組培繼代培養(yǎng)

1、將誘導(dǎo)產(chǎn)生的芽、苗、愈傷組織、原球莖或胚狀體等培養(yǎng)物重新分割，接種到新鮮培養(yǎng)基上進(jìn)一步擴(kuò)大培 養(yǎng)的過程稱為繼代培養(yǎng)，也稱為增殖培養(yǎng)。該過程是植物組織培養(yǎng)中決定繁殖速度快慢、繁殖系數(shù)高低的 關(guān)鍵階段。繼代使用的培養(yǎng)基對(duì)于一種植物來說，每次幾乎完全相同。由于培養(yǎng)物在適宜的環(huán)境條件、充 足的營養(yǎng)供應(yīng)和生長調(diào)節(jié)劑作用下，排除了其他生物的競爭，繁殖速度大大加快。1、繼代增殖方式根據(jù)外植體分化和生長的方式不同，繼代培養(yǎng)中培養(yǎng)物的增殖方式也各不相同。主要的增殖方式有：（1）多節(jié)莖段增殖將頂芽或腋芽萌發(fā)伸長形成的多節(jié)莖段嫩枝，剪成帶1 2枚葉片的單芽或多芽莖段，接種到繼代培養(yǎng)基進(jìn) 行培養(yǎng)的方法。該方法培養(yǎng)過程

2、簡單，適用范圍廣，移栽容易成活，遺傳性狀穩(wěn)定，如馬鈴薯、葡萄、刺 槐、山芋等即可此種方式增殖。（2）叢生芽增殖將頂芽或腋芽萌發(fā)形成的叢生芽分割成單芽，接種到繼代培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的方法。該方法不經(jīng)過愈傷組織 的再生，是最能使無性系后代保持原品種特性的一種增殖方式，而且成苗速度快，繁殖量大，適合于大規(guī) 模的商業(yè)化生產(chǎn)。（3）不定芽增殖將能再生不定芽的器官或愈傷組織塊分割，接種到繼代培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的方法。不定芽形成的數(shù)量與腋芽 無關(guān)，其增殖率高于叢生芽方式。但是通過這種方式再生的植株在遺傳上的穩(wěn)定性較差，而且隨著繼代次 數(shù)的增加，愈傷組織再生植株的能力會(huì)下降，甚至完全消失。（4）原球莖增殖將原球莖切割

3、成小塊，也可以給予針刺等損傷，或在液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)，來加快其增殖進(jìn)程。（5）胚狀體增殖通過體細(xì)胞胚的發(fā)生來進(jìn)行無性系的大量繁殖。具有極大的潛力，其特點(diǎn)是成苗數(shù)量多、速度快、結(jié)構(gòu)完 整，因而是增殖系數(shù)最大的一種方式。但胚狀體發(fā)生和發(fā)育情況復(fù)雜，通過胚狀體途徑繁殖的植物種類遠(yuǎn) 沒有叢生芽和不定芽涉及的廣泛。一種植物的增殖方式不是固定不變的，有的植物可以通過多種方式進(jìn)行無性擴(kuò)繁。如葡萄可以通過多節(jié)莖 段和叢生芽方式進(jìn)行繁殖；蝴蝶蘭可以通過原球莖和叢生芽方式進(jìn)行繁殖。生產(chǎn)中，具體應(yīng)用哪一種方式 進(jìn)行，主要看他們的增殖系數(shù)、增殖周期、增殖后芽的穩(wěn)定性及適宜生產(chǎn)操作等因素而定。2、影響繼代增殖的因素植

4、物材料不同種類的植物，同種植物不同品種，同一植物不同器官和不同部位，繼代紡織能力也各不相同。一般是 草本木本；被子植物裸子植物；年幼材料老年材料；剛分離組織巳繼代的組織；胚營養(yǎng)組織；芽胚 狀體愈傷組織。在以腋芽或不定芽增殖繼代的植物中，在培養(yǎng)許多代之后仍然保持著旺盛的增殖能力，一 般較少出現(xiàn)再生能力喪失。培養(yǎng)基在規(guī)?；a(chǎn)中，培養(yǎng)的植物品種一般比較多，而且來源也比較復(fù)雜，品種間的差異表現(xiàn)非常明顯。在培 養(yǎng)基的配制和使用上，一定要多樣化，否則會(huì)造成一些品種因?yàn)樯L調(diào)節(jié)劑過高或過低而嚴(yán)重影響繁殖和 生長。另外，在同一品種上，適當(dāng)調(diào)整培養(yǎng)基中生長調(diào)節(jié)劑的濃度也是非常重要的，其目的的主要是為了 保證種

5、苗的質(zhì)量，同時(shí)又可以維持一定的繁殖基數(shù)。一些植物經(jīng)長期繼代培養(yǎng)，在開始繼代培養(yǎng)中需要加入生長調(diào)節(jié)劑，經(jīng)過幾次繼代后，加入少量或不加生 長調(diào)節(jié)劑也可以生長。如在胡蘿卜搏壁組織初代培養(yǎng)中加入10-6mol/L IAA才能達(dá)到最大生長量，但在繼 代培養(yǎng)10代以后，不加IAA的培養(yǎng)基上也可達(dá)到同樣生長量。在蘭科植物原球莖繼代培養(yǎng)中情況也相同。培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度應(yīng)大致與該植物原產(chǎn)地生長所需的最適溫度相似。喜歡冷涼的植物，以20C左右較好，熱帶作物 需在30C左右的條件下才能獲得較好的生長。如香石竹在18-25C隨溫度降低生長速度減慢，但苗的質(zhì)量 顯著提高，玻璃化現(xiàn)象減少，高于25C時(shí)，引起苗徒長細(xì)弱，玻璃

6、化或半玻璃化苗明顯增加。另在桉樹繼 代培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，如果總在23-25C條件下培養(yǎng)，芽就會(huì)逐漸死亡，但如果每次繼代培養(yǎng)時(shí)，先在15C下培 養(yǎng)3d，再轉(zhuǎn)至25C下培養(yǎng)，生長良好。繼代周期對(duì)一些生長速度快或者繁殖系數(shù)高的種類如滿天星、非洲紫羅蘭等，繼代時(shí)間比較短，一般不超過15d。對(duì)生長速度比較慢的種類如非洲菊、紅掌等，繼代時(shí)間就要長一些；30-40d繼代1次。繼代時(shí)間也不是一 成不變的，要根據(jù)培養(yǎng)目的、環(huán)境條件及所使用的培養(yǎng)基配方進(jìn)行考慮。在前期擴(kuò)繁階段，為了加快繁殖 速度，當(dāng)苗剛分化時(shí)就切割繼代，而無需待苗長到很大時(shí)才進(jìn)行繼代。后期在保持一定繁殖基數(shù)的前提下， 進(jìn)行定量生產(chǎn)時(shí)，為了有更多的大苗可以用來生根，可以間隔較長的時(shí)間繼代，達(dá)到既可以維持一定的繁 殖量，又可以提高組培苗質(zhì)量的目的。繼代次數(shù) 繼代次數(shù)對(duì)繁殖率的影響因培養(yǎng)材料而異。有些植物如葡萄、黑穗醋栗、月季和倒掛金鐘等，長期繼代可 保持原來的再生能力和增殖率。有些植物則隨繼代次數(shù)而增加變異頻率，如繼代