C反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒產(chǎn)品注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則c反應(yīng)蛋白檢測方法

1、C 反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒產(chǎn)品注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 c 反應(yīng)蛋白檢測方法附件 6C反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒產(chǎn)品注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對C反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。本指導(dǎo)原則是對C反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可

2、以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。一、范圍 C 反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒是指利用免疫比濁法、化學(xué)發(fā)光法、時間分辨法、免疫熒光法等基于抗原抗體反應(yīng)原理的免疫學(xué)方法對人全血、血清、血漿或其他體液中的C反應(yīng)蛋白進(jìn)行體外定量測定的試劑。二、注冊申報資料要求(一)綜述資料 C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein , CRP由肝細(xì)胞合 成，在胎兒期產(chǎn)生，非母體胎盤傳遞。其產(chǎn)生機(jī)理是：當(dāng)機(jī)體受感染或

3、組織受損傷時巨噬細(xì)胞和其他白細(xì)胞等被激活，產(chǎn)生白細(xì)胞介素 -6(IL- 6) 、白細(xì)胞介素-1(IL-1 )、月中瘤壞死因子TNF-a等細(xì)胞因子及其他介導(dǎo)物，這些細(xì)胞因子和介導(dǎo)物到達(dá)肝臟，刺激肝細(xì)胞和上皮細(xì)胞合成CRR在結(jié)才上，CR哈5個多肽鏈亞單位，非共價地結(jié)合為盤形多聚體，分子量為11.5萬14萬，CR呢一種典型的急性時相蛋白。常規(guī)CR國U定包括定性、半定量和定量分析Ap,可用于評價感染，組織損傷和炎癥性疾病。對于常規(guī)的 CR國U定，參考值通常被認(rèn)為是臨床上含量高 于10毫克/升。在健康人群血液中CRPK平低于5毫克/升，而在各種條件下，急 性炎癥48小時內(nèi)，CRPfi達(dá)至IJ約20至50

4、0毫克/升。常規(guī)CRP乍為急性炎癥評 估指標(biāo)比紅細(xì)胞沉降率（ESR和白細(xì)胞計數(shù)更敏感、更可靠。超敏C反應(yīng)蛋白線性范圍低端低于常規(guī) CRP這種較低的范圍可擴(kuò)大使用適 應(yīng)癥，C反應(yīng)蛋白是非特異性的，必須結(jié)合臨床癥狀綜合評估，不能作為特定的疾 病或疾病的風(fēng)險的確診依據(jù)。圖1超敏CRPW常規(guī)CRP勺區(qū)別 超敏C反應(yīng)蛋白常見的用途可作為心血管 疾病風(fēng)險識別的輔助手段。配合傳統(tǒng)的急性冠脈綜合征臨床診斷使用，可作為冠狀 動脈疾病或急性冠脈綜合征復(fù)發(fā)的預(yù)警指示物。圖2超敏CRP勺臨床意義 表1各種CRP勺區(qū)別及性能要求常規(guī)CRP超敏CRP用途感染，組織損傷和炎癥性疾病的評價。提供炎癥性疾病的診斷，治療和監(jiān)控的

5、信息是區(qū)分低水平炎癥狀態(tài)的靈敏指標(biāo), 血清 hs-CRP水平與動脈粥樣硬化及急性腦梗死（ ACI） 等心腦血管疾病的發(fā)生、嚴(yán)重程度及預(yù)后密切相關(guān) 參考值范圍 參考值范圍：約10mg/L健康人群： 5mg / L急性范 圍: 20-500 mg/L 參考值范圍 : 1mg/L推薦線性范圍 5mg/L到上限 1.0 mg/L 到w 10.0mg/L靈敏度 明確在 線性范圍低端的性能確定定量限（功能靈敏度）綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、臨床應(yīng)用情況、性能指標(biāo)等方面寫明擬申報產(chǎn)

6、品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的異同。應(yīng)符合體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）（以下簡稱辦法）和體外診斷試劑注冊申報資料基本要求（國食藥監(jiān)械 20_7 609號）的相關(guān)要求。（二）產(chǎn)品說明書 說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、實驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)

7、容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自【參考文獻(xiàn)】：Ap ：，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。結(jié)合體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的要求，下面對 C反應(yīng)蛋白定量 檢測試劑盒說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。【預(yù)期用途】C反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、全血和/或其他體液中的C反應(yīng)蛋白濃度，適用的樣本類型應(yīng)結(jié)合實際的臨床研究情況進(jìn)行確認(rèn)。注1：CRPfi是非特異性的，不能作為特定的疾病或疾病的風(fēng)險的檢測指標(biāo)，不建 議把CRP的具體臨床診斷意義列入預(yù)期用途。注2: C反應(yīng)蛋白包括常規(guī)

8、C反應(yīng)蛋白（CRP、超敏CRP（hsCRP ,具體根 據(jù)臨床試驗核定?！局饕M成成份】（ 1）說明試劑包含主要組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息。（2）試劑中不包含但對該項檢測必須的組分，申請人應(yīng)列出相關(guān)試劑/ 耗材的名稱、貨號及其他相關(guān)信息。（ 3）試劑盒中不包含質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他耗材，應(yīng)說明經(jīng)驗證后推薦配合使用的商品化質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他耗材的制造商、產(chǎn)品名稱以及產(chǎn)品貨號等詳細(xì)信息；如包含校準(zhǔn)品和 / 或質(zhì)控品，應(yīng)說明其主要組成成分及其生物學(xué)來，校準(zhǔn)品應(yīng)注明其定值及溯性，質(zhì)控品應(yīng)有合適的檢測范圍?！緝Υ鏃l件及有效期】試劑的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性等信息作詳細(xì)介紹。并對開封后未使

9、用產(chǎn)品允許暴露于空氣中的溫度、濕度及效期等條件予以明確。【樣本要求】 重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：1）樣本采集：采集時間點(diǎn)是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響，具體采集部位及類型，詳述具體的操作方法或列出相關(guān)操作指南文件以指導(dǎo)使用者（最好能夠給出具體圖示），盡量減少由于樣本采集或處理不當(dāng)對實驗造成的影響。2）樣本處理及保存：樣本的保存條件及期限（短期、長期）、運(yùn)輸條件等。冷藏 / 冷凍樣本檢測前是否須恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)限制。3）樣本的最大可稀釋倍數(shù)。【適用機(jī)型】所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作?！緳z驗方法】 詳細(xì)說明實驗操作的各個步驟，包括：1）實驗條件：實驗環(huán)境的溫度、濕度

10、等注意事項，檢驗試劑及樣本復(fù)溫等要求。2）試劑使用方法（手工/半自動 / 全自動）、注意事項。3）詳述待測樣品的預(yù)處理方法、步驟及注意事項。4）明確樣本檢測加樣量及觀察時間?！緟⒖贾担▍⒖挤秶?應(yīng)注明常用樣本類型的正常參考值（范圍），簡單介紹設(shè)定該參考值（范圍）所選健康人群的區(qū)域特征，建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考值（范圍）”?！緳z驗結(jié)果的解釋】結(jié)合質(zhì)控品對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果進(jìn)行合理的解釋。本試劑的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/ 體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。如存在檢測灰區(qū)，應(yīng)對灰區(qū)結(jié)果的處理方式一

11、并詳述。明確有可能存在的數(shù)值升高因素及數(shù)值降低因素，明確說明對何種條件下需要進(jìn)行重復(fù)檢測，以及在重復(fù)檢測時對待測樣本可能采取的優(yōu)化條件等進(jìn)行詳述。 9. 【檢驗方法局限性】 （1）干擾物質(zhì)及HOOKc應(yīng)對檢測結(jié)果的影響。（ 2）操作時必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程，精心操作才能得到正確結(jié)果，對操作程序作任何修改都可能影響結(jié)果。（3）有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析午o某些未知成分屏蔽了抗原決定簇使之無法與抗體結(jié)合；C反應(yīng)蛋白抗原隨著樣本放置時間的延長和外界溫度上升逐漸降解無法被抗體識別；不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理、樣本中被測物質(zhì)濃度過低等均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。10. 【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 詳述以下性能指標(biāo)：注

12、 1：由于 C 反應(yīng)蛋白目前尚無國家參考品，故選用國際約定、行業(yè)參考品或企業(yè)內(nèi)部參考品，以后國家參考品若建立，采用國家參考品。注2:對線性范圍、分析午靈敏度等的最低要求見表1。（ 1）準(zhǔn)確度：a）檢測線性范圍內(nèi)幾個濃度點(diǎn)的 C反應(yīng)蛋白參考物質(zhì)（國際約定、行業(yè)參考 品或企業(yè)內(nèi)部參考品），檢測濃度 3mg/L時，結(jié)果誤差在土 20內(nèi)；檢測濃度 3mg/L時，結(jié)果誤差應(yīng)在 15 （建議相對偏差）內(nèi)。注 1：最低不得低于國家衛(wèi)生計生部門質(zhì)控允許范圍。注 2：推薦檢測范圍內(nèi)高、中、低濃度樣本各選一個樣本測試，其中低值樣本推薦 hsCRP 1mg/L&右,CRP 10mg/L右。b）回收：將已知濃度的C反

13、應(yīng)蛋白加入到血液基質(zhì)或其他體液成份中，其回 收率在（85115）范圍內(nèi)。c）比對：用已上市試劑盒或參考方法進(jìn)行比對試驗，結(jié)果應(yīng)滿足相應(yīng)要求。（ 2）線性范圍：確立線性范圍至少應(yīng)取5 點(diǎn)（包括下限、中限及上限），每次應(yīng)重復(fù)測定三次，計算出直線方程 y=a+b_,相關(guān)系數(shù)r伯0.990。（3）分析午靈敏度或檢測限（空白限）：a）分析Ap靈敏度：說明試劑的分析Ap靈敏度或不高于某濃度水平，簡單介紹確定方法，對功能靈敏度如何研究可一并注明。b）檢出限：用零濃度校準(zhǔn)品或樣本稀釋液作為樣本進(jìn)行檢測，重復(fù)測定20次，得出20次測量結(jié)果，計算其平均值（M和標(biāo)準(zhǔn)差（SD ，彳#出M+2SD根據(jù)零濃度校準(zhǔn)品和相鄰

14、校準(zhǔn)品之間的濃度結(jié)果進(jìn)行兩點(diǎn)回歸擬合得出一次方程，將M+2SD勺結(jié)果代入上述方程中，求出對應(yīng)的濃度值，即為最低檢出限。（4）重復(fù)性：同一批次的檢測試劑對檢測范圍內(nèi)某個濃度的 C反應(yīng)蛋白樣本 進(jìn)行重復(fù)檢測10次，計算10次測量結(jié)果的平均值（M）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD ,根據(jù)公 式CV=SD/M 100得出變異系數(shù)，變異系數(shù) CV（） 015。注：推薦檢測范圍內(nèi)高、中、低濃度樣本各選一個樣本測試，其中低值樣本推薦 hsCRP 1mg/L左右，CRP 10mg/L右。（5）批問差：三個批次的檢測試劑對檢測范圍內(nèi)某個濃度的C反應(yīng)蛋白樣本各重復(fù)檢測10次，計算30次測量結(jié)果的平均值（M）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD ,根據(jù)公

15、式 CV=SD/MT 100得出變異系數(shù)，變異系數(shù) CV（）值應(yīng)0 20。注：推薦檢測范圍內(nèi)高、中、低濃度樣本各選一個樣本測試，其中低值樣本推薦 hsCRP 1mg/L左右，CRP 10mg/L&右。（6）校準(zhǔn)品溯性申請人應(yīng)根據(jù)GB/T21415-2021 提供所用校準(zhǔn)品的來、賦值過程和相應(yīng)指標(biāo)、以及不確定度等內(nèi)容。（ 7）質(zhì)控品性能要求（如有）a） 定值質(zhì)控品測量準(zhǔn)確度應(yīng)至少給出一種用校準(zhǔn)品校準(zhǔn)測量程序后測定該定值質(zhì)控品的試驗方法。b）均一性 通常取同批號的一定數(shù)量最小包裝單元的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，每包裝單元測試1次，按下面的公式計算測試結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差S1;另用上述校準(zhǔn)品、質(zhì)控品中的

16、1 個最小包裝單元連續(xù)測試相同次數(shù)，計算測試結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差S2;按下列各公式計算瓶間重復(fù)性 CV所有參數(shù)的瓶間重復(fù)性結(jié)果 均應(yīng)符合要求。最小裝量不夠完成瓶間差檢測的可只進(jìn)行批內(nèi)精密度檢測。公式 1公式 2公式 3公式 4當(dāng)S1 HIV1/2-Ab、HCV-Abl?項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染對待。（ 2）建議實驗室的環(huán)境要求，如溫度、濕度、電磁環(huán)境等。（ 3）對采集樣本的要求，建議使用新鮮血液，不建議使用高脂乳糜樣、黃疸、高類風(fēng)濕因子樣本，勿使用溶血樣本，明確樣本的處理辦法。（ 4）對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都視為傳染進(jìn)行處理。（

17、5）其他有關(guān)C反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒的注意事項。（三）擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說明擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合體外診斷試劑注冊管理辦法和體外診斷試劑注冊申報資料基本要求的相關(guān)規(guī)定。另外，對于國產(chǎn)試劑，應(yīng)參考中國生物制品規(guī)程（20_年版），將擬申報產(chǎn)品的主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定、校準(zhǔn)品制備溯過程、質(zhì)控品的制備賦值過程等內(nèi)容作為附錄附于標(biāo)準(zhǔn)正文后，并在正文的“產(chǎn)品分類”項中引出該附錄內(nèi)容。作為定量檢測試劑盒，C反應(yīng)蛋白產(chǎn)品的注冊檢測應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：外觀檢查、物理檢查、準(zhǔn)確度、線性范圍、分析Ap靈敏度/檢出限（空白限）、精密度（批間、重復(fù)性）、校準(zhǔn)品溯性、質(zhì)控品測量準(zhǔn)確度及均一性、生物安全性（如適用

18、）等。如果擬申報試劑已有相應(yīng)的專用國家/ 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或相應(yīng)方法學(xué)的通用標(biāo)準(zhǔn)要求發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。（四）注冊檢驗根據(jù)體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）要求，首次申請注冊的第二類產(chǎn)品應(yīng)該在國家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機(jī)構(gòu)進(jìn)行注冊檢測。由于C反應(yīng)蛋白目前尚無國家標(biāo)準(zhǔn)品，申請人應(yīng)建立自己的參考品體系并提供相應(yīng)的內(nèi)部參考品。（五）主要原材料研究資料1試劑盒所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細(xì)試驗資料。如抗體為申請人自制，則應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來，申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價等），確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)；如

19、抗體為申請人外購，則應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來，外購方名稱，提交外購方出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗證書，詳述申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。2其他主要原輔料的選擇及驗證資料，如包被板、反應(yīng)緩沖液等，申請人應(yīng)詳述每一原輔料技術(shù)指標(biāo)的要求以及確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)。若為外購，應(yīng)詳述每一原輔料的外購方名稱并提交外購方出具的每一原輔料性能指標(biāo)及檢 驗證書。3企業(yè)內(nèi)部參考品的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料。（六）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料1. 主要生產(chǎn)工藝介紹，可以流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。產(chǎn)品反應(yīng)原理介紹?？贵w包被 / 致敏

20、工藝研究：申請人應(yīng)考慮如包被液量、濃度、時間、溫度等 指標(biāo)對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述指標(biāo)的最佳組合。實驗體系反應(yīng)條件確定：申請人因考慮反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、pH值等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。體系中樣品加樣方式及加樣量確定：申請人應(yīng)考慮樣品加樣方式、加樣量對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，通過實驗確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對可用于樣本稀釋的物質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過試驗確定最終選擇的用于樣本稀釋的物質(zhì)或處理方法。確定反應(yīng)所需其他物質(zhì)用量（標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)物、底物等）的研究資料。固相載體、顯色（ 發(fā)光 ）

21、系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹。不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。（七）分析Ap性能評估資料企業(yè)應(yīng)提交原廠在產(chǎn)品研制階段對試劑盒進(jìn)行的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、實驗數(shù)據(jù)、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計分析Ap 等詳細(xì)資料。對于C反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒建議至少選 擇 3 批產(chǎn)品對以下分析Ap性能進(jìn)行研究：分析Ap靈敏度、準(zhǔn)確度、特異性、線性范圍、精密度（批間、批內(nèi)）等指標(biāo)，具體研究方法建議參考相關(guān)指導(dǎo)原則。對于適用多個機(jī)型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說明書【適用機(jī)型】項中所列的所有型號儀器的性能評估資料。準(zhǔn)確度 （ 1）與企業(yè)內(nèi)部參考品的比對研究使用已溯的企業(yè)內(nèi)部定值參考品進(jìn)行驗證，重點(diǎn)觀察檢測結(jié)果

22、的偏差情況。2）回收試驗用于評估定量檢測方法準(zhǔn)確測定加入純分析 Ap物的能力，結(jié)果用回收率表示。通常對樣本進(jìn)行 23次回收試驗，取平均值即平均回 收率?；厥赵囼炞⒁馐马棧杭尤氲臉?biāo)準(zhǔn)液體積一般應(yīng)小于樣本體積的 10；盡量使加入標(biāo)準(zhǔn)液后樣本中的被測物濃度接近醫(yī)學(xué)決定水平；標(biāo)準(zhǔn)物濃度應(yīng)該足夠高，以得到不同濃度的回收樣本；注意基質(zhì)效應(yīng)，盡量采用與臨床待測樣本接近的基質(zhì)。3）方法學(xué)比對采用參考方法或國內(nèi) / 國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品，從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本測定結(jié)

23、果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。在實施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和參比試劑進(jìn)行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對試驗。方法學(xué)比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析Ap。注：C反應(yīng)蛋白目前尚無國家參考品，以后國家參考品若建立，優(yōu)先采用 （ 1）方法；本產(chǎn)品不建議采用方法（2） 衡量準(zhǔn)確度。分析午 靈敏度 分析”靈敏度的確定常使用同批號試劑對零濃度校準(zhǔn)品（或樣品稀釋液）進(jìn)行至少20 次重復(fù)檢測，以空白均值加兩倍標(biāo)準(zhǔn)差報告方法的檢測限（+2SD）。線性范圍 建立試劑線性范圍所用的

24、樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析Ap物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇711個濃度水平。例如，將預(yù)期測定范圍加寬至130,在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實驗結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點(diǎn)直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。精密度 測量精密度的評估應(yīng)至少包括兩個濃度水平的樣本進(jìn)行，兩個濃度包括醫(yī)學(xué)決策點(diǎn)附近的數(shù)據(jù)、報告范圍上下限附近的濃度值，通常選用該檢測指標(biāo)的正常參考值（范圍）附近和異常高值樣本。兩個濃度都選用高值樣品，可能致CV偏小，也不能選用接近最低檢出限的樣品，可能

25、致CV偏大。對hsCRP其中一個水平應(yīng)處于美國心臟協(xié)會/美國疾病預(yù)防控制中心（AHA/CDC給出的低風(fēng)險類的臨 床節(jié)值（1.0mg/L）,其CV應(yīng)0 10;中間水平應(yīng)處于檢測范圍的中點(diǎn)；第三個水平 應(yīng)處于檢測上限的附近。分析 Ap特異性 （1） 交叉反應(yīng)：易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他抗原、抗體等的驗證情況；干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如高脂、黃疸、類風(fēng)濕因子等干擾因子的研究（結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴(yán)重的模糊表述）；藥物影響：常見相關(guān)治療藥物對檢測結(jié)果的影響。6.鉤狀（Hook）效應(yīng)（如有）：說明不會產(chǎn)生Hook效應(yīng)的濃度上限或相關(guān)研究，如需稀釋，應(yīng)注明對稀釋液的要求、最佳或最大稀

26、釋比例。（八）參考值（參考范圍）確定資料參考值（范圍）確定所采用的樣本來、確定方法及詳細(xì)的試驗資料。建議參考CLSI/NCCLS C28-A2。（九）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】

27、和【樣本要求】兩項中進(jìn)行詳細(xì)說明。（十）臨床試驗資料1. 研究方法 選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。建議企業(yè)盡量選擇方法學(xué)相同、線性范圍及精密度等性能接近的同類試劑作為參比試劑。臨床研究單位的選擇 （1）第二類產(chǎn)品申請人應(yīng)當(dāng)選定不少于 2 家（含 2家）省級衛(wèi)生醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展臨床試驗。2）臨床研究單位應(yīng)有能力提供臨床評價所需的各類樣本，實驗操作人員有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效

28、的質(zhì)量控制下，定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。3）不同的臨床單位應(yīng)使用同一批考核試劑進(jìn)行臨床試驗，以便對數(shù)據(jù)進(jìn)行科學(xué)客觀的統(tǒng)計分析午 。臨床試驗方案 臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/ 排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被

29、排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法及樣本隨機(jī)分配以保證試驗結(jié)果的客觀性。對于新試劑的動態(tài)監(jiān)測研究，應(yīng)在方案中明確前后兩次濃度變化有臨床意義的標(biāo)準(zhǔn)。臨床試驗中所涉及的樣本類型應(yīng)與產(chǎn)品說明書一致，且每種樣本類型例數(shù)的選擇應(yīng)符合基本的統(tǒng)計學(xué)要求。各研究單位選用的參比試劑及所用機(jī)型應(yīng)一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析Ap。臨床病例選擇 （1） 臨床試驗樣本量的確定：申請人或臨床研究者應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品臨床使用目的，與該改產(chǎn)品相關(guān)疾病的臨床發(fā)生率確定臨床研究的樣本量。在符合指導(dǎo)原則有關(guān)最低樣本要求的前提下，還應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求。臨床研究的總樣本數(shù)至少為20_例。應(yīng)考慮

30、樣本量的分布。樣本量的選擇應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)及相關(guān)指導(dǎo)原則的要求。樣本濃度應(yīng)覆蓋考核試劑檢測范圍，盡可能均勻分布。盡可能使30樣本的測定值處于參考區(qū)間以外，但在測量范圍內(nèi)。另外，建議在臨床試驗中選擇部分含干擾物質(zhì)的標(biāo)本進(jìn)行對比研究，包括高脂、溶血、黃疸的樣本、類風(fēng)濕因子陽性樣本，易共存的其他急性炎癥時相因子同時升高的患者標(biāo)本，以從臨床角度驗證試劑的特異性。統(tǒng)計學(xué)分析Ap對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關(guān)分析Ap、線性回歸、受試者工作特征（ROC曲線分析Ap等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對考核試劑和參比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析Ap ，應(yīng)重點(diǎn)觀察相關(guān)系數(shù)（ r 值）或判

31、定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標(biāo)。結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行分析Ap ，統(tǒng)計分析Ap應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果差異樣本的驗證在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑的檢測結(jié)果有明顯差異的樣本，應(yīng)采用臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的第三種同類試劑進(jìn)行驗證試驗，同時結(jié)合患者的臨床病情對差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析Ap。臨床試驗總結(jié)報告撰寫 根據(jù)體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)

32、該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析Ap 、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析Ap 方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。1）臨床試驗總體設(shè)計及方案描述臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；病例納入 / 排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)；樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。2）具體的臨床試驗情況考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機(jī)型等信息；對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進(jìn)行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比；質(zhì)量控制，試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、

33、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估；具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗等。3）統(tǒng)計學(xué)分析Ap數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。定量值相關(guān)性和一致性分析Ap用回歸分析Ap驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+b_F口 R2的形式給出回歸分析Ap的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，_是參比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)，同時應(yīng)給出 b 的 95(或99)置信區(qū)間，定量值結(jié)果應(yīng)無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。(4)討論和結(jié)論對總體

34、結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡要分析Ap 試驗結(jié) 果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。三、名詞解釋1. 分析 Ap特異性( Analytical Specificity )：測量程序只測量被測量物的能力。分析Ap特異性用于描述檢測程序在樣本中有其他物質(zhì)存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學(xué)相關(guān)濃度值水平的分析Ap干擾程度。注：潛在干擾物包括干擾物和交叉反應(yīng)物。精密度( Precision )：在規(guī)定條件下，相互獨(dú)立的測試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計學(xué)方法得到的測量不精密度的數(shù)字形式表示，如標(biāo)準(zhǔn)差(SD和變異系數(shù)(CV o四、【參考文獻(xiàn)】： Ap 】： 1. 體外診斷試劑注冊管理辦法(試行)，(國食藥監(jiān)械20_7 229 號)。體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則，(國食藥監(jiān)械20_7 240號)。體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則，(國食藥監(jiān)械20_7 240號)。