免疫血液學(xué)系統(tǒng)和鑒定原理

1、免疫血液學(xué)系統(tǒng)和鑒定原理主要內(nèi)容： 1、紅細(xì)胞血型系統(tǒng) 2、HLA血型 3、血小板血型系統(tǒng) 4、血清型 5、輸血前免疫血液檢查 6、新生兒溶血病 免疫血液學(xué)ABO血型的問(wèn)題問(wèn)題的發(fā)現(xiàn)正反定型不符可能性有許多種ABO亞型，疾病因素，年齡體質(zhì)和個(gè)體差異，冷抗體，自身抗體，輸血，其它血型抗體的干擾，蛋白干擾，多凝集等。通常情況下O型紅細(xì)胞加AB血漿可以解決問(wèn)題，但不總是這樣。孟買(mǎi)型和類(lèi)孟買(mǎi)型常常不能輸O型血?Rh血型問(wèn)題Rh陰性的患者輸什么樣的血？輸什么樣的血成分？RhD亞型問(wèn)題（弱D，不完全D，Del）Rh系統(tǒng)抗D、C、c、E、e抗體及其聯(lián)合Rh血型錯(cuò)誤輸血的后果 同種抗體問(wèn)題常見(jiàn)紅細(xì)胞同種抗體有

2、那些？如何鎖定目標(biāo)？譜細(xì)胞，抗原/抗體測(cè)定，效價(jià)測(cè)定它們的臨床意義是否為溫抗體？是否致敏補(bǔ)體？紅細(xì)胞上有多少抗原？以往表現(xiàn)如何？是否能提供配合型的血？是否有權(quán)宜方案？（親屬血）自身抗體問(wèn)題自身抗體冷自身抗體和溫自身抗體如何鎖定目標(biāo)？針對(duì)紅細(xì)胞的直抗試驗(yàn)和放散試驗(yàn)，針對(duì)血清的間抗試驗(yàn)病史，輸血史它們的臨床意義是否為溫抗體？藥物抗體，類(lèi)抗體，多凝集是否能提供配合型的血？是否有權(quán)宜方案？新生兒溶血病診斷及換血新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)室診斷 直抗試驗(yàn)、游離試驗(yàn)、釋放試驗(yàn) ABO溶血病 換血血液的選擇Rh溶血病 換血血液的選擇骨髓移植后輸血紅細(xì)胞血型的選擇血小板血型的選擇其它特定病患的輸血前檢查白血病消化道疾

3、病多發(fā)性骨髓瘤冷凝集素病大量輸血輸液患者已經(jīng)發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)的患者區(qū)分自身抗體和同種抗體分離自身和輸入的紅細(xì)胞正確鑒定血型正確鑒定抗體血漿置換交換輸血 1818年英國(guó)婦產(chǎn)科醫(yī)生布倫德?tīng)柍晒Φ赜幂斞然盍艘幻a(chǎn)后大出血的產(chǎn)婦，成為人類(lèi)歷史上成功輸血的第一例。 1900年奧地利維也納大學(xué) LandsteinerLandsteiner（18681943）獲得1930年諾貝爾獎(jiǎng)金發(fā)現(xiàn)了ABO、MN、P、RH等許多血型ABO血型的發(fā)現(xiàn)ABO血型發(fā)現(xiàn)的意義打開(kāi)了免疫血液學(xué)、免疫遺傳學(xué)的大門(mén)為臨床輸血鋪平了道路，使它成為一項(xiàng)有效的治療手段。1900年 2009年1990年1985年 ABO血型系統(tǒng)從血清學(xué)

4、到分子生物學(xué)抗原決定簇 (表位)血型抗原是紅細(xì)胞上的一種特異性的呈立體排列的化學(xué)基團(tuán)。依生化性質(zhì)人紅細(xì)胞抗原決定簇可分為多肽和糖分子兩類(lèi)。人出生時(shí)，抗原決定簇是多肽的紅細(xì)胞膜的血型抗原已發(fā)育成熟，而決定簇為糖分子的血型抗原則在出生后逐漸發(fā)育成熟。決定簇糖分子多肽ABH，LweisIi，TTn抗原MNSs，Rh，Kell，Kidd存在多種細(xì)胞表面體液和分泌液中只分布于紅細(xì)胞膜其他血細(xì)胞膜上分布組織血型抗原可以表示細(xì)胞分化和成熟的標(biāo)志，胎兒和新生兒紅細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)i抗原，弱I抗原，而成人則為強(qiáng)I抗原，弱i抗原。IgG相對(duì)分子量為15萬(wàn)，由2條重鏈及2條輕鏈構(gòu)成，根據(jù)重鏈恒定區(qū)氨基酸序列的差異，分為Ig

5、G1、IgG2、IgG3、IgG4四種亞類(lèi)。IgG是唯一能通過(guò)胎盤(pán)到達(dá)胎兒的免疫球蛋白(1gG2通過(guò)胎盤(pán)效率最低)，并有結(jié)合補(bǔ)體的能力，IgG3結(jié)合補(bǔ)體能力最強(qiáng)。其次是IgGl，所以IgG3和IgGl在溶血性輸血反應(yīng)和新生兒溶血病中有重要意義。 IgM相對(duì)分子量為90萬(wàn)，由5個(gè)免疫球蛋白單體通過(guò)J鏈連接而組成的五聚結(jié)構(gòu)。IgM是胎兒免疫系統(tǒng)成熟時(shí)最早出現(xiàn)的免疫球蛋白，并具有高度的有效凝集素，使補(bǔ)體活化的效率高，1個(gè)IgM分子與紅細(xì)胞表面的抗原結(jié)合，就能引發(fā)補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞溶解現(xiàn)象。ABO血型系統(tǒng)抗體若按產(chǎn)生的原因又分為“天然抗體”和“免疫性抗體”?！疤烊豢贵w”主要由自然界中與A、B抗原類(lèi)似的物質(zhì)

6、(細(xì)菌)免疫刺激產(chǎn)生，以IgM為主。 “免疫性抗體”主要是由母嬰血型不合的妊娠、血型不合及有輸血史的輸血產(chǎn)生，以IgG為主。 ABO抗體的特性“天然抗體”與“免疫性抗體”的特征及區(qū)別特性天然抗體（IgM）免疫性抗體（IgG）抗原刺激分子量與紅細(xì)胞反應(yīng)的最適溫度被血型物質(zhì)中和溶血素效價(jià)耐熱性在鹽水中與相應(yīng)紅細(xì)胞反應(yīng)發(fā)生肉眼可見(jiàn)凝集對(duì)酶處理紅細(xì)胞的反應(yīng)通過(guò)胎盤(pán)無(wú)察覺(jué)100萬(wàn)4-25能較低不耐熱（冷抗體）能變化不大不能有（妊娠、輸血）15萬(wàn)37 不能較高耐熱（溫抗體）不能能反應(yīng)能人在出生前尚未產(chǎn)生抗體.ABO抗體出生后3-6個(gè)月出現(xiàn)，5-6歲時(shí)達(dá)高峰; 成人隨年齡增長(zhǎng)而降低。新生兒血清中抗體常是來(lái)自

7、母體的IgG，偶爾也有胎兒自身產(chǎn)生的IgM。由于新生兒血型抗原位點(diǎn)少，抗體效價(jià)低，為此檢測(cè)血型時(shí)應(yīng)十分慎重，可因抗原少或抗體效價(jià)低而凝集不明顯而誤定血型?？笰、抗B、抗AB抗體存在于所有缺少相應(yīng)抗原的人血清中，唾液、乳汁、淚液等各種體液及分泌物中也可發(fā)現(xiàn)ABO抗體.ABO抗體的產(chǎn)生及存在部位 2 9個(gè)血型系統(tǒng)， 2 0 0多個(gè)抗原第一節(jié) 紅細(xì)胞血型系統(tǒng) 一、ABO血型系統(tǒng)ABH血型抗原不僅存在于紅細(xì)胞表面，而且還廣泛存在于消化道，皮膚上皮細(xì)胞，呼吸道及泌尿系統(tǒng)，包括唾液、眼淚、尿液、消化液、膽汁、乳液、羊水、體腔液及卵巢囊腫液中。ABO血型系統(tǒng)的獨(dú)特特點(diǎn)A和B抗原的免疫原性強(qiáng)血清中規(guī)律性存在抗

8、A和/或抗B抗體分泌型個(gè)體的血漿、唾液、組織細(xì)胞等處存在A、B、H血型物質(zhì)ABO血型系統(tǒng)是根據(jù)每個(gè)人紅細(xì)胞上是否存在A和B抗原，可將人分成四種血型ABO血型的配合性是輸血前試驗(yàn)的重要基礎(chǔ)血型抗原能夠激活免疫系統(tǒng) ：母胎不相容輸血不相容自身溶血性貧血ABO血型的主要抗原和抗體已知血清+受檢者紅細(xì)胞 受檢者血清+已知紅細(xì)胞 （正定型） （反定型） 抗A 抗B 受檢者血型 A細(xì)胞 B細(xì)胞 O細(xì)胞 A B O AB (一) ABO血型的遺傳基礎(chǔ) 我們從雙親的染色體各獲得一半的遺傳基因。我們遺傳的是二個(gè)血型基因，一個(gè)是從母親那兒來(lái)的A、B或O基因。另一個(gè)基因來(lái)自父親的A、B或O基因。基因型，從雙親染色體

9、上所遺傳下來(lái)的基因。表型，所觀察到的遺傳基因即血型本身。A和B基因?qū)τ贠基因是顯性基因，O基因是隱性基因。 不同婚配類(lèi)型子女可能的血型A*OA OB*OB OA*BA B AB OAB*OA BA*ABA B ABB*ABB A ABA*AA O (二) ABO血型表型的頻率中國(guó)：從北向西南的方向，B基因頻率逐漸下降，而O基因頻率升高；云貴川和長(zhǎng)江中下游地區(qū)A基因頻率升高，兩廣、福建、臺(tái)灣O基因頻率較其它地區(qū)高。歐洲：A基因頻率最高B基因在亞洲頻率最高。(三) (三) ABO血型抗原的生化合成ABO系統(tǒng)抗原概述A和B抗原是紅細(xì)胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖類(lèi)決定簇。二者之間的區(qū)別在于免疫結(jié)構(gòu)域末

10、端單糖性質(zhì)不同。A抗原末端糖基是N-乙酰氨基半乳糖B抗原末端糖基是D-半乳糖。Type1 Gal13GlcNAc 1R （主要存在于血漿）Type2 Gal14GlcNAc 1R （存在于紅細(xì)胞、血漿）ABO生化合成的概述-血型前體物質(zhì)在H基因編碼產(chǎn)生的巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶(H轉(zhuǎn)移酶)的作用下，把一個(gè)巖藻糖接在其前身物質(zhì)即紅細(xì)胞膜上寡糖鏈的半乳糖上形成H物質(zhì)(H抗原)，它是A、B抗原的前身物質(zhì)。ABO生化合成的概述-H物質(zhì)ABO生化合成的概述-A酶和B酶A基因A酶編碼(N-乙酰-D-半乳糖胺基轉(zhuǎn)移酶)A抗原B基因B酶編碼(D-半乳糖轉(zhuǎn)移酶)D-半乳糖(H物質(zhì)) + N-乙酰半乳糖胺D-半乳糖(H物質(zhì)

11、) +D-半乳糖B抗原A和B抗原是紅細(xì)胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖類(lèi)決定簇。A抗原 N-乙酰半乳糖胺(GaLNAc)B抗原 D-半乳糖(GaL)。ABO生化合成的概述-A抗原和B抗原H抗原是形成A、B抗原的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，但是H物質(zhì)抗原性很弱，血清中一般沒(méi)有抗H抗體。O型就只有H抗原，O基因?yàn)闊o(wú)效基因，不會(huì)產(chǎn)生轉(zhuǎn)移酶，糖不會(huì)連接到H物質(zhì)上。如果缺失H基因，即缺乏H轉(zhuǎn)移酶，則無(wú)H物質(zhì)，這時(shí)即使體內(nèi)存在A或B轉(zhuǎn)移酶也不能形成A或B抗原，如hh型(孟買(mǎi)型)就是缺乏H基因。ABO生化合成的概述-0型和孟買(mǎi)型ABO系統(tǒng)概述O基因的產(chǎn)物是一種無(wú)活性的轉(zhuǎn)移酶，不能轉(zhuǎn)移任何糖基到H抗原上，因此O型個(gè)體的抗原就是H抗

12、原。 ABO抗原不是ABO基因的直接產(chǎn)物，A和B基 因編碼不同的糖基轉(zhuǎn)移酶，催化不同的糖基轉(zhuǎn)移到H抗原末端半乳糖基上，形成相應(yīng)的A或B抗原。ABO基因糖基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)模式圖（1）ABO基因糖基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)模式圖（2）ABO物質(zhì)的生物合成A、B、H血型物質(zhì)1930年Lehrs發(fā)現(xiàn)唾液中有A和B物質(zhì)1943年Wiener發(fā)現(xiàn)分泌型占80AB物質(zhì)的量具有較顯著的個(gè)體差異血清中的血型物質(zhì)較弱唾液中的血型物質(zhì)較容易測(cè)到-常見(jiàn)ABO亞型A抗原中主要為A1和A2 其它A亞型：A3、Ax、Aend、Am、Ay、 Amos 、Aint、 Aw和AelB亞型一般比A亞型更少：B3、Bx、Bm、 Bmos和Bel等其他

13、亞型：嵌合體(Chimera) 、 CisAB型、孟買(mǎi)型、類(lèi)孟買(mǎi)型 (四)ABO血型系統(tǒng)的抗原，亞型及變異型ABO亞型的判斷1. 紅細(xì)胞與抗A、抗A1、抗B及抗AB的凝集程度2. 紅細(xì)胞上H物質(zhì)活性的強(qiáng)弱3. 血清中是否存在抗A14.分泌型人的唾液中A、B和H物質(zhì)A1和A2決定簇的區(qū)別是僅存在量的差異還是抗原決定簇結(jié)構(gòu)不同？A1型和A1B型紅細(xì)胞上的A1抗原數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于A2型和A2B型紅細(xì)胞，A1型個(gè)體血清中A酶的活力也遠(yuǎn)強(qiáng)于A2型。表明二者之間有量的差別。A2和A2B個(gè)體常常產(chǎn)生抗A1，說(shuō)明A2細(xì)胞上缺乏A1細(xì)胞上的一種決定簇。 H抗原強(qiáng)弱趨勢(shì)：OA2 B A2B A1 A1BA1和A2同樣存

14、在質(zhì)的區(qū)別 兩種A型抗原:A、A1。 A1細(xì)胞具有A、A1抗原。 A2細(xì)胞只有A抗原。 B型人血清中有抗A和抗A1。 A1細(xì)胞與抗A、抗A1反應(yīng) A2細(xì)胞只與抗A反應(yīng)血型抗原抗體A1A2OBA1、AAHB抗B抗B、抗A1抗A、抗B、抗A1抗A、抗A1A1基因與A2基因共同遺傳A1A2基因被存在的A1基因所隱蔽A2基因與B或O基因配對(duì)時(shí)A2B、A2此時(shí)的A2基因?yàn)轱@性遺傳A1和A2的遺傳及表型 根據(jù)ABO血型的血清學(xué)特點(diǎn)，A型和AB型可分為Al、A2和AlB、A2B四種亞型?？笰血清中含有抗A和抗A1兩種抗體，抗A可以凝集所有A型和AB型紅細(xì)胞，而抗A1只能與一部分A型和AB型紅細(xì)胞反應(yīng). 據(jù)此

15、凡與抗A1反應(yīng)者被定為A1或A1B型，不與抗A1反應(yīng)，而與抗A反應(yīng)者被定為A2或A2B型。A1和A2亞型鑒定原理A1和A2表型鑒別血型 抗原 抗-A 抗-A1A1 A、A1 + +A2 A + -A1、A2的血清學(xué)區(qū)別是以抗Al試劑作試驗(yàn)獲得的?？笰1試劑：B型人的血清制成或?yàn)殡p花 扁豆提取并稀釋的植物凝集素。凡與抗A1試劑發(fā)生凝集反應(yīng)者為A1，如果同時(shí)還與抗B凝集，則為A1B型。不與抗A1試劑凝集者為A2或A2B型。A1、A2亞型的鑒定方法 防止誤定血型。在常規(guī)輸血試驗(yàn)中，A2或A2B型人的血清含有抗A1抗體，患者與供血者間的A1或A2需加以區(qū)別。 較A2更弱的亞血型不常發(fā)現(xiàn)， 一位弱亞型患

16、者錯(cuò)誤地定型為O型而輸予0型血液時(shí)，預(yù)期應(yīng)無(wú)嚴(yán)重的后果。 若一位具有弱A抗原的供血者血液，被定型錯(cuò)誤而輸給一位0型的患者時(shí)，則能引發(fā)嚴(yán)重的輸血反應(yīng)問(wèn)題。A1、A2亞型的臨床意義用A2細(xì)胞重復(fù)吸收來(lái)源于B型血清，可以移去所有抗A血清，血清中余下的抗體只能與A1型紅細(xì)胞反應(yīng)，表明B型個(gè)體的血清中含有抗A和抗A1兩種抗體?？笰1不僅存在于A2亞型，在B型和O型人的血清中除含抗A外還有抗A1 ，所以抗A1試劑可以從B型人血清中獲取。A1 4+ 0 4+ 0 4+ 0 0 4+ 0 A HA2 4+ 0 4+ 3+ 0 2+ 0 4+ 0 A HA3 2+mf 0 2+mf 3+ 0 + 0 4+ 0

17、A HAm 0/ 0 +/ 4+ 0 0 0 4+ 0 A HAx 0/ 0 +/2+ 4+ 0 2+ 0/2+ 4+ 0 HB 0 4+ 4+ 0 3+ 4+ 0 0 B HB3 0 +mf 2+mf 4+ 4+ 4+ 0 0 B HBm 0 0 0/ 4+ 4+ 4+ 0 0 B HBx 0 0/ 0/2+ 4+ 4+ 4+ 0 0 HA亞型及B亞型的鑒定表紅細(xì)胞表現(xiàn)型 紅細(xì)胞與已知抗血清反應(yīng) 血清與試劑紅細(xì)胞反應(yīng)分泌者唾液 含型物質(zhì)抗A 抗B 抗AB 抗H 抗A1 A1 A2 B O注：mf為混合外觀凝集；0為無(wú)凝聚A3最早由Friedenreich在1936年描述與抗A和抗AB共同孵育

18、時(shí)：“混合視野外觀” 。即：小的凝集塊周?chē)谴罅课茨募?xì)胞。與抗A反應(yīng)強(qiáng)度低于A2。與抗AB反應(yīng)呈混合視野,但并不增強(qiáng).偶有抗A1 (occasionally) 血型物質(zhì) A、 HA3不像是A2和O細(xì)胞的嵌合體 Aend（Afinn，Abantu）Aend最早由Weiner等于1959年描述類(lèi)似于A3細(xì)胞：它們與一些抗A和抗AB表現(xiàn)很弱的混合視野外觀Aend分泌型的唾液中只有H物質(zhì)，但是無(wú)A物質(zhì)抗A1出現(xiàn)在部分Aend個(gè)體的血清中10細(xì)胞凝集（Mf）AmAm細(xì)胞不能被抗A和抗AB凝集，或者僅能發(fā)生很弱的凝集。血型物質(zhì): A、 HAm細(xì)胞可以吸附放散抗A。Am分泌型的唾液中包含正常含量的A和H

19、物質(zhì)，Am血清中通常無(wú)抗A1。Am作為ABO位點(diǎn)上一個(gè)稀有等位基因遺傳。AxAx表現(xiàn)型最初于1935年報(bào)道，它的主要血清學(xué)特點(diǎn)是：紅細(xì)胞與多數(shù)來(lái)源于B型血清的抗A不發(fā)生反應(yīng)，但是可以被大多數(shù)來(lái)源于O型個(gè)體的抗AB凝集。血清中含有抗A1，有時(shí)可凝集A1和A2細(xì)胞除了H物質(zhì)，Ax分泌型個(gè)體唾液中可以撿出痕量的A物質(zhì)。Ael在通常的條件下，Ael細(xì)胞與抗A和抗AB不發(fā)生凝集，雖然它們可以結(jié)合這些抗體，結(jié)合的抗體通過(guò)吸收放散技術(shù)可以檢測(cè)到。Ael分泌型唾液中無(wú)A物質(zhì)，僅有H物質(zhì)，血清中常含有抗A1，也可以含有能夠凝集A2細(xì)胞的抗體。Ael以ABO位點(diǎn)上的一種稀有的等位基因遺傳的。各種弱A亞型的鑒別程序

20、紅細(xì)胞與抗A及/或抗A1B反應(yīng)弱凝集混合外觀(mf）A60A3A3 Ax10 紅細(xì)胞呈十分弱的mf凝集AendAend只與抗AB呈弱凝集Ax不凝集容易吸附放散抗AAm能吸附分泌型唾液中有一定量的A物質(zhì)及放散不容易吸附放散抗AAy抗A分泌型唾液含少量的A物質(zhì)Am Ay 吸附放散抗AAelAel分泌型唾液只含H物質(zhì)無(wú)A物質(zhì)B亞型弱的B變異型是很少的?？赡苁怯捎谠谠S多群體中B基因的頻率要相對(duì)低得多。弱B亞型較難以分類(lèi)。Salmon做出結(jié)論：B亞型最好的分類(lèi)應(yīng)參照A變異型：B3、Bx、Bm和Bel，另外加上那些不符合其它4種類(lèi)型的Bw。 成人與新生兒抗原數(shù)量比較細(xì)胞 成人新生兒A1810 0001170 000250 000 370 000A2240 000 290 000140 000B610 000 83