血培養(yǎng)注意事項

1、血培養(yǎng)注意事項臨床微生物學(xué)的任務(wù)WHO對臨床微生物實驗室提出三項指導(dǎo)性方針（1）臨床微生物實驗室盡可能把目標(biāo)集中在快速診斷方面；（2）顯微鏡檢查對建立快速的初步診斷具有很大價值；（3）實驗室人員必須主動與臨床結(jié)合，將實驗室數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為臨床有用的信息。標(biāo)本采集和處理的原則 發(fā)現(xiàn)感染應(yīng)及時采集微生物標(biāo)本作病原學(xué)檢查 最好是病程早期、急性期或癥狀典型時，而且必須在使用抗生素或其他抗菌藥物之前采集標(biāo)本采集時應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，采集的標(biāo)本應(yīng)無外源性污染，減少或避免機(jī)體正常菌群及其它雜菌污染 采集的標(biāo)本均應(yīng)盛于無菌容器內(nèi)要收集足夠量的標(biāo)本 標(biāo)本采集后應(yīng)立即送至細(xì)菌室重視無菌部位的標(biāo)本：血培養(yǎng)分析當(dāng)前血培養(yǎng)存在的

2、問題：報告不及時陽性率低采樣時污染培養(yǎng)一次（單部位）作為診斷依據(jù)采血量不夠（與培養(yǎng)基比例不正確）采樣時間不正確血液培養(yǎng)操作規(guī)范 采集血培養(yǎng)的重要指征 1. 發(fā)熱（38）或低溫（36）。2 寒戰(zhàn)。3 白細(xì)胞增多（10109/L，特別有“核左移”未成熟的或帶狀的白細(xì)胞增多)。4 粒細(xì)胞減少（成熟的多核白細(xì)胞1109/L）。5 血小板減少。6 皮膚粘膜出血。7 昏迷。8 多器官衰竭，血壓降低，CRP 升高及呼吸快，或同時具備上述幾種體征而臨床可疑菌血癥應(yīng)采血培養(yǎng)。新生兒菌血癥，應(yīng)增加尿液和腦脊液培養(yǎng)。對入院危重感染患者未進(jìn)行系統(tǒng)性抗菌藥物治療之前，應(yīng)及時采集血培養(yǎng)。血培養(yǎng)檢測消毒程序 皮膚消毒程序為

3、防止皮膚寄生菌污染，可使用消毒劑對皮膚進(jìn)行嚴(yán)格仔細(xì)的消毒處理，最大限度地減低皮膚污染。 用70%酒精擦拭靜脈穿刺部位待30s以上。 然后用棉簽（12%碘酊或10%碘伏）消毒皮膚，從穿刺點向外以2cm直徑畫圈進(jìn)行消毒。最后用70%酒精脫碘。對碘過敏的患者，只能用70%酒精消毒，消毒60s，待穿刺部位酒精揮發(fā)干燥后穿刺采血。不允許在消毒后按壓靜脈，除非帶有無菌手套。 培養(yǎng)瓶消毒程序 1 用70%酒精消毒血培養(yǎng)瓶橡皮塞，作用60s。2 用無菌紗布或無菌棉簽清除橡皮塞表面剩余的酒精，然后注入血液。皮膚消毒和污染的預(yù)防碘酊、次氯酸和洗必泰的消毒效果要好于碘伏碘酊和洗必泰的消毒效果大致相當(dāng)?shù)怍饔?0秒；

4、碘伏作用1.52分鐘；洗必泰的作用時間和碘酊一樣，但是由于沒有伴隨的過敏反應(yīng)，所以不必擦去，但不能被用于小于2個月的嬰兒皮膚消毒。血培養(yǎng)檢測采集和運送 采血量 嬰幼兒和兒童，一般靜脈采血15ml，采血量不超過患者總血量的1；成人采血量是810ml，2030ml最合適，血液和肉湯的比一般為15至110。血培養(yǎng)的份數(shù)和采血時間一次靜脈采血注入到多個培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單次血培養(yǎng)。建議常規(guī)的血培養(yǎng)應(yīng)包括一個需氧血培養(yǎng)瓶和一個厭氧血培養(yǎng)瓶。對間歇性菌血癥，用于培養(yǎng)的血液應(yīng)在估計寒戰(zhàn)或體溫高峰到來之前1h采集，或于寒戰(zhàn)或發(fā)燒后1h進(jìn)行。 兒童血培養(yǎng)不同于成人血培養(yǎng)，由于厭氧菌感染極少發(fā)生在兒童病人，因此建議只

5、采用需氧瓶。厭氧培養(yǎng)只考慮針對特殊的高危群體。皮膚消毒參照成人的方法，除新生兒以外。兒童的采血量為不超過總血容量的1%。樣本拒收標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)簽錯誤或在血培養(yǎng)瓶上未貼標(biāo)簽破損的或滲漏的血培養(yǎng)瓶血液凝固的血培養(yǎng)瓶含有抗凝劑（除了SPS)的血培養(yǎng)瓶血培養(yǎng)檢測結(jié)果的報告程序培養(yǎng)48h后，對陰性血培養(yǎng)結(jié)果在最短的時間內(nèi)發(fā)出初步（中間）報告。血培養(yǎng)陽性，立即進(jìn)行革蘭染色。染色結(jié)果口頭報告（電話通知）給患者的主治醫(yī)生。 CLIS推薦的抗生素敏感試驗沒有血培養(yǎng)直接敏感試驗法，但根據(jù)革蘭染色可以靈活地選擇抗生素進(jìn)行直接抗生素藥敏試驗，供臨床參考使用。 緊急口頭報告任何血培養(yǎng)的檢測結(jié)果都會對患者的治療造成重要的影響初步

6、的實驗室結(jié)果（無論是涂片或培養(yǎng)），只要證明為血培養(yǎng)陽性，就必須認(rèn)為是緊急狀況馬上向臨床進(jìn)行口頭報告和溝通緊急口頭報告一定要在最短時間內(nèi)報告（60分鐘之內(nèi)）口頭報告記錄包含以下內(nèi)容：報告必須有報告者的全名和臨床負(fù)責(zé)醫(yī)生聯(lián)系報告的時間（無論成功或不成功）所聯(lián)系的臨床負(fù)責(zé)醫(yī)生的全名報告異常結(jié)果并強(qiáng)調(diào)是有緊急價值確認(rèn)臨床醫(yī)生收到口頭報告并反饋處理結(jié)果其他須作緊急口頭報告的情況：標(biāo)本不符合標(biāo)準(zhǔn)，需要重新采血初步報告結(jié)果和最終結(jié)果不吻合必須在書面報告上注明并提供詳情 CLSI要求每次采集2-3套標(biāo)本,每套應(yīng)包括一個需氧培養(yǎng)瓶,一個厭氧培養(yǎng)瓶。 成年病人不能只采1瓶血培養(yǎng)標(biāo)本，采血量不足和只做1套血培養(yǎng)所得

7、的結(jié)果是很難正確解釋的。Cockrill2004年報告:163位病人,血培養(yǎng)儀采血套數(shù)及血量1套(20ml)2套(40ml)3套(60ml)檢出率65%80%96% 血培養(yǎng)的套數(shù)一套血培養(yǎng)為何選擇1個需氧+1個厭氧的組合?研究表明：用需氧瓶加厭氧瓶的組合檢測出的葡萄球菌，腸桿菌科菌中某些菌和苛氧菌比一對需氧瓶多。如果血培養(yǎng)只做需氧瓶培養(yǎng),漏檢的不僅是嚴(yán)格厭氧菌,也會影響兼性厭氧菌的分離率及報告陽性結(jié)果的時間。只做需氧菌不做厭氧菌培養(yǎng),將有19%的菌株不能發(fā)現(xiàn),另有5%的血培養(yǎng)延遲1天報告陽性結(jié)果。2001年Khanna數(shù)據(jù)7072份血培養(yǎng)，640份陽性，陽性率為9組別陽性率需氧瓶厭氧瓶均報陽5

8、5僅需氧瓶報陽26僅厭氧瓶報陽19Eur J Clin Microbiol Infect DDis, 2001,20:217-219儲從家數(shù)據(jù)（2000年）組別陽性率需氧瓶厭氧瓶均報陽50份僅需氧瓶報陽7份僅厭氧瓶報陽23份591份血培養(yǎng)，81份陽性，陽性率為中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2000，23：285陰性培養(yǎng)結(jié)果分析抗生素影響苛養(yǎng)菌特殊病原體檢驗技術(shù)受限采樣運送不當(dāng)非感染性疾病少見細(xì)菌和苛養(yǎng)菌自動血培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)5天可支持苛養(yǎng)菌的生長，但不能培養(yǎng)的菌（如柯克斯體、立克次體、Tropheryma等）需用多種分子生物學(xué)技術(shù)檢出。乏養(yǎng)菌（Abiotrophia）和粒座菌(Granulicatella)。

9、常在自動血培養(yǎng)系統(tǒng)溫育2天后出現(xiàn)陽性。生長需要VB6和胱氨酸。用金黃色葡萄球菌菌落旁的衛(wèi)星試驗呈陽性。轉(zhuǎn)種要用巧克力平皿。巴通體（Bartonella）。建議用溶血-離心法培養(yǎng)，接種于新制備的富含營養(yǎng)的巧克力平皿，溫育于二氧化碳環(huán)境，常需7天。布氏桿菌。最好用雙相培養(yǎng)基。大部在3天出現(xiàn)陽性、有時需7天。彎曲菌。轉(zhuǎn)種時需微嗜氧環(huán)境。溫育至少48h才可見菌落。弗郎西絲菌。轉(zhuǎn)種需用含胱氨酸的培養(yǎng)基（巧克力平皿或大豆-酪蛋白湯瓊脂等）。溫育時間要長，有時需10天。HACEK菌群。有些菌株需1周出現(xiàn)陽性，故溫育應(yīng)超過5天。螺桿菌。常需5天出現(xiàn)陽性，轉(zhuǎn)種需微嗜氧環(huán)境和營養(yǎng)豐富的血平皿。軍團(tuán)菌。常需溫育5天

10、出現(xiàn)陽性。轉(zhuǎn)種需BCYE(緩沖碳末酵母浸液瓊脂)培養(yǎng)基，溫育48h才可見菌落。螺菌。血中極少見。支原體。肺炎和人型支原體可在自動血培養(yǎng)系統(tǒng)中緩慢生長。轉(zhuǎn)種要用支原體培養(yǎng)基（SP4葡萄糖瓊脂，）特別注意血培養(yǎng)的關(guān)鍵是防止皮膚寄生菌或環(huán)境引起的污染。感染性心內(nèi)膜炎，可能由皮膚寄生的微生物引起（例如：表皮葡萄球菌或棒桿菌屬）。不同部位采集血樣可選擇左、右手臂或頸部，避免通過靜脈置管直接采集血樣。切忌在靜滴抗菌藥物的靜脈處采取血標(biāo)本。標(biāo)本采集量少，兒童少于1ml，成人少于3ml，血培養(yǎng)份數(shù)不夠，可明顯降低血培養(yǎng)的陽性率。采血時機(jī)不合適，未抓住菌血癥時期，或在剛使用抗生素不久，均降低了血培養(yǎng)的陽性率。采血最好在：體溫升高前半小時，使用抗生素前，或停用抗生素24h。特別提醒血培養(yǎng)瓶存放于冰箱，取出后立即采血進(jìn)行培養(yǎng)或血液標(biāo)本采集后放置于冰箱，過低的溫度均抑制細(xì)菌生長。 血液標(biāo)本采集后，放于機(jī)外時間過長，細(xì)菌生長過度已達(dá)衰老期，會降低陽性率。 標(biāo)本消毒時消毒酒精未完全揮發(fā)，會降低陽性率。 所用培養(yǎng)瓶必須仔細(xì)檢查有無變色或混濁。對兩次不同部位血