專題五DNA的粗提取與鑒定

1、5.1 DNA的粗提取與鑒定一、基礎(chǔ)知識(shí)（一）提取DNA的方法1.提取生物大分子的基本思路 選用一定的物理或化學(xué)方法，分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子2.提取DNA的基本思路提取DNA，去除其他成分利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異 DNA的溶解性DNA和蛋白質(zhì)等成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同利用這一特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀；3.DNA等大分子的理化性質(zhì) DNA不溶于酒精溶液 DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離。 DNA不溶于酒精溶液 DNA對(duì)酶

2、、高溫和洗滌劑的耐受性 蛋白酶水解蛋白質(zhì)， 對(duì)DNA沒有影響 高 溫大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受6080 而DNA在80以上才會(huì)變性 洗滌劑溶解細(xì)胞膜，去除脂質(zhì)和蛋白質(zhì) 但對(duì)DNA沒有影響試劑：（二）DNA的鑒定條件：二苯胺沸水浴條件下，DNA遇二苯胺被染成藍(lán)色沸水浴現(xiàn)象：（一）實(shí)驗(yàn)材料的選?。ǘ┢扑榧?xì)胞，獲取含DNA的濾液（三）除去濾液中的雜質(zhì)(純化)（四） DNA的析出與鑒定二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（一）實(shí)驗(yàn)材料的選取從下列材料中選取23種原則：菜花、香蕉、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜；魚卵、豬肝、雞血、哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞；在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌凡是含有DNA的生物材料都可以考慮選用DNA含量相對(duì)較高的組織

3、（二）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液1、動(dòng)物細(xì)胞2、植物細(xì)胞容易破碎需要溶解細(xì)胞膜雞血細(xì)胞溶液（防凝固加檸檬酸鈉）加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液想一想：為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體，水分大量進(jìn)入血細(xì)胞，使血細(xì)胞脹裂；加上攪拌作用，加速雞血細(xì)胞細(xì)胞膜、核膜破裂，從而釋放出DNA 加入一定的洗滌劑和食鹽 充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液想一想：洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？洗滌劑能溶解細(xì)胞膜，利于DNA釋放食 鹽NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中經(jīng)研磨可破碎細(xì)胞壁，使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放。若研磨不充分，會(huì)使提取的DNA量變少，導(dǎo)致看

4、不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。為了純化提取的DNA需要將濾液作進(jìn)一步處理討論：濾液/研磨液中可能含有哪些成分？答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)想一想：研磨的目的是什么，如果研磨不充分，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？1. DNA的溶解性2. DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性（三）除去濾液中的雜質(zhì)討論：方案二與方案三的原理有什么不同？方案二：利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，使提取的DNA 與蛋白質(zhì)分開；方案三：利用DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同， 使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離（四） DNA的析出與鑒定與濾液體積相等的冷卻的酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)95)，靜置23min，溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物 粗

5、提取DNA用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水1、DNA的析出2. DNA的鑒定 向兩支試管中分別加入 2mol/L NaCl 溶液5ml 其中一支試管中加入DNA絲狀物 各加入二苯胺試劑4ml 混勻后，置于沸水浴中加熱5min 待冷卻后，比較兩只試管中溶液的顏色變化 觀察現(xiàn)象：溶解絲狀物的溶液變?yōu)樗{(lán)色2.實(shí)驗(yàn)中NaCl的物質(zhì)的量濃度為2 molL和0.14 molL對(duì)DNA有何影響?1.用雞血材料，做DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是( )。A.稀釋血液、沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出C.使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA答：B答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出3.DNA遇二苯胺(沸水浴)會(huì)染成( ) A.磚紅色 B.橘黃色 C.紫色 D.藍(lán)色4.提