱量及溶化-定容-調(diào)pH-加瓊脂 分裝： 1)分別稱取2%瓊脂加入2個(gè)三角瓶，后各分裝入150ml培養(yǎng)基，加 棉塞，包扎。 2）將剩余的300ml培養(yǎng)基中加入2%瓊脂，加熱溶化，分裝大試管（裝量為試管長(zhǎng)度的1/41/5），加塞，包扎。（一）培養(yǎng)基的

5、配制與分裝共十六頁(yè)2、霉菌培養(yǎng)基（察氏培養(yǎng)基）300ml/組 配方： K2HPO4 0.1% MgSO4.7H2O 0.05% KCL 0.05% FeSO4 0.001% （加2滴即可） NaNO3 0.2% 蔗糖 3% 瓊脂2.0 pH自然 配制： 計(jì)算-稱量及溶化-定容-加瓊脂 分裝(fn zhun)：各稱取2%瓊脂加入2個(gè)三角瓶中，再將培養(yǎng)基平均分裝在2個(gè)三角瓶中，加塞，包扎。共十六頁(yè)3.PDA培養(yǎng)基查閱(chyu)實(shí)驗(yàn)教材，每小組可自愿配制300ml共十六頁(yè)共十六頁(yè) 取7支小試管各加生理鹽水(shnglynshu)4.5ml,包扎滅菌。 取1只三角瓶加90ml蒸餾水及1015粒玻璃球

6、，包扎(boz)滅菌。（二）無(wú)菌水的制備共十六頁(yè)1.打開(kāi)鍋蓋，將包扎好的物品放入滅菌器內(nèi)，蓋緊鍋蓋。2.接通電源，打開(kāi)加水閥，加水至高水位，調(diào)節(jié)至所需溫度（1210C）和時(shí)間（20min ），進(jìn)行加熱。3.排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣，可將排氣閥打開(kāi)，待排出大量蒸汽3-5min后關(guān)閉排氣閥；4.升溫至 1210C后，自動(dòng)控制并保持恒溫 20min 。（對(duì)熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基如含有葡萄糖、氨基酸等物時(shí)，應(yīng)適當(dāng)降低壓力，延長(zhǎng)時(shí)間。）5.降溫：滅菌時(shí)間到后，自動(dòng)切斷電源，開(kāi)始(kish)降溫，6.取物：待壓力降至零時(shí)，打開(kāi)排氣閥，然后打開(kāi)滅菌器蓋，取出物品。（三）高壓蒸汽(zhn q)滅菌共十六頁(yè) 將三角瓶放回

7、儀器(yq)櫥中，小試管放到小燒杯中，不能放倒。 將滅好菌的試管，趁熱(chn r)擺成斜面，備用。（四）制作試管斜面及其他善后工作共十六頁(yè)1.請(qǐng)通過(guò)(tnggu)查閱資料，寫(xiě)出高氏1號(hào)培養(yǎng)基的配方，并分析其中的各種營(yíng)養(yǎng)要素。2.高壓蒸汽滅菌開(kāi)始之前，為什么要將鍋內(nèi)的冷空氣排盡？3.預(yù)習(xí)環(huán)境及人體微生物的檢測(cè)及無(wú)菌操作技術(shù)，小組提出設(shè)計(jì)方案。五、結(jié)果(ji gu)與思考題共十六頁(yè)內(nèi)容摘要實(shí)驗(yàn)一 培養(yǎng)基的配制和滅菌。了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過(guò)程。由人工方法配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)稱為培養(yǎng)基。3.天然培養(yǎng)基：利用天然來(lái)源的有機(jī)物配制而成。2.鑒別培養(yǎng)基：加入能夠和目的菌的代謝產(chǎn)物發(fā)生可見(jiàn)反應(yīng)的物質(zhì)。1、細(xì)菌培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)