流式細(xì)胞儀基礎(chǔ)簡(jiǎn)介

1、流式細(xì)胞儀基礎(chǔ)簡(jiǎn)介主要內(nèi)容流式細(xì)胞儀概要流式細(xì)胞儀的工作原理流式細(xì)胞儀測(cè)量的對(duì)象什么是流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀實(shí)物BD FACSVantageBD-Calibur 流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)FCM的定義 流式細(xì)胞儀是指，使細(xì)胞（或其他粒子）以單個(gè)方式依次高速通過激發(fā)光束，采集細(xì)胞被光照時(shí)產(chǎn)生的各種信號(hào)，對(duì)信號(hào)進(jìn)行處理，并對(duì)各參數(shù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析的一種儀器。對(duì)比 流式細(xì)胞儀是一種特殊的顯微鏡 流式細(xì)胞儀 顯微鏡 流動(dòng)的細(xì)胞 靜止的細(xì)胞樣本 數(shù)量大 數(shù)量少 高速分選 樣本難以再利用細(xì)胞群體特征量分布 可以揭示細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)信息流式細(xì)胞儀 蛋白膠 多參數(shù) 單參數(shù) 量化的分布 平均值 容易檢測(cè)各個(gè)參數(shù)間的相關(guān)性 不容易

2、功能特點(diǎn) （1）多參數(shù)定量分析每一個(gè)細(xì)胞； （2）細(xì)胞分選； 高純度：99%以上； 可分析小于1/10000比例的稀有細(xì)胞群； 單細(xì)胞克隆等。 （3）高通量（分析分選） 分析150，000個(gè)/ 秒 分選100，000個(gè)/秒 應(yīng)用領(lǐng)域 疾病診斷生物學(xué)基礎(chǔ)研究環(huán)境監(jiān)測(cè)海洋微生物研究農(nóng)業(yè)領(lǐng)域應(yīng)用等等 70年代美國(guó)為攻克癌癥而建造。廠商：Becton-DicksonCoulter-BeckmanDOCytomation 已成為一個(gè)幾十億美金的產(chǎn)業(yè)流式細(xì)胞儀工作原理流體動(dòng)力學(xué)聚焦流動(dòng)室激光聚焦液流與光源探測(cè)光路聚焦二色鏡 1 2 3帶通濾波片光電倍增管激光束細(xì)胞收集透鏡前向散射光側(cè)向散射光，熒光 光信號(hào)

3、分離，導(dǎo)向，各探測(cè)通道PMT接收并轉(zhuǎn)化為電信號(hào)。光信號(hào)收集數(shù)據(jù)處理FSC SSC FL1 FL2 FL3對(duì)數(shù) 線性 線性 線性 對(duì)數(shù)脈沖處理，模數(shù)轉(zhuǎn)換光信號(hào)電信號(hào)記錄數(shù)據(jù)，顯示結(jié)果（面積，峰高，寬度）流式細(xì)胞儀產(chǎn)生的信號(hào)非熒光信號(hào)顆粒度細(xì)胞大小散射光信號(hào)區(qū)分裂解后的外周血細(xì)胞群熒光信號(hào) 熒光染料被激發(fā)而發(fā)射的光信號(hào)。 定量染色 熒光信號(hào)大小 被標(biāo)記組分含量的定量多熒光標(biāo)記胞內(nèi)多種組分，實(shí)現(xiàn)多參數(shù)測(cè)量PIAnnexinV細(xì)胞凋亡檢測(cè)DNA含量-PIAnnexin-VCD45 FITC (log)R1=單核細(xì)胞 (CD14+ve) R2=淋巴細(xì)胞 (CD45單核細(xì)胞)R3=中性粒細(xì)胞 (CD45單

4、核細(xì)胞) CD14 PE (log)前向散射光 (linear)側(cè)向散射光(linear)PEFITC熒光標(biāo)記檢測(cè)外周血裂解后細(xì)胞群細(xì)胞分選流式細(xì)胞儀的測(cè)量對(duì)象大小 懸浮在溶液中的相互離散顆粒。 大小范圍：。對(duì)象類型 細(xì)胞類型： （1） 高等真核細(xì)胞； （2）酵母； （3）細(xì)菌； （4）多細(xì)胞的聚集體，如胰島等。 非生命顆粒： 細(xì)胞核、染色體、和其它細(xì)胞器以及乳化微球等。流式細(xì)胞儀能夠檢測(cè)的細(xì)胞屬性和組分舉例 1）不需染色： 大小，胞漿顆粒度，細(xì)胞自發(fā)熒光，色素，細(xì)胞精確計(jì)數(shù)。 2）需染色或標(biāo)記： 細(xì)胞組分： 細(xì)胞膜：流動(dòng)性，通透性，膜電位 細(xì)胞內(nèi)離子：H+（可檢測(cè)PH值），Na+，K+，Ca

5、2+（結(jié)合的和 自由 的）。 核酸：DNA含量，DNA成分，DNA合成，RNA，染色質(zhì)結(jié)構(gòu)等 總蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)分子間相互作用 抗原 細(xì)胞骨架成分 受體功能屬性：酶活性細(xì)胞凋亡細(xì)胞壞死細(xì)胞活性氫硫基凝血素結(jié)合位點(diǎn)藥物動(dòng)力學(xué).經(jīng)驗(yàn)之談：凡細(xì)胞內(nèi)能進(jìn)行熒光標(biāo)記的成分或者某種變化，都可用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。G1S phaseG2MG112 1DNA含量 DNA 含量細(xì)胞周期時(shí)相G0/1G2/MS細(xì)胞數(shù)細(xì)胞周期分析Hoechst33258（AT）Chromomycin A3 （GC）白血病患者2456X89-127recip 9-221314151617Y 1820192221Ph1 / 3染色體組型測(cè)定13生物物理所現(xiàn)有流式細(xì)胞儀型號(hào)：BD FACSVantage SE參數(shù)：分析10