※※檢測(cè)系統(tǒng)定量項(xiàng)目性能評(píng)價(jià)

1、檢測(cè)系統(tǒng)定量項(xiàng)目性能評(píng)價(jià)1檢測(cè)系統(tǒng)（Test System）？檢測(cè)系統(tǒng)：包括測(cè)量過程的所有因素，如儀器、樣本、人員、試劑、輔助材料和操作等，也包括樣本類型、測(cè)試溫度、濕度等。人機(jī)料法環(huán)2評(píng)價(jià)：確認(rèn)&驗(yàn)證確認(rèn)（Validation）方法建立者或者實(shí)驗(yàn)室修改了CFDA批準(zhǔn)的方法。Validation - A defined process by which a laboratory confirms that a laboratory developed or modified FDA-cleared/approved test performs as intended or claimed. (

2、CAP All Common Checklist)驗(yàn)證（Verification ）CFDA批準(zhǔn)的方法，實(shí)驗(yàn)室未做修改，嚴(yán)格按照供應(yīng)商說明書執(zhí)行。Verification - The process by which a laboratory determines that an FDA-cleared/approved test performs according to the specifications set forth by the manufacturer. (CAP All Common Checklist)3何為修改？ 樣本處理流程 樣本或試劑稀釋倍數(shù) 樣本或試劑用量 校準(zhǔn)品

3、（廠家有賦值說明除外） 反應(yīng)步驟檢測(cè)系統(tǒng) 底物或結(jié)合物等等樣本類型 如血漿尿液預(yù)期用途：篩查改診斷，定性改定量孵育溫度或時(shí)間4綱要為什么要做（Why）？ 要做些什么（What）？什么時(shí)候做（When）？ 誰來做（Who）？4123怎么做（How）？551病人安全需要國家法律、法規(guī)和行業(yè)規(guī)范要求：醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法(2006年衛(wèi)生部)，第三十條醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)將尚未開展室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目與其他臨床實(shí)驗(yàn)室的同類項(xiàng)目進(jìn)行比對(duì)，或者用其他方法驗(yàn)證其結(jié)果的可靠性。臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目比對(duì)有困難時(shí)，醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)對(duì)方法學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括準(zhǔn)確性、精密度、特異性、線性范圍、穩(wěn)定性、抗干擾性

4、、參考范圍等，并有質(zhì)量保證措施。體外診斷試劑分析性能評(píng)估系列指導(dǎo)原則（征求意見稿）（2009年國家食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心）認(rèn)可準(zhǔn)則、認(rèn)可條款要求：CNAS-CL02 ：2008 5.5.2，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)只用確認(rèn)過的程序證實(shí)所用檢驗(yàn)程序適合其預(yù)期用途，證實(shí)應(yīng)盡量充分以滿足給定用途或滿足某領(lǐng)域應(yīng)用的需求。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)記錄證實(shí)所得的結(jié)果及使用的程序。為什么要做（Why）？ 236美國Clia驗(yàn)證：準(zhǔn)確度精密度可報(bào)告范圍參考區(qū)間（相似的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)和地理學(xué)）確認(rèn)除上述參數(shù)外，還需：干擾最低檢測(cè)限建立參考區(qū)間出自：Clia88-CFR-2012（493.1253）要做些什么（What）？27CAP

5、要做些什么（What）？28ISO15189驗(yàn)證或確認(rèn)包括，但不限于以下內(nèi)容：正確度精密度分析測(cè)量范圍（線性范圍）可報(bào)告范圍檢測(cè)限參考區(qū)間確認(rèn)比驗(yàn)證費(fèi)時(shí)、費(fèi)力和費(fèi)錢要做些什么（What）？29新增/更改項(xiàng)目編寫相應(yīng)操作規(guī)程與評(píng)價(jià)方案工作人員熟悉規(guī)程與評(píng)價(jià)方案日常檢測(cè)，出具報(bào)告準(zhǔn)備性能評(píng)價(jià)病人檢測(cè) 新增項(xiàng)目檢測(cè)系統(tǒng)更改某項(xiàng)目停止檢測(cè)一段時(shí)間，重新檢測(cè)病人儀器挪動(dòng)位置關(guān)鍵部位維修 確認(rèn)或驗(yàn)證什么時(shí)候做（When）？ 310 實(shí)驗(yàn)室工作人員方案確立：包括標(biāo)本選擇測(cè)定重復(fù)次數(shù)時(shí)間跨度方案實(shí)施數(shù)據(jù)處理評(píng)價(jià)結(jié)論 誰來做（Who）？4學(xué)習(xí)機(jī)會(huì)：熟練新系統(tǒng)更新新知識(shí)11依據(jù)來源：CLSI（臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)

6、）網(wǎng)址：標(biāo)準(zhǔn)：精密度誰來做（Who）？4怎么做（How）？512標(biāo)本來源：病人血清/血漿（來源：實(shí)驗(yàn)室）；基質(zhì)合適的商用質(zhì)控品。濃度：高低2個(gè)濃度（醫(yī)學(xué)決定水平）；3濃度（2個(gè)濃度的精密度有顯著差異時(shí)）。測(cè)定次數(shù)：2次/批；測(cè)定天數(shù)：20天；離群點(diǎn)數(shù)據(jù)：以最初的5天數(shù)據(jù)為初步精密度（SD）,4SD的剔除，并補(bǔ)足。精密度-EP5 A2方案13精密度-EP5 A2舉例14 批內(nèi)不精密度： （I：天數(shù)） 室內(nèi)總不精密度： （T：總自由度）精密度-EP5 A2舉例15 允許SD數(shù)值為廠家聲明或者該方法的質(zhì)量要求指標(biāo)。精密度-EP5 A2舉例16標(biāo)本：2個(gè)濃度水平；測(cè)定次數(shù)： 3次/批；測(cè)定時(shí)長(zhǎng)：5天；

7、離群點(diǎn)剔除：質(zhì)控失敗或操作失敗的數(shù)據(jù)剔除，并補(bǔ)足；供應(yīng)商聲明：若供應(yīng)商指出其精密度是在多個(gè)校準(zhǔn)周期得出的，則實(shí)驗(yàn)方案應(yīng)類似。精密度-EP15 方案（驗(yàn)證）17數(shù)據(jù)記錄與統(tǒng)計(jì)精密度- EP15應(yīng)用18數(shù)據(jù)記錄與統(tǒng)計(jì) 根據(jù)值和濃度水平（2個(gè)水平）查卡方表得C值。精密度- EP15 A2應(yīng)用sr與sl分別相應(yīng)的驗(yàn)證值：驗(yàn)證通過19標(biāo)本來源：質(zhì)控物（基質(zhì)與臨床標(biāo)本相似）標(biāo)準(zhǔn)液病人標(biāo)本混合物濃度：高低2個(gè)水平（考慮醫(yī)學(xué)決定值）試驗(yàn)次數(shù)與周期：批內(nèi)20次日間20天數(shù)據(jù)處理：均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)精密度- Westgard20批內(nèi)不精密度要求1/4TEa日間不精密度要求1/3TEa精密度- Westgard

8、舉例21方法變更最常用的試驗(yàn)方案前提：方法具有可比性，廠家有偏倚聲明標(biāo)本來源：新鮮患者樣本濃度：覆蓋可報(bào)告范圍份數(shù)：20份時(shí)間：34天，平均57份每天數(shù)據(jù)處理：配對(duì)樣本t-檢驗(yàn)結(jié)果判斷正確度-EP15（方案1：患者樣本）22正確度-舉例23根據(jù)所得數(shù)據(jù)得到 以及兩組方法的平均偏倚（b）驗(yàn)證結(jié)果如下時(shí)： b 驗(yàn)證通過 （為廠家聲明，n為標(biāo)本份數(shù)，t查表所得）正確度-結(jié)果判斷24標(biāo)本來源：有證參考物質(zhì)（CRM）能力驗(yàn)證（正確度計(jì)劃）樣品室間質(zhì)評(píng)同組（Peer group）均值（10家）第三方商品化定值物質(zhì)濃度：高低2個(gè)濃度（可報(bào)告范圍內(nèi)，且需考慮醫(yī)學(xué)決定水平）時(shí)間：35天，雙份測(cè)定數(shù)據(jù)處理結(jié)果判斷

9、正確度-EP15（方案2：參考品）定值25正確度-舉例26名稱：檢測(cè)限（limit of detection）檢測(cè)低限（lower limit of detection）分析靈敏度（analytical sensitivity）功能靈敏度（functional sensitivity ）CLSI EP17：空白限（Limit of Blank， LoB）：一定概率下，測(cè)量空白樣本所得到的測(cè)量結(jié)果。檢出限（Limit of Detection， LoD）：檢測(cè)方法可檢測(cè)出的最低被測(cè)物的濃度。定量限（Limit of Quantitation， LoQ）：檢測(cè)系統(tǒng)能夠得到可靠結(jié)果的被測(cè)物最低濃度。

10、在規(guī)定實(shí)驗(yàn)條件下，其正確度與精密度可接受。檢測(cè)限27LoBLoDLoQ檢測(cè)限-EP1728LoB：實(shí)驗(yàn)前：同批試劑、校準(zhǔn)批號(hào)；樣本測(cè)定數(shù)：建立n60，驗(yàn)證n20；樣本類型：臨床樣本（不含被測(cè)物）；基質(zhì)類似的樣本（5%牛血清，人血清白蛋白溶液）基質(zhì)互通性參見EP14或基質(zhì)效應(yīng)與互通性評(píng)估指南（WS/T 356-2011）測(cè)定時(shí)間安排：多樣本，多天，如5個(gè)樣本，5天內(nèi)測(cè)定；結(jié)果計(jì)算（正態(tài)分布o(jì)r非正態(tài)分布？）；驗(yàn)證：20次，3個(gè)不大于LoB，驗(yàn)證通過。檢測(cè)限-EP1729LoD：樣本類型：低值臨床樣本；濃度范圍：LoB4LoB之間。樣本測(cè)定數(shù)：建立：n60；驗(yàn)證：n20；濃度分組：46組。結(jié)果計(jì)算

11、：正態(tài)分布o(jì)r非正態(tài)分布？驗(yàn)證：20次，3個(gè)不大于聲明的LoD，驗(yàn)證通過。檢測(cè)限-EP1730LoQ： 測(cè)定方法：多樣本、多天、重復(fù)測(cè)定建立：n40（測(cè)定總數(shù)）；TEa=|偏差|+2SD規(guī)定的質(zhì)量目標(biāo)，則LoQ=LoD，否則，需檢測(cè)稍微高的標(biāo)本驗(yàn)證：n25；3個(gè)不大于聲明的LoQ，驗(yàn)證通過。檢測(cè)限-EP1731定義： 低值測(cè)定結(jié)果變異系數(shù)等于20%時(shí)分析物濃度制備：濃度：510個(gè)水平，對(duì)數(shù)遞增/減；N=20（每個(gè)濃度測(cè)定數(shù)）；結(jié)果計(jì)算：每個(gè)濃度均值、SD與CV%作圖（可選）。檢測(cè)限-功能靈敏度32可報(bào)告范圍33可報(bào)告范圍：理論數(shù)據(jù)：LoQAMR上限最大可稀釋倍數(shù)實(shí)際應(yīng)用：考慮臨床需求線性范圍：

12、覆蓋檢測(cè)系統(tǒng)可接受線性關(guān)系的范圍，非線性誤差小于設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)。-EP6-A可報(bào)告范圍34樣本：與臨床標(biāo)本基質(zhì)相似臨床標(biāo)本高低混合物廠家提供質(zhì)控物PT中的線性質(zhì)控品（如CAP的LN質(zhì)控品）濃度：建立：911個(gè)水平驗(yàn)證：57個(gè)覆蓋整個(gè)預(yù)期測(cè)定范圍測(cè)量重復(fù)次數(shù)：建立：24次驗(yàn)證：23次測(cè)量時(shí)間：較短時(shí)間內(nèi)（最好1天內(nèi)）線性范圍- EP635標(biāo)本制備舉例：數(shù)據(jù)記錄：離群數(shù)據(jù)剔除：目測(cè)或GRUBBS法線性范圍- EP6樣本號(hào)12345低濃度血清(ml)1.000.750.500.250.00高濃度血清(ml)0.000.250.500.751.0036數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)（多項(xiàng)回歸）：以測(cè)量數(shù)據(jù)均值作為Y值，預(yù)期值作為

13、X值作圖（散點(diǎn)圖）-目測(cè)判斷用非線性多項(xiàng)式擬合數(shù)據(jù)是否比線性好判斷最適非線性模型與線性擬合之間的差值是否小于預(yù)先設(shè)定的該方法的允許偏差離群數(shù)據(jù)剔除：GRUBBS法（查表）線性范圍- EP6階別回歸方程回歸自由度（Rdf）一次Y=b0+b1X2二次Y= b0+b1X+b2X23三次Y= b0+b1X+b2X2+b3X3437結(jié)果判斷：b2/b3（非線性系數(shù)）與零差異無顯著性，線性關(guān)系成立，偏差（%）與不精密度均實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量目標(biāo)，驗(yàn)證（建立）通過線性范圍- EP638b2/b3（非線性系數(shù)）與零有顯著性差異，統(tǒng)計(jì)學(xué)線性不成立：二項(xiàng)/三項(xiàng)擬合曲線與一階線性的差值質(zhì)量目標(biāo)不精密度質(zhì)量目標(biāo)臨床線性成立，驗(yàn)

14、證通過，否則失敗。線性試驗(yàn)：找原因找廠家縮小范圍（前提：滿足臨床需求且非線性原因在高低兩端）線性范圍- EP639標(biāo)本選擇：濃度：線性范圍上1/3區(qū)域（高/混合/添加）稀釋倍數(shù)：供應(yīng)商建議，臨床需求測(cè)定：3個(gè)濃度，每個(gè)濃度測(cè)定3次結(jié)果記錄與計(jì)算：離群數(shù)據(jù)剔除：GRUBBS法（查表）最大可稀釋倍數(shù)偏差（%）質(zhì)量目標(biāo)40配套/批準(zhǔn)方法（ISO15189與CAP）：引用供應(yīng)商資料引用官方出版物資料修改/自建方法：確定干擾物及來源（內(nèi)源/外源）：異常標(biāo)本，如黃疸，脂濁與溶血等藥物及代謝產(chǎn)物被測(cè)物相似物質(zhì)處理過程的添加物，如抗凝劑、防腐劑等食物中的某些物質(zhì)，如-胡蘿卜素、咖啡因等干擾- EP741選擇實(shí)

15、驗(yàn)方案：加入可疑干擾物前后測(cè)定比較選代表性病人樣本與高特異性方法比較兩種方法各有優(yōu)劣，可以互補(bǔ)干擾篩查：選擇合適待評(píng)分析物濃度（考慮Xc）確定該濃度分析物時(shí)，干擾引起的最大臨床允許差異（dmax）確定實(shí)驗(yàn)重復(fù)次數(shù)：雙側(cè)實(shí)驗(yàn)/對(duì)照交替測(cè)定 干擾- EP742數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與結(jié)果判斷： dnull無效假設(shè)值，通常=0 dobs 95%可信區(qū)間的值為dobs dc 認(rèn)為干擾物質(zhì)引起的偏差dmax；否則假 設(shè)成立，有干擾。干擾效應(yīng)特征：干擾物不同濃度時(shí)對(duì)待測(cè)物的干擾程度，可通過劑量響應(yīng)曲線（Dose-Response Curve）描述。干擾- EP743實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：確定待測(cè)物高低濃度（考慮Xc）制備干擾物各系列濃度（如高低混合）確定重復(fù)測(cè)試次數(shù)與測(cè)試順序（隨機(jī)或低高，高低）確定臨