腸道傳染病常見致病菌實驗室檢測課件

1、腸道傳染病常見致病菌實驗室檢測腸道傳染病常見致病菌實驗室檢測一、腸道傳染病概述二、幾種常見致病菌的實驗室檢測 一、概述腸道傳染病是由各種病原體經(jīng)口侵入腸道，在腸道內(nèi)繁殖并產(chǎn)生毒素，破壞腸粘膜組織，引起腸道功能紊亂和損害，病原體再從患者由糞便中排出感染他人的一類疾病。往引起腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐及發(fā)熱等癥狀，嚴(yán)重者可引起身體重度脫水、昏迷和休克，甚至有生命危險。一、概述 特點：發(fā)病急、傳播快、傳染性強、危害性大、極易引起暴發(fā)或流行流行特征 1、傳播途徑：糞-口（食物、水、日常生活接觸、昆蟲媒介） 2、病原體：外界抵抗力和存活力強 3、傳染源：病人、帶菌者目前認(rèn)為是唯一的傳染源 4、明顯季節(jié)性：主

2、要出現(xiàn)在夏秋季傳播途徑 1、經(jīng)水傳播：生活飲用水源被腸道傳染病人和病原攜帶者排出的糞便、嘔吐物污染或在水中洗滌病人的衣褲、器具、手等都容易造成水源污染，可引起霍亂、傷寒、細菌性痢疾等疾病的暴發(fā)流行。2、經(jīng)食物傳播：食品在加工、儲存、制作、運輸?shù)匿N售等過程中被腸道傳染病的病原體污染，可造成局部的流行和暴發(fā)流行。3、接觸傳播：通過握手、使用或接觸過病人的衣物、文具、門具、門把手、人民幣等造成病原體傳播。4、昆蟲傳播：有些腸道傳染病的病原體可在蒼蠅、蟑螂等媒介昆蟲體內(nèi)存活一段時間，并隨著昆蟲的活動進行傳播。病原體甲類傳染?。夯魜y；乙類傳染?。簜透眰⒓毦院桶⒚装托粤〖?、脊髓灰質(zhì)炎、甲、戊型病

3、毒性肝炎；丙類傳染?。撼魜y、傷寒副傷寒、細菌性和阿米巴性痢疾以外的細菌、病毒、原蟲等病原體引起的腸道感染。二、幾種常見致病菌的實驗室檢測 （一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（二）細菌性痢疾（志賀氏菌）（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）由傷寒沙門菌和甲、乙、丙型副傷寒沙門菌引起的急性腸道傳染病。參照傷寒和副傷寒診斷標(biāo)準(zhǔn)（280-2008 ）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）1 診斷依據(jù) 1.1 流行病學(xué)史 1.1.1 病前 30d 內(nèi)曾到過或生活在傷寒、副傷寒流行區(qū)。 1.1.2 有傷寒、副傷寒患者、帶菌者密切接觸史。 1.1.3 有喝生水等不良衛(wèi)生習(xí)慣者。1.2 臨床表現(xiàn)

4、 1.2.1 不明原因持續(xù)發(fā)熱。 1.2.2 特殊中毒面容（表情淡漠，呆滯），相對緩脈，皮膚玫瑰疹，肝脾腫大。1.3 實驗室檢測 1.3.1 嗜酸性粒細胞減少或消失、白細胞總數(shù)正?；虻拖拢?1.3.2 肥達反應(yīng)“O”抗體凝集效價1：80， “H”抗體凝集效價1：160者；但在高發(fā)地區(qū)，許多正常人因既往感染亦可有較高滴度，此時最好首先檢查當(dāng)?shù)厝巳好庖咚?，確定正常值； 1.3.3 恢復(fù)期血清中特異性抗體效價較急性期血清特異性抗體效價增高 4 倍以上； 1.3.4 從血、骨髓、糞便、膽汁中任一種標(biāo)本分離到傷寒沙門菌或副傷寒沙門菌。2 診斷帶菌者 ：無任何臨床表現(xiàn)、從糞便中分離到傷寒沙門菌或副傷寒沙

5、門菌。疑似病例：1.1任何一項+1.2.1或1.2.1+1.2.2 任何一項體征或1.2.1+1.3.1臨床診斷病例：1.2.1+1.2.2 中任何一項體征+（1.3.1或1.3.2）確診病例：1.2.1+1.3.3或1.2.1+1.3.4（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）3 實驗室病原學(xué)檢查標(biāo)本采集及送檢分離培養(yǎng)形態(tài)及染色 生化反應(yīng) 血清學(xué)及確定鑒定 （一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）標(biāo)本采集及送檢：發(fā)病1-2周取血，3-4周取糞便(新鮮糞便冷藏8h內(nèi)送檢，轉(zhuǎn)移至卡里-布萊爾運送培養(yǎng)基的糞便試子冷藏24h內(nèi)送檢)，全程可取骨髓（已用抗生素，其他標(biāo)本陰性）作細菌培養(yǎng)。整個病程中應(yīng)分期采集2-3份標(biāo)本作

6、血清抗體檢測。轉(zhuǎn)移至運送培養(yǎng)基的糞便試子分離培養(yǎng)時應(yīng)輕攪混合標(biāo)本（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）分離培養(yǎng) 血液：按1：10加入血液增菌培養(yǎng)基或葡萄糖膽鹽肉湯，361孵育，分別于1d、2d、7d轉(zhuǎn)種血平板或營養(yǎng)瓊脂平板，361培養(yǎng)24-48h 骨髓：直接或增菌分離 糞便：直接接種或于亞硒酸鹽增菌培養(yǎng)基361增菌18-24h后接種于、或沙門顯色等培養(yǎng)基361培養(yǎng)18-24h（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）形態(tài)及染色：在和培養(yǎng)基上形成中等大小、無色透明、表面光滑、邊緣整齊的菌落部分產(chǎn)H2S菌株形成中心黑褐色的菌落革蘭陰性桿菌周身鞭毛，無莢膜、芽胞 E.coli（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）生化反應(yīng)：純化

7、后挑取可疑菌落接種、等361培養(yǎng)18-24h觀察生化反應(yīng)進行初篩。發(fā)酵葡萄糖、不發(fā)酵乳糖 ，除傷寒沙門菌不產(chǎn)氣外，其余菌產(chǎn)生氣體，動力陽性、吲哚陰性、不水解尿素，其生化反應(yīng)模式為： G H2S(+)；生化模式為： （一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）血清學(xué)鑒定：凡生化反應(yīng)附合沙門菌者，均應(yīng)用血清學(xué)凝集試驗確定相應(yīng)群和生物型，基本原則：12 群多價O血清 多價凝集后再用每個O血清群的單價因子血清定群后用H因子檢查第1相和第2相H抗原單價O因子血清不凝集，應(yīng)排除抗原(制成菌懸液100 水浴30破壞抗原后再進行血清凝集)（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）確定鑒定：腸桿菌科細菌各屬

8、之間，生化有類似，抗原有交叉反應(yīng)和不典型菌株的出現(xiàn)，需進一步做系統(tǒng)生化反應(yīng)鑒定，可選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)鑒定。（二）細菌性痢疾（志賀氏菌） 簡稱菌痢，是由志賀菌屬細菌引起的腸道傳染病。細菌性和阿米巴性痢疾診斷標(biāo)準(zhǔn)（287-2008）分類： A群：痢疾志賀菌() B群：福氏志賀菌() C群：鮑氏志賀菌() D群：宋內(nèi)志賀菌()（二）細菌性痢疾（志賀氏菌）1 診斷依據(jù)1.1 流行病學(xué)史：患者有不潔飲食和（或）及菌痢患者接觸史。1.2臨床表現(xiàn) 1.2.1 潛伏期：數(shù)小時至 7d，一般 1d3d。 1.2.2 臨床癥狀和體征：起病急驟，畏寒、寒戰(zhàn)伴高熱，繼以腹痛、腹瀉和里急后重，

9、每天排便 10 次20 次，但量不多，呈膿血便，并有中度全身中毒癥狀。重癥患者伴有驚厥、頭痛、全身肌肉酸痛，也可引起脫水和電解質(zhì)紊亂，可有左下腹壓痛伴腸鳴音亢進。 1.2.3 臨床分型1.3 實驗室檢測 1.3.1 糞便常規(guī)檢查，白細胞或膿細胞15（400 倍） ，可見紅細胞、吞噬細胞。 1.3.2 病原學(xué)檢查，糞便培養(yǎng)志賀菌陽性。2 診斷 2.1 疑似病例：腹瀉，有膿血便或黏液便或水樣便或稀便，伴有里急后重癥狀，尚未確定其他原因引起的腹瀉者。 2.2 臨床診斷病例：1.1+1.2+1.3.1+排除其他原因引起之腹瀉。 2.3確診病例：臨床診斷病例+1.3.2（二）細菌性痢疾（志賀氏菌）3 實

10、驗室病原學(xué)檢查標(biāo)本采集及送檢分離培養(yǎng)形態(tài)及染色 生化反應(yīng) 血清學(xué)及確定鑒定 （二）細菌性痢疾（志賀氏菌）標(biāo)本采集及分離：盡量在抗生素使用前，采集血液（懷疑菌血癥）或新鮮糞便膿血、粘液部分(新鮮糞便置于清潔、干燥、無肥皂或消毒液殘留的容器中冷藏條件下8h內(nèi)送檢或轉(zhuǎn)移至卡里-布萊爾運送培養(yǎng)基的糞便試子冷藏24h內(nèi)送檢)。分離培養(yǎng)： 血液：按1：10加入血液增菌培養(yǎng)基，361孵育，分別于1d、2d、7d轉(zhuǎn)種血平板或營養(yǎng)瓊脂平板，361培養(yǎng)24-48h，觀察結(jié)果。 糞便：直接劃線接種于或（木糖賴氨酸去氧膽酸鈉）培養(yǎng)基361培養(yǎng)18-24h。 不建議使用，因其可抑制痢疾志賀氏菌A1型生長，漏檢（二）細菌

11、性痢疾（志賀氏菌）形態(tài)及染色：革蘭陰性短小桿菌，無鞭毛、芽胞，有菌毛。在上呈不發(fā)酵乳糖的無色、透明、光滑、濕潤、圓形、邊緣整齊的小菌落；在上呈粉紅色至無色，半透明、光滑、濕潤、圓形、邊緣整齊或不齊的小菌落 （二）細菌性痢疾（志賀氏菌）生化反應(yīng)：純化后挑取可疑菌落接種、等361培養(yǎng)16-20h觀察生化反應(yīng)。 生化反應(yīng)模式為： H2S(-) ；： （二）細菌性痢疾（志賀氏菌）血清學(xué)凝集：凡生化反應(yīng)附合志賀菌者，均應(yīng)用血清學(xué)凝集試驗進行鑒定分型 無菌挑取表面菌落，用志賀氏菌四種多價抗血清凝集； 凝集者，再取痢疾志賀氏I、痢疾志賀氏、宋內(nèi)志賀氏、福氏志賀氏抗血清凝集； 不凝者排除k抗原(制成菌懸液10

12、0 水浴30后再進行血清凝集)后，取鮑氏志賀氏菌抗血清凝集； 若及某型血清發(fā)生凝集，應(yīng)進一步作分型鑒定。確定鑒定：選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)進一步做系統(tǒng)生化反應(yīng)鑒定。（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）感染性腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn)（271-2007）感染性腹瀉：除霍亂、傷寒副傷寒、細菌性和阿米巴性痢疾以外的細菌、病毒、原蟲等病原體引起的、以腹瀉為主要臨床特征的一組腸道傳染病。主要常見的傷寒、副傷寒以外的沙門氏菌、致瀉性大腸埃希菌（腸毒素型大腸埃希菌、腸致病型大腸埃希菌、腸侵襲型大腸埃希菌、腸出血型大腸埃希菌、腸凝聚型大腸埃希菌）、副溶血性弧菌、彎曲菌、小腸結(jié)腸耶爾森菌、輪狀病毒、隱孢子蟲等

13、（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）副溶血性弧菌（ ）是一種革蘭氏陰性，無芽胞，呈弧狀、桿狀、絲狀等多種形狀的嗜鹽性細菌。進食含有該菌的食物可致食物中毒，臨床上以急性起病、腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便為主要癥狀。傳染源主要為帶菌的海產(chǎn)品，近海淡水魚帶菌較高。（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）實驗室病原學(xué)檢查標(biāo)本采集及送檢分離培養(yǎng)形態(tài)及染色 生化反應(yīng) 確定鑒定 （三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）標(biāo)本采集及送檢：急性期、用藥前采集新鮮糞便，運送時間超過2h者應(yīng)放入運送培養(yǎng)基室溫下24h內(nèi)送檢，或?qū)⒓S便置于清潔、干燥、無肥皂或消毒液殘留的容器中室溫條件下8h運送。分離培養(yǎng)：新鮮糞便或肛拭子直接劃線接種或于3%氯化鈉堿性胨水361增菌8-16h后接種于弧菌顯色或硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖瓊脂 ()等培養(yǎng)基361培養(yǎng)18-24h。（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）形態(tài)及染色 ：在上因不發(fā)酵蔗糖呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落，用接種環(huán)輕觸有類似口香糖質(zhì)感革蘭氏陰性，無芽胞，呈弧狀、桿狀、絲狀等多種形狀（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）生化反應(yīng)： 純化后挑取可以菌落接種、等361培養(yǎng)18-24h觀察生化反應(yīng)初篩。 ： G H2S(