急性毒性作用以及其試驗(yàn)方法

1、關(guān)于急性毒性作用及其試驗(yàn)方法第一張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月一、概念和試驗(yàn)?zāi)康? 急性毒性（acute toxicity）概念 指機(jī)體（人或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物）一次，或24小時(shí)內(nèi)多次接觸外來化合物所引起的中毒效應(yīng)（包括死亡）。 2 急性毒性試驗(yàn) 是研究一次或24小時(shí)內(nèi)多次給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被檢化學(xué)物后，觀察在短期內(nèi)（一般7天）引起動(dòng)物毒性表現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)。第二張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月3 急性毒性試驗(yàn)的目的 (1) 測(cè)定受試物對(duì)一種或幾種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的半數(shù)致死量（LD50），以初步估計(jì)其對(duì)人類毒 害的危險(xiǎn)性。 (2) 了解受試物的毒性強(qiáng)度、性質(zhì)和可能的靶器官，闡明受試物急性毒性的劑量反應(yīng)關(guān)

2、系。 (3) 為進(jìn)一步進(jìn)行亞慢性和慢性試驗(yàn)以及其它特殊毒性試驗(yàn)的劑量設(shè)計(jì)和毒性判定指標(biāo)的選擇提供依據(jù)第三張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇 動(dòng)物種類 一般常用大鼠或小鼠；如果同時(shí)用兩種動(dòng)物，其中一種為非嚙齒類如狗、猴等更為理想 2動(dòng)物年齡 動(dòng)物年齡不易過老過幼，一般應(yīng)選用初成年者， 大、小鼠為出生后23個(gè)月左右，體重一般分別為200g（180240g）和20g（1825g）左右； 狗為生后一年左右。 所有動(dòng)物進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后，至少飼養(yǎng)觀察一周，選取其健康動(dòng)物，體重相差應(yīng)在10以內(nèi)，動(dòng)物性別除另有要求，雌雄分別試驗(yàn)外，一般常雌雄各半。 第四張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于202

3、2年6月三、給予被檢物的途徑和方法 原則上要求與人類攝入該物質(zhì)的實(shí)際途徑相同，對(duì)食品中化學(xué)物質(zhì)來說，主要是經(jīng)口給予，在急性毒性試驗(yàn)中，多采用灌胃法。 四、觀察指標(biāo)和時(shí)間 1.觀察指標(biāo) 在測(cè)定LD50中，主要觀察指標(biāo)：動(dòng)物死亡數(shù)目,動(dòng)物主要中毒癥狀和開始出現(xiàn)的時(shí)間死亡的時(shí)間也要記錄。 第五張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月器官系統(tǒng) 觀察項(xiàng)目 中毒后一般表現(xiàn) 中樞神經(jīng)系統(tǒng) 和軀體運(yùn)動(dòng)系統(tǒng) 行為 姿態(tài)改變、叫聲異常、不安、呆臥少動(dòng) 動(dòng)作 痙攣、震顫、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、麻痹、驚厥、強(qiáng)制性動(dòng)作 對(duì)刺激反 應(yīng)性 易興奮、知覺過敏或缺乏知覺 肌肉張力 強(qiáng)直、馳緩 血液循環(huán)系統(tǒng) 心區(qū)觸診 震顫、心動(dòng)過速或過緩

4、、心律不齊、心搏過強(qiáng)或減弱 腸胃系統(tǒng) 腹形 膨脹、凹陷、嘔吐、腹瀉、便秘 糞便硬度 顏色 不成形、黑色或灰色 嚙齒類動(dòng)物中毒表現(xiàn)觀察項(xiàng)目 第六張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月生殖泌尿系統(tǒng) 陰戶、乳腺 膨脹、分泌增多 陰莖 脫垂 會(huì)陰部 被糞便污穢 皮膚和毛發(fā) 顏色、張力 發(fā)紅、褶皺、松弛、出現(xiàn)皮疹、豎毛 粘膜 結(jié)膜、口腔 分泌物增多、充血、蒼白、紫紺、黃疸 眼 眼瞼 上瞼下垂 眼球 眼球突出、眼球震顫 透明度 混濁 其它 直腸、腳爪部的皮膚溫度 降低或升高 一般情況 姿勢(shì)正常、消瘦 第七張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月2 觀察時(shí)間 1）一般觀察一周即可。因急性毒性實(shí)驗(yàn)中，動(dòng)

5、物的中毒癥狀以及死亡，一般多出現(xiàn)在給予被檢物后2448h以內(nèi)。2）如中毒反應(yīng)出現(xiàn)較遲，主要在48h或34天后出現(xiàn)，則觀察期也必須相應(yīng)延長(zhǎng)至2周甚至4周，特別是4870h內(nèi)。 第八張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 急性毒性評(píng)價(jià)第九張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月一、 半數(shù)致死量和急性毒作用帶半數(shù)致死量 1）LD50值受多種因素影響： 包括：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的物種、品系、性別、年齡、受試化合物濃度及稀釋溶液的性質(zhì)、喂飼條件以及試驗(yàn)者的熟練程度等。2）存在一定的取樣誤差3）LD50是一個(gè)點(diǎn)的界限，所以是一個(gè)質(zhì)反應(yīng)，而不能代表受試物的急性特征。 第十張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于202

6、2年6月2 急性毒作用帶（acute effect zone, Zac）： 指化合物的毒性上限與毒性下限的比值，也就是引起試驗(yàn)動(dòng)物的死亡之劑量與最低劑量的劑量范圍的寬窄。通常以LD50代表毒性上限，急性閾劑量（閾濃度）代表毒性下限，其公式為： Zac=LD50LimacZac值的大小可反應(yīng)急性閾劑量距離LD50的寬窄。Zac值越大，表明化合物引起急性死亡的危險(xiǎn)越小，反之表明引起急性死亡的危險(xiǎn)性越大。 二、急性毒性分級(jí) 目前，我國(guó)食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序中，借用國(guó)際上的六級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。第十一張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月急性毒性分級(jí)大鼠經(jīng)口LD50(mg/Kg體重）大約相當(dāng)于體重70Kg人

7、的致死劑量幾種化學(xué)物質(zhì)急性毒性舉例6級(jí)，極毒 1 稍嘗，7滴肉毒桿菌毒素（致死量3050mg人）5級(jí)，劇毒1507滴1茶匙對(duì)硫磷（615） 西力生（30） 磷化鋅（47）4級(jí)，中等毒51500 1茶匙35g倍硫磷（250395）氯丹（57） 六六六（125）敵百蟲（450）3級(jí)，低毒 5015000 35350g二氯乙烷（770） 苯甲酸鈉（2000） 賽力散（2080）棉草枯（5000）2級(jí)，實(shí)際無毒500115000 3501050g化森鋅（5200）驅(qū)蚊酯（8200）1級(jí)，無毒 15000 1050g福美鐵（17000） 第十二張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié) LD50計(jì)

8、算方法 第十三張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月一、寇氏法（也叫平均劑量法）1 原理要求各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)相等，相鄰組劑量成等比級(jí)數(shù)，若滿足此要求，則受試物劑量的對(duì)數(shù)與死亡率成比例關(guān)系要求各劑量大致有一半組所產(chǎn)生的反應(yīng)率在1050之間，另一半在5090之間，最好還有反應(yīng)率在0及100的組，故需預(yù)試。 2 劑量分組小動(dòng)物常設(shè)510個(gè)劑量組，每組610只。首先確定最高、最低量?jī)蓚€(gè)組，分別可使動(dòng)物90和10死亡。預(yù)試時(shí)按2倍或3倍遞增劑量，每次三個(gè)劑量水平（如200，400，800mgKg或100、300、900mgKg）測(cè)試動(dòng)物死亡率。 第十四張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月3 計(jì)算

9、公式： 當(dāng)p10，pk1，上式可簡(jiǎn)化為 其中，xk:最高劑量的對(duì)數(shù)； d：相鄰兩組劑量之比的對(duì)數(shù)； pi：各組死亡率； i：組數(shù)； SElgLD50：標(biāo)準(zhǔn)誤差對(duì)數(shù)； ni：各組動(dòng)物數(shù)。 LD50的95%可信限為： lg1（lgLD501.96SELD50） SE lg LD50 = dpi (1- pi )/ni 1/2第十五張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月三、霍恩法 （ 也叫劑量遞增法或流動(dòng)平均法）1 特點(diǎn)動(dòng)物數(shù)量固定，劑量也固定，因而簡(jiǎn)單易行使用動(dòng)物數(shù)量較少但可信限范圍較大，不夠精確2 劑量分組 一般分四或五組，每組四或五只動(dòng)物，各組中雌鼠與雄鼠數(shù)應(yīng)分別相等，該方法對(duì)劑量系列要求嚴(yán)格，主要有兩種：第十六張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月1）劑量遞增公比為： 即， 1.002.154.64 10t t=0,1,2，32）劑量遞增公比為： 即， 1.003.16 10t t=0,1,2，33 預(yù)試（1） 以10，100，1000mgKg劑量，各用23只小鼠灌胃。根據(jù)24h內(nèi)所產(chǎn)生的效應(yīng)和反應(yīng)來初步判斷毒性。 （2） 以215mgKg劑量用5只動(dòng)物灌胃，以24h內(nèi)產(chǎn)生的效應(yīng)和反應(yīng)來初步判斷毒性。 第十