免疫實(shí)驗(yàn)課：實(shí)驗(yàn)七 ABO血型鑒定

1、實(shí)驗(yàn)七 ABO血型鑒定ABO血型系統(tǒng)ABO血型由紅細(xì)胞抗原和血清抗體共同決定，依據(jù)紅細(xì)胞膜上是否存在A、B抗原，血清中是否存在抗A、抗B抗體， ABO血型系統(tǒng)可分為A、B、AB、O四種血型。如下表。ABO血型分類(lèi)血型紅細(xì)胞表面抗原血清中抗體AA抗BBB抗AABA、BO抗A、抗B【目的】掌握用鹽水介質(zhì)法進(jìn)行ABO血型鑒定的原理、操作方法和結(jié)果判斷?！驹怼坑靡阎膅M類(lèi)特異抗體（標(biāo)準(zhǔn)血清）與被檢紅細(xì)胞在室溫條件下、鹽水介質(zhì)反應(yīng)中，根據(jù)紅細(xì)胞是否出現(xiàn)凝集現(xiàn)象來(lái)測(cè)定被檢紅細(xì)胞膜上有無(wú)與血型抗體相對(duì)應(yīng)的抗原，從而判斷和鑒定被檢者的血型?！酒鞑摹?.小試管、記號(hào)筆、試管架2.載玻片3.離心機(jī)4.顯微鏡【

2、試劑】標(biāo)準(zhǔn)抗A、抗B血清（單克隆抗體）【標(biāo)本】 抗凝靜脈血或末梢血。玻片法：（1）標(biāo)記玻片，標(biāo)明抗A、抗B。（2）加標(biāo)準(zhǔn)抗血清。（3）加受檢者全血。（4）不斷輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)玻片，是標(biāo)準(zhǔn)抗血清與受檢者紅細(xì)胞充分混勻。（5）觀(guān)察結(jié)果：肉眼觀(guān)察有無(wú)凝集（或溶血）。結(jié)果判斷 正定型 反定型標(biāo)準(zhǔn)血清+受檢者紅細(xì)胞 受檢者 受檢者血清+分型紅細(xì)胞 抗A 抗B 血型判斷 A型紅細(xì)胞 B型紅細(xì)胞 O AB 備注：（凝集）； （不凝集）報(bào)告方式：正定型（玻片法）X型【注意事項(xiàng)】1.器材 所有器材必須清潔干燥、防止溶血。2.試劑 必須符合質(zhì)量要求。3.標(biāo)本 新鮮、無(wú)菌。4.標(biāo)記 均應(yīng)嚴(yán)格標(biāo)記。5.加標(biāo)準(zhǔn)抗血清 （1）標(biāo)

3、準(zhǔn)血清從冰箱取出待其平衡至室溫后再用，用畢盡快放回冰箱。（2）先加血清，再加紅細(xì)胞懸液。（3）更換抗血清批號(hào)或?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果懷疑時(shí)應(yīng)設(shè)陽(yáng)性、陰性對(duì)照。 6.紅細(xì)胞懸液 紅細(xì)胞懸液濃度過(guò)高或過(guò)低，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯 ，易判為陰性反應(yīng)。7.離心 離心時(shí)間和速度要準(zhǔn)確。8.觀(guān)察凝集 （1）玻片法定型時(shí)，轉(zhuǎn)動(dòng)玻片動(dòng)作要輕，注意防止懸液干涸。（2）玻片法反應(yīng)時(shí)間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現(xiàn)，造成假陰性。9.報(bào)告結(jié)果 標(biāo)記、操作、判斷結(jié)果、結(jié)果記錄與報(bào)告應(yīng)嚴(yán)格核對(duì)，避免筆誤。Rh血型鑒定Rh血型系統(tǒng)Rh血型系統(tǒng)是紅細(xì)胞血型中最復(fù)雜的一個(gè)系統(tǒng)，其重要性?xún)H次于ABO血型系統(tǒng)。目前為止已發(fā)

4、現(xiàn)40余種Rh抗原，與人類(lèi)最密切的有D、E、C、c、e五種，其中D抗原最先發(fā)現(xiàn)，且抗原性最強(qiáng)。臨床上將含D抗原的紅細(xì)胞稱(chēng)為Rh陽(yáng)性，反之，不含D抗原的紅細(xì)胞稱(chēng)為Rh陰性?！灸康摹空莆彰附橘|(zhì)法Rh血型鑒定的原理和操作方法。 【原理】Rh抗體屬I(mǎi)gG型不完全抗體，不能再鹽水中與相應(yīng)紅細(xì)胞發(fā)生凝集。酶（木瓜酶或菠蘿酶）可破壞紅細(xì)胞表面的唾液酸，降低其表面電荷，從而減少紅細(xì)胞間排斥力，使紅細(xì)胞之間距離縮?。煌瑫r(shí)酶還可以部分地改變紅細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)，使某些抗原得以暴露，促使Rh血型系統(tǒng)的抗原與相應(yīng)的不完全抗體gG抗體反應(yīng)，從而使紅細(xì)胞發(fā)生肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)。注意本實(shí)驗(yàn)所用試劑與教科書(shū)上有所不同，為IgM型單

5、克隆抗體，因此玻片法操作步驟與上述ABO血型鑒定方法一樣。以下主要練習(xí)試管法鑒定步驟?！咀⒁馐马?xiàng)】1.器材 干燥潔凈，以防溶血。2.試劑 妥善保存，防止污染。若出現(xiàn)渾濁則不能使用。3.標(biāo)本 新鮮、無(wú)污染。4.若玻片法呈陰性，應(yīng)用試管法復(fù)查一次。交叉配血鹽水介質(zhì)配血法【目的】掌握鹽水介質(zhì)法交叉配血試驗(yàn)的基本原理和方法?！驹怼刻烊籫M類(lèi)血型抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞抗原在室溫下的鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)凝集反應(yīng)。通過(guò)離心，觀(guān)察受血者血清與供血者紅細(xì)胞（主側(cè)）以及受血者紅細(xì)胞與供血者血清（次側(cè)）之間有無(wú)凝集現(xiàn)象，判斷受血者與供血者之間有無(wú)ABO血型不合的情況?！酒鞑摹?.小試管、試管架、記號(hào)筆2.吸管、吸耳球3.尖滴

6、管、膠吸頭4.離心機(jī)5.顯微鏡【試劑】生理鹽水【標(biāo)本】受血者和供血者靜脈血制備5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液的方法：抗凝血離心或紅細(xì)胞自然沉降后去使館下層的紅細(xì)胞2滴與小試管中，加生理鹽水2ml，用吸管將紅細(xì)胞與生理鹽水充分混勻，避免劇烈震蕩導(dǎo)致紅細(xì)胞破碎溶血。2500r/min離心3min后棄去上清，重復(fù)洗滌3次。自管底吸取1滴壓積紅細(xì)胞加入19滴生理鹽水中，此即為5%的紅細(xì)胞生理鹽水懸液?！静僮鳌?.準(zhǔn)備受血者標(biāo)本（1）分離血清，標(biāo)記為PS。（2）制備受血者5%紅細(xì)胞懸液，標(biāo)記為PC。2.準(zhǔn)備供血者標(biāo)本（1）分離血清，標(biāo)記為DS。（2）制備供血者5%紅細(xì)胞懸液，標(biāo)記為DC。3.交叉配血 （1）標(biāo)記

7、試管 小試管2支，分別標(biāo)明主、次。（2）加血清和紅細(xì)胞懸液 在主側(cè)配血管中分別加入PS和DC各1滴，再次側(cè)配血管中分別加入DS和PC各1滴，混勻。（3）1000r/min離心1min。觀(guān)察結(jié)果：肉眼觀(guān)察有無(wú)凝集（或溶血）反應(yīng)，再用低倍鏡觀(guān)察，判定陰性、陽(yáng)性和陽(yáng)性強(qiáng)度。1.凝集判斷標(biāo)準(zhǔn)：若紅細(xì)胞呈均勻分布，無(wú)凝集顆粒，顯微鏡下紅細(xì)胞分散存在，無(wú)凝集靠攏現(xiàn)象為陰性；紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性；2.凝集強(qiáng)度判斷，見(jiàn)表4-1（實(shí)驗(yàn)書(shū)61頁(yè)）5.判斷配血是否相合 ABO同型配血，主側(cè)、次側(cè)均無(wú)溶血及凝集，血型相合，可輸血；主、次側(cè)任何一管發(fā)生溶血或凝集，不可輸血，應(yīng)查找原因。異型配血時(shí)，主側(cè)無(wú)凝集無(wú)溶血，次側(cè)有凝集無(wú)溶血，可少量輸血；如主側(cè)、次側(cè)均不凝集或主側(cè)凝集，不能輸血，需查找原因。 6.報(bào)告方式（1）受血者（ 型）血清+供血者（ 型）紅細(xì)胞 凝集與否及強(qiáng)弱程度。（2）供血者（ 型）血清+受血者（ 型）紅細(xì)胞 凝集與否及強(qiáng)弱程度。（3）受血者 與供血者配血是否相合?！咀⒁馐马?xiàng)】1.器材 器材要清潔、干燥、防止溶血。2.試劑 不能使用過(guò)期、無(wú)效試劑。3.標(biāo)本 新鮮、無(wú)污染。4.配血 紅細(xì)胞要用生理鹽水洗滌干凈，防止血漿中的血型物質(zhì)中和抗體。紅