無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)葛均友課件

1、無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心葛均友123|42 |Cont tents培養(yǎng)基灌裝相關(guān)法規(guī)要求如何設(shè)計(jì)培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝的評價(jià)與調(diào)查常見問題及FDA 483缺陷國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心3 |無菌藥品基本理念無菌藥品的生產(chǎn)須滿足其質(zhì)量和預(yù)定用途的要求，應(yīng)最大限度降低微生物、各種微粒和熱原的污染。生產(chǎn)人員的技能、所接受的培訓(xùn)及其工作態(tài)度是達(dá)到上述目標(biāo)的關(guān)鍵因素?zé)o菌藥品的生產(chǎn)必須嚴(yán)格按照精心設(shè)計(jì)并經(jīng)驗(yàn)證的方法及規(guī)程進(jìn)行|處理或成品檢驗(yàn)。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心空調(diào)系統(tǒng)資質(zhì)職責(zé)公用設(shè)施人員操作生產(chǎn)設(shè)備環(huán)境監(jiān)控容器密封質(zhì)量保證|質(zhì)量控制質(zhì)量受權(quán)人過程

2、控制4 |無菌特性組成清潔消毒質(zhì)量保證更衣確認(rèn)人員衛(wèi)生文件體系物料質(zhì)量無菌藥品風(fēng)險(xiǎn)分析為基礎(chǔ)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心5 |培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)-使用培養(yǎng)基作為藥品的替代品（Placebo）進(jìn)行無菌模擬生產(chǎn)，對無菌工藝進(jìn)行驗(yàn)證。 培養(yǎng)基灌裝在某種意義上是一種挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，因?yàn)閹缀踉谒星闆r下，微生物在培養(yǎng)基中的繁殖和生長要比在實(shí)際產(chǎn)品中更容易全面反映整個生產(chǎn)過程采用無菌工藝生產(chǎn)無菌產(chǎn)品的能力。 |各國藥品法規(guī)要求的基本內(nèi)容。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心6 |培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)相關(guān)法規(guī)要求|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心7 | ngUS FDA和EU GMP的要求FDA

3、 CGMP 無菌工藝藥品指南An aseptic processing operatio on should be validated using amicrobiological growth mediu um in place of theproduct. This process simulati ion, also known as a mediafill.EU GMP Annex1 無菌藥品的生產(chǎn)Validation of aseptic processin should include a processsimulation test using a nutrient t medi

4、um (media fill).國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心8 |2010版GMP附錄一：無菌制劑第四十七條 無菌生產(chǎn)工藝的驗(yàn)證應(yīng)包括培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的劑型以及培養(yǎng)基的選擇性、澄清度、濃度和滅菌的適用性選擇培養(yǎng)基。應(yīng)盡可能模擬常規(guī)的無菌生產(chǎn)工藝，包括所有對產(chǎn)品的無菌特性有影響的關(guān)鍵操作，及生產(chǎn)中可能出現(xiàn)的各種干預(yù)和最差條件。培養(yǎng)基模擬灌 | 裝試驗(yàn)的首次驗(yàn)證，每班次應(yīng)連續(xù)進(jìn)行3次合格的試驗(yàn)?？諝鈨艋到y(tǒng)、設(shè)備、生產(chǎn)工藝及人員重大變更后，應(yīng)重復(fù)進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)通常應(yīng)按生產(chǎn)工藝每班次半年進(jìn)行1次，每次至少一批。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心9 |201

5、0版GMP附錄一：無菌制劑培養(yǎng)基灌裝容器的數(shù)量應(yīng)足以保證評價(jià)的有效性。批量較小的產(chǎn)品，培養(yǎng)基灌裝的數(shù)量應(yīng)至少等于產(chǎn)品的批量。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)的目標(biāo)是零污染，應(yīng)遵循以下要求：（1）灌裝數(shù)量少于5000支時(shí)，不得檢出污染品；（2）灌裝數(shù)量在5000至10000支時(shí)：有1支污染，需調(diào)查，可考慮重復(fù)試驗(yàn)；有2支污染，需調(diào)查后，進(jìn)行再驗(yàn)證。（3) 灌裝數(shù)量超過10000支時(shí)：|有1支污染，需調(diào)查；有2支污染，需調(diào)查后，進(jìn)行再驗(yàn)證。（4）發(fā)生任何微生物污染時(shí)，均應(yīng)進(jìn)行調(diào)查。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心批量（瓶）3000允許染菌的數(shù)量（瓶）010 |注冊申報(bào)要求SFDA 化學(xué)藥品注射劑基本技術(shù)要求（2

6、008） 培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證是對設(shè)備、環(huán)境以及人員操作的一種系統(tǒng)驗(yàn)證,是判斷無菌保證水平的關(guān)鍵手段工藝驗(yàn)證工作主要為培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證試驗(yàn)。灌裝的批數(shù)、批量與合格標(biāo)準(zhǔn)見表1。|4750 63007760123國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心fofo |11 |相關(guān)指南文件PDA 關(guān)于培養(yǎng)基模擬灌裝的技術(shù)報(bào)告 PDA Technical Repo ort No. 28, ProcessSimulation Testing or Sterile BulkPharmaceutical Chem micals, RevisedSupplement 2006 PDA Technical Repo ort No.

7、22 1996, ProcessSimulation Testing or Aseptically FilledProducts ）國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心12 |培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)試驗(yàn)設(shè)計(jì)|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心13 |1、試驗(yàn)涵蓋范圍模擬必須包括產(chǎn)品成為無菌狀態(tài)后的所有的無菌生產(chǎn)工藝步驟(如轉(zhuǎn)運(yùn), 灌裝, 裝載/卸載, 凍干, 加塞, 軋蓋)模擬必須包括所有的無菌處理(如灌裝線的設(shè)置, 無菌連接,人員的干擾操作)培養(yǎng)基灌裝研究不包括非無菌混合操作或產(chǎn)品的除菌工藝(如無菌過濾)培養(yǎng)基的制備和滅菌可以與產(chǎn)品的|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心14 |2、多產(chǎn)品簡化試驗(yàn)思路一條

8、灌裝線生產(chǎn)多個產(chǎn)品時(shí)， 根據(jù)下列因素可被劃分為不同的類型組灌裝工藝不同的容器、密封方式由此選出兩個或更多個在下列方面能涵蓋所有其它相關(guān)產(chǎn)品的產(chǎn)品：容器的大小、開放或密封的設(shè)計(jì)灌裝線的速度和干預(yù)|凍干, 貯存容器的形式、轉(zhuǎn)移的方式推薦使用類似于矩陣式試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選擇產(chǎn)品和工藝國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心15 |模擬灌裝實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)包裝容器代表性選擇： 對于多規(guī)格、容器形狀不同的灌裝生產(chǎn)線，應(yīng)對不同大小、形狀的容器進(jìn)行評估。 多數(shù)可能選用最大敞口直徑的容器和最低生產(chǎn)線速度； 有時(shí)也會選擇容易倒落的小型容器用來代表最差情況，因可能需要更多的人工干預(yù)； 當(dāng)不能兼顧 | 時(shí)，應(yīng)考慮選取有代表性的幾種容器

9、進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心材質(zhì)與安裝質(zhì)量16 |3、驗(yàn)證與確認(rèn)穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量性能確認(rèn)及工藝驗(yàn)證（PQ/PV）可靠的設(shè)備性能運(yùn)行確認(rèn)（OQ）安裝確認(rèn)（IQ）|用戶需求與設(shè)計(jì)設(shè)計(jì)確認(rèn)（DQ）國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心17 |驗(yàn)證開始前的準(zhǔn)備工作設(shè)備設(shè)施確認(rèn)HVAC及壓空系統(tǒng)（或氮?dú)猓┑拇_認(rèn)設(shè)備的在線清洗和滅菌CIP P,SIP滅菌工藝驗(yàn)證濕熱、干熱滅菌工藝除菌過濾驗(yàn)證及空氣過濾器的完整性檢測容器/膠塞密封完好性測試人員培訓(xùn)|無菌更衣確認(rèn)環(huán)境監(jiān)控符合要求國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心18 |4、模擬灌裝實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)最差狀況：高于或低于正常范圍的條件限度，與正常生產(chǎn)

10、條件相比最有可能造成工藝或生產(chǎn)失敗的條件。宜盡可能模擬實(shí)際無菌生產(chǎn)過程，并包括產(chǎn)品加工中的“最差狀況”。其設(shè)計(jì)應(yīng)具有以下幾方面的代表性： 時(shí)間代表性| 運(yùn)行代表性 包裝容器代表性國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心19 |模擬灌裝實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)時(shí)間代表性： 應(yīng)選擇正常工作階段的不同的時(shí)間間隔，并考慮可能的中斷、換班。培養(yǎng)基灌裝應(yīng)持續(xù)足夠長的時(shí)間，覆蓋允許的工藝時(shí)間限度，并包括實(shí)際加工中最常發(fā)生的操作。操作代表性： 根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)中可能發(fā)生的動作或操作來設(shè)計(jì)培養(yǎng)基|中發(fā)生的、允許和禁止的干預(yù)事件的一覽表，并在試驗(yàn)中進(jìn)行模擬。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心20 |模擬灌裝實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)運(yùn)行代表性：應(yīng)模擬包括“

11、最差狀況”的生產(chǎn)條件下進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝。（如：最大干預(yù)次數(shù)、模擬的加卸料、可能的生產(chǎn)線停機(jī)的糾正、灌裝針/管的調(diào)整和更換、人工軋蓋、在線過濾器的更換以及所用人員的數(shù)量等）|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|21 |最差條件的設(shè)計(jì)（1）儲存時(shí)間的驗(yàn)證灌裝設(shè)備、部件、儲罐、無菌物料、藥液在實(shí)際灌封前能夠放置的最長時(shí)間 1. 灌封設(shè)備、灌封部件、儲罐、無菌物料需要再滅菌（除菌）的時(shí)間間隔 用超出單項(xiàng)驗(yàn)證后確定的最長保存時(shí)間的設(shè)備部件、儲罐、無菌物料參與培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn) 2. 產(chǎn)品從無菌過濾到灌封加塞完成所需要的時(shí)間 無菌過濾后存放在中間儲罐內(nèi)的培養(yǎng)基模擬實(shí)際生產(chǎn)時(shí)產(chǎn)品的最大儲存時(shí)間后再灌封產(chǎn)品在灌裝后密

12、封前的儲存時(shí)間國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心22 |最差條件的設(shè)計(jì)（2）最長灌裝的持續(xù)時(shí)間最保守的設(shè)計(jì)：在培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)中，模擬生產(chǎn)用時(shí)最長的批量所需要的時(shí)間，其中包括正常的干擾時(shí)間（換班、設(shè)備維修）。（一般不采用）其他的設(shè)計(jì)：1 1.在生產(chǎn)完成后接著進(jìn)行培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)2.為了減少灌封瓶數(shù)，在每批試驗(yàn)開始、中間及結(jié)束前均灌裝培養(yǎng)基，| 任何干擾操作都應(yīng)在培養(yǎng)基灌裝時(shí)進(jìn)行 在正常生產(chǎn)過程中所需的最長時(shí)間，包括可能發(fā)生的事件，人員的換班等國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|擬一次23 |最差條件的設(shè)計(jì)（3）干預(yù)的設(shè)計(jì)所有干預(yù)都應(yīng)是預(yù)先設(shè)定和進(jìn)行記錄正常的每班次都會發(fā)生（灌封線裝配，稱量調(diào)節(jié)，加膠塞

13、/鋁蓋，處理倒瓶，中控取樣，環(huán)境監(jiān)測，手工補(bǔ)充軋蓋等）非正常的非正常情況才會發(fā)生（設(shè)備故障，灌封線堵塞，軌道調(diào)節(jié)，拆卸/替換破損的部件）SOP中應(yīng)列出哪些干預(yù)是容許的，非正常的干預(yù)至少每年模干預(yù)的次數(shù)應(yīng)該等于正常生產(chǎn)時(shí)發(fā)生的次數(shù)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|設(shè)備組裝加入膠塞取出卡住的膠塞取走倒下的玻瓶手工裝載到凍干機(jī)放置熱電偶環(huán)境監(jiān)測-放置和取走培養(yǎng)皿操作人員進(jìn)出及更衣24 |干預(yù)舉例冷凍干燥工藝不同區(qū)域玻瓶破碎設(shè)備故障更換灌裝針頭灌裝針頭位置調(diào)整自動稱量故障自動加塞故障國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心25 |5、培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)的頻率新建的或生產(chǎn)工藝、設(shè)備、人員等重大變更后的無菌工藝生產(chǎn)線

14、，必須經(jīng)至少連續(xù)三批合格的培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)常規(guī)生產(chǎn)條件下的再驗(yàn)證頻率，培養(yǎng)基模擬試驗(yàn)通常按生產(chǎn)工藝每班次半年進(jìn)行1次，每次至少一批。生產(chǎn)線生產(chǎn)不同規(guī)格的無菌產(chǎn)品，則應(yīng)考慮不同規(guī)格的產(chǎn)品的因素，培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)的最差狀況進(jìn)行評估。|員，保證每年至少參加一次成功的培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心26 |變更后培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)變更及其評估對產(chǎn)品或生產(chǎn)線的每一種變更，均應(yīng)根據(jù)書面的變更控制系統(tǒng)進(jìn)行評估 。如果通過評估認(rèn)為此項(xiàng)變更會影響到無菌生產(chǎn)工藝產(chǎn)品的無菌保證水平，則需要進(jìn)行增補(bǔ)性培養(yǎng)基模擬灌裝實(shí)驗(yàn)。比如，設(shè)施或設(shè)備的變化、生產(chǎn)線配置的變動、人員重|環(huán)境監(jiān)控異常和無菌檢查結(jié)果陽性等。國

15、家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|培養(yǎng)溫度27 |6、實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基和培養(yǎng)溫度的選擇培養(yǎng)基選擇適應(yīng)廣譜微生物生長，包括細(xì)菌和真菌較好的澄明度，較小的粘度液體培養(yǎng)基易于除菌過濾常用培養(yǎng)基：3大豆胰蛋白肉湯（TSB）厭氧培養(yǎng)基僅在特殊情況下使用（FTM）干粉工藝：具備與干粉產(chǎn)品流動性能相似的無菌TSB干粉或無菌安慰劑粉末（PEG,乳糖,甘露醇)20-35，目標(biāo)值2.5，不少于14天；如選擇兩個溫度，則每一溫度下至少培養(yǎng)7天，從低溫開始。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心28 |惰性替代粉末的選擇惰性替代品選擇要求： 無活性、易滅菌 易溶解 對培養(yǎng)基促進(jìn)生長作用無副作用 易灌裝，流動性要好（培養(yǎng)基流動性較

16、差）常用替代品 聚乙二醇Polyethylene glycol 系列(PEG 6000,PEG8000）, 甘露醇Mannitol，乳糖Lactose等| 事先需要伽馬輻照滅菌（鈷60，用量約1525kGy） 應(yīng)進(jìn)行無菌性、抑菌性和溶解度的測試國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心29 |培養(yǎng)基的適應(yīng)性檢查培養(yǎng)基適應(yīng)性檢查應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本檢查培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)前或同時(shí)進(jìn)行。必須用藥典要求的標(biāo)準(zhǔn)微生物或工廠特定微生物（分離自環(huán)境人員監(jiān)測及無菌試驗(yàn)）來進(jìn)行通常為枯草芽孢桿菌、白色念珠菌，菌液濃度控制約在100個菌/ml加入的菌液應(yīng)小于100 CF FU/單位|生長良好，判該培養(yǎng)

17、基的適應(yīng)性檢查符合規(guī)定國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心30 |7、灌裝體積與數(shù)量單位灌裝體積選擇的體積要使培養(yǎng)基能適當(dāng)?shù)亟佑|容器內(nèi)表面，并且適當(dāng)翻轉(zhuǎn)或旋轉(zhuǎn)，接觸到密封件的內(nèi)表面。每只容器的灌裝體積一般不少于總?cè)莘e的1/3，但也要考慮保留25 % 至40 %的頂空能確?？夏艽嬖诘奈⑸铽@得足夠的氧氣生長。對于厭氧灌裝: 用惰性氣體代替氧氣， 并使之完全充滿容器灌封試驗(yàn)數(shù)量綜合考慮統(tǒng)計(jì)學(xué)要求和實(shí)際生產(chǎn)批量。|5000瓶，則培養(yǎng)基灌封至少應(yīng)為實(shí)際生產(chǎn)線的最大批次量。PIC (3000瓶)：如果正常生產(chǎn)的批次量低于3000瓶，則培養(yǎng)基灌封至少應(yīng)為實(shí)際生產(chǎn)線的最大批次量。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心

18、|31 |8、培養(yǎng)基模擬灌裝實(shí)驗(yàn)的陽性對照培養(yǎng)基陽性對照實(shí)驗(yàn)：隨機(jī)選取已經(jīng)完成14天培養(yǎng)的灌裝培養(yǎng)基樣品，按照藥典要求 常用枯草芽孢桿菌、白色念珠球菌或工廠特定菌作為陽性菌 將每個菌種準(zhǔn)備含100cfu u/0.1ml的菌液，每個菌種接種2支培養(yǎng)基樣品，同時(shí)并平板計(jì)數(shù)（雙份） 對真菌在20-25C下培養(yǎng)，對細(xì)菌在30-35 C下培養(yǎng)，每天檢查，5天內(nèi)需有生長跡象國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心I.32 |MP9、培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的合格標(biāo)準(zhǔn)FDA、EU GMP 和中國新版GM 無菌附錄：灌封量10000瓶時(shí)，若有1瓶污染，需徹底調(diào)查；若有兩瓶|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心污染瓶數(shù)0123459

19、5%置信限值333 |培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的合格標(biāo)準(zhǔn)PIC及SFDA研發(fā)注冊標(biāo)準(zhǔn)：在95 5%置信限時(shí)污染率低于0.1%。計(jì)算公式：污染率 = (95%置信限值)/(灌封容器數(shù)) 100%污染瓶數(shù)與95%置信限值間的關(guān)系678910|4.74 6.3 7.75 9.15 10. .51 11.84 13.15 14.43 15.7116.96國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心菌空氣破真空（不使用惰性氣體），全壓塞、軋蓋1.2.3.4.1.2.3.34 |10 0、舉例-凍干工藝方式A：模擬灌裝、裝載/卸載過程，縮短放置時(shí)間容器內(nèi)灌封好培養(yǎng)基，以半壓塞狀態(tài)裝入凍干機(jī)凍干機(jī)內(nèi)部分抽真空，在室溫放置一定的時(shí)

20、間，不進(jìn)行冷凍。用無菌空氣破真空（不使用惰性氣體），全壓塞、軋蓋缺點(diǎn):真空度不能過高，不能照成培養(yǎng)基沸騰。方式B：以經(jīng)稀釋的培養(yǎng)基模擬凍干過程容器內(nèi)灌封好經(jīng)稀釋的培養(yǎng)基，以半壓塞狀態(tài)裝入凍干機(jī)模擬凍干過程，直到容器內(nèi)的培養(yǎng)基大致達(dá)到正常濃度。用無|缺點(diǎn)：耗時(shí)長，需開發(fā)特殊的凍干程序，營養(yǎng)支持性不均一，影響微生物的存活力。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心1.2.35 |凍干工藝方式C：模擬灌裝、裝載/卸載過程，縮短放置時(shí)間，不抽真空或補(bǔ)充空氣容器內(nèi)灌封好培養(yǎng)基，以半壓塞狀態(tài)裝入凍干機(jī)凍干機(jī)不抽真空或者邊抽真空邊補(bǔ)充無菌空氣。在室溫放置一定的時(shí)間，不進(jìn)行冷凍。注意：用培養(yǎng)基完全模擬凍干工藝非常困難

21、( 如時(shí)間長、真空、低溫等)應(yīng)該首先識別有污染風(fēng)險(xiǎn)的活動，并加以模擬( 如未完全密封小瓶|小瓶必須不被冷凍注意確保培養(yǎng)基的需氧狀態(tài)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|注意事項(xiàng)36 |舉例-無菌粉末分裝工藝方法A在灌裝線上手工或增加灌裝設(shè)備，先灌裝液體培養(yǎng)基，再分裝無菌替代品粉末后壓塞、軋蓋。方法B在灌裝線上手工或增加灌裝設(shè)備，先分裝無菌替代品粉末，再灌裝液體培養(yǎng)基后壓塞、軋蓋。方法C先灌裝干粉培養(yǎng)基，再手工或增加設(shè)備加入注射用水所用惰性劑或干粉培養(yǎng)基需事先經(jīng)過輻射滅菌。常用替代品粉末有聚乙二醇、甘露醇、乳糖等。應(yīng)對添加替代品的量和對培養(yǎng)基適應(yīng)性的影響進(jìn)行研究和評估。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中

22、心|37 |舉例-無菌原料藥原料藥生產(chǎn)工藝中常有結(jié)晶步驟，因結(jié)晶過程有相變產(chǎn)生，也使模擬過程存在困難。可用一種液體介質(zhì)模擬結(jié)晶過程，讓其流經(jīng)除菌過濾器和所有管路加到結(jié)晶罐中。若結(jié)晶過程有加晶種的操作，模擬過程中也應(yīng)有這樣的操作，晶種也可用模擬介質(zhì)代替。為使晶體粒度均勻，有些結(jié)晶過程需要降溫，在模擬過程中一般不應(yīng)降溫，因在低溫下抑制微生物生長。離心、洗滌和干燥環(huán)節(jié)一般采用常溫，以免溫度對微生物的影響。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心38 |11、環(huán)境及人員監(jiān)測環(huán)境和人員監(jiān)測按照相應(yīng)的規(guī)程和方案進(jìn)行，應(yīng)涵蓋無菌工藝各工序，頻次數(shù)與正常生產(chǎn)一致。包括：空氣粒子數(shù)沉降菌浮游菌表面微生物人員監(jiān)測|國家大

23、容量注射劑工程技術(shù)研究中心39 |12、其他建議要點(diǎn)模擬灌裝全過程建議應(yīng)進(jìn)行錄像，便于事后調(diào)查分析和原因查找，也有利于員工培訓(xùn)。如有可能，應(yīng)有專人觀察和記錄操作人員的有意或無意的干預(yù)行為及時(shí)間。在試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)，有時(shí)還要考慮人員狀態(tài)，如夜班人員的注意力往往不夠集中。培養(yǎng)基灌封后可以進(jìn)行生產(chǎn)，但要等培養(yǎng)基灌封合格后產(chǎn)品才能放行|樣品或按照托盤應(yīng)進(jìn)行編號，以便于調(diào)查和追溯國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心40 |培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)結(jié)果分析與調(diào)查|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心41 |培養(yǎng)后檢查目檢培養(yǎng)基是否渾濁，是否有微生物生長要由經(jīng)過培訓(xùn)、并且有資質(zhì)能夠發(fā)覺微生物生長跡象的人員進(jìn)行檢查如果在兩個溫度

24、下培養(yǎng)時(shí)，必須在溫度切換時(shí)進(jìn)行中間判讀可疑單位立即交給質(zhì)量控制的微生物人員，進(jìn)行進(jìn) |一步分離培養(yǎng)和鑒定。根據(jù)染菌單位數(shù)，判斷是否達(dá)到驗(yàn)證接受標(biāo)準(zhǔn)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心污染 率|42 |灌裝污染曲線圖 1污染可能來源于液體培養(yǎng)基 (如與培養(yǎng)基貯罐非無菌連接，在循環(huán)管路中受到污染，微生物持續(xù)繁殖)。在灌裝結(jié)束時(shí)，應(yīng)注意保持培養(yǎng)基貯罐處于無菌密閉狀態(tài)，在儲罐內(nèi)取樣測試，可以核實(shí)這樣的假設(shè)。灌裝過程(時(shí)間或灌裝數(shù)量)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心污染率|43 |灌裝污染曲線圖 2表明污染僅發(fā)生在試驗(yàn)初期，可能污染來自起始的生產(chǎn)設(shè)備中（ 膠塞容器/軌道, 計(jì)量泵 / 針頭)，在灌裝過程中污

25、染被部分或全部“清洗掉”。灌裝過程(時(shí)間或灌裝數(shù)量)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心染率 污|灌裝過程(時(shí)間或灌裝數(shù)量)44 |灌裝污染曲線圖 3出現(xiàn)一個尖峰（在短時(shí)段的一些產(chǎn)品被污染）可能與在灌裝過程中不正確操作或干預(yù)導(dǎo)致的污染有關(guān)。很關(guān)鍵的是必須知道被污染產(chǎn)品灌裝的準(zhǔn)確時(shí)間，以及當(dāng)時(shí)實(shí)施的干預(yù)措施（灌裝操作過程的錄像是非常有用的），這樣會比較容易調(diào)查到原因。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心率 污染灌裝過程(時(shí)間或灌裝數(shù)量)45 |灌裝污染曲線圖 4同樣可能是某個如果錯誤的干預(yù)措施所造成的，不同的是該污染影響到液體的管路/回路時(shí)（如培養(yǎng)基貯罐的變化，泵或針的|替換），導(dǎo)致微生物持續(xù)繁殖。國家

26、大容量注射劑工程技術(shù)研究中心污染率|灌裝過程(時(shí)間或灌裝數(shù)量)46 |灌裝污染曲線圖 5非常不幸的是，這種現(xiàn)象是最常出現(xiàn)的，也是最難調(diào)查的。如果這種現(xiàn)象在多次試驗(yàn)中反復(fù)出現(xiàn)，可能說明這個工藝存在不確定因素，需要采取根本的措施（如 更衣/著裝、消毒劑和氣流模式的改變)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心47 |失敗調(diào)查流程|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心 人員樣 表面樣 環(huán)境空氣樣2. 對培養(yǎng)基污染的評估 培養(yǎng)條件 對污染培養(yǎng)基的菌種必須進(jìn)行鑒定 確定培養(yǎng)基污|染可能發(fā)生的時(shí)間3 3. 惰性粉末無菌測試的評估48 |培養(yǎng)基灌裝失敗調(diào)查 11. 生產(chǎn)環(huán)境的監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)評估 4. 對氣體取樣結(jié)果的評估 壓

27、縮空氣 氮?dú)獾?. 對水的微生物的評估 純水 WFI6 6. 對培養(yǎng)基評估 培養(yǎng)基的配制和消毒記錄 培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)的條件 培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)的結(jié)果中國家大容量注射劑工程技術(shù)研究 48 心1. 粒子監(jiān)控評估粒子測試監(jiān)控情況層流風(fēng)速報(bào)警記錄煙霧測試歷史的監(jiān)控情況和趨勢2. 清潔和消毒評估 設(shè)備的清潔 |消毒3. 消毒劑的配制檢查 來源或配制比例記錄 效期及效力49 |培養(yǎng)基灌裝失敗調(diào)查 24 4. 人員的評估灌裝間最多的人數(shù)操作人員連續(xù)工作時(shí)間其它人員更衣情況手消毒及污染可能中5 5. 干預(yù)操作的評估 頻次，是否有非預(yù)期干預(yù) 危險(xiǎn)的程度 污染的樣品與干預(yù)的關(guān)聯(lián)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究 49 心50 |

28、培養(yǎng)基灌裝失敗調(diào)查 3設(shè)備的評估 滅菌柜 滅菌裝載情況，滅菌程序和記錄等 最近的穿透試驗(yàn)，泄漏試驗(yàn)和干燥試驗(yàn)的結(jié)果 隧道烘箱，洗瓶機(jī)等 運(yùn)行狀態(tài)，參數(shù)是否正確 隧道烘箱各段層流壓差是否正確 灌裝設(shè)備的 |狀態(tài) 設(shè)備是否存在偏差和非計(jì)劃干預(yù) 過濾器完整性測試評估 產(chǎn)品和空氣過濾器完整性測試的結(jié)果中國家大容量注射劑工程技術(shù)研究 50 心51 |培養(yǎng)基灌裝失敗后續(xù)措施調(diào)查結(jié)論與風(fēng)險(xiǎn)評估培養(yǎng)基灌裝實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效暫停生產(chǎn)，直至確定污染來源并采取有效的糾偏措施。對培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)后和此前所生產(chǎn)的產(chǎn)品，進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估培養(yǎng)基灌裝實(shí)驗(yàn)結(jié)果無效，重新進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝實(shí)驗(yàn)無菌灌裝區(qū)的物理?xiàng)l件不滿足要求|后續(xù)措施根據(jù)調(diào)查

29、情況，采取糾偏措施后，進(jìn)行一批或多批的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心52 |要點(diǎn)提示：任何失敗的樣品都應(yīng)單獨(dú)進(jìn)行分離培養(yǎng)和鑒定，因?yàn)榭赡懿恢挥幸粋€污染源。人員與環(huán)境等監(jiān)控的微生物也應(yīng)進(jìn)行分離鑒定，并與污染菌相比較。避免試驗(yàn)室引入新的污染，導(dǎo)致誤判|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心53 |培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)常見問題及缺陷|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|54 |常見問題如何判斷哪些灌裝樣品不需要進(jìn)行培養(yǎng)？破損，影響到密封性的樣品完整性測試（泄漏測試）失敗的樣品文件中明確規(guī)定予以丟棄的中控測試樣品設(shè)備自動剔除的樣品文件中明確規(guī)定，每次干擾后應(yīng)予手工剔除的樣品（規(guī)定應(yīng)詳細(xì)、明

30、確，并需證明其可操作性和穩(wěn)定可信性）。剔除的樣品應(yīng)進(jìn)行記錄注明丟棄原因國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心55 |常見問題是否需要厭氧工藝的模擬灌裝實(shí)驗(yàn)？如果工藝中存在沖氮?dú)獾榷栊詺怏w操作時(shí)如果在環(huán)境監(jiān)測樣品或無菌試驗(yàn)中檢出厭氧菌有公司認(rèn)為，即使常規(guī)無菌工藝，也應(yīng)定期使用硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基進(jìn)行厭氧工藝模擬實(shí)驗(yàn)，或在模擬過程中進(jìn)行培養(yǎng)基的切換。培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)中的樣品是否需要在培養(yǎng)過程中進(jìn)行|不需要。培養(yǎng)基灌裝的樣品應(yīng)在開始培養(yǎng)前進(jìn)行操作，使培養(yǎng)基充分接觸到內(nèi)部各個表面，開始培養(yǎng)后不應(yīng)再進(jìn)行反轉(zhuǎn)等干擾。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心56 |常見問題如何對培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)中的干預(yù)進(jìn)行設(shè)計(jì)？考慮到最差狀況涵

31、蓋整個生產(chǎn)周期，包括換班、連續(xù)生產(chǎn)等所有干預(yù)應(yīng)經(jīng)預(yù)先批準(zhǔn)和文件化，干預(yù)描述、發(fā)生時(shí)間、頻率、持續(xù)時(shí)間、受影響的瓶數(shù)等常規(guī)干預(yù)每次培養(yǎng)基灌裝都要模擬，非常規(guī)干預(yù)可每年一次。培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)是否要模擬所有生產(chǎn)過程？是否可以分段進(jìn)行模擬試驗(yàn)？|菌過濾以后?？梢裕热鐑龈晒に?，可以把無菌灌裝和凍干模擬分開；粉針工藝中可把加注培養(yǎng)基與粉劑分裝分開。但都需要有明確方案和判斷標(biāo)準(zhǔn)。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|57 |常見問題什么情況下，可以認(rèn)為培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)無效？陽性對照失敗工藝過程中在無菌操作區(qū)發(fā)生重大偏差，如停電，高效過濾器損壞等在培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)中，是否必須進(jìn)行錄像？錄像的保存期需要多長？不是必需的

32、，錄像僅是一種可選的輔助調(diào)查和培訓(xùn)手段。如果采用了錄像措施，也僅作為公司內(nèi)部的資料（如同內(nèi)部審計(jì)報(bào)告），不必向檢查員出示。公司應(yīng)有文件規(guī)定，什么情況下要進(jìn)行錄像，錄像的儲存時(shí)間等國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心58 |Warning LetterYour firm failed to design and perform an adequateaseptic process simulation (i.e., media fill) basedupon the same controls used for routineproduction. We note that t the (b)(4)

33、 wasobserved (b)(4) during ac ctual production. However,this intervention was per rformed only once duringthe media fill in 2009. 公司的培養(yǎng) | 基灌裝驗(yàn)證未根據(jù)日常生產(chǎn)的控制進(jìn)行設(shè)計(jì)和完成，如在實(shí)際生產(chǎn)中觀察到的一些干預(yù)操作國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心th59 |Warning LetterThe written procedur res related to theproduction simulations “media fills” -conducted

34、 to validate e your capability toaseptically produce s small volume parenteral(SVP) were found to be inadequate. The mediafills for this line did not represent actualoperations used in he aseptic production ofampoules and vials.培養(yǎng)基灌 |裝沒有模擬實(shí)際的生產(chǎn)過程。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心60 |Warning Letter- A routine product

35、ion of a (b)(4) Injection vialslot would take approximately (b)(4) hours to befilled. Your written pro ocedures for routineproduction require tha at an intervention takeplace every (b)(4) minu utes for fill-weightverification measurements.SOP規(guī)定每幾分鐘就要對裝量進(jìn)行測試，但是模擬|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心61 |Warning Letter The process simulatio ons (media fill) do notrepresent actual production operations for y