薔薇組織培養(yǎng)

1、薔薇組織培養(yǎng)小組成員：實(shí)驗(yàn)原理：植物細(xì)胞全能性，植物的每個(gè)細(xì)胞都包含著該物種的全部遺傳信息，從而具備發(fā)育成完整植株的潛在能力。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、初步掌握外植體植物材料的消毒、接種的無(wú)菌技術(shù)以及外植體愈 傷組織誘導(dǎo)的方法；2、掌握培養(yǎng)基母液的配制方法及基本操作；3、學(xué)習(xí)用母液法配制MS培養(yǎng)基以及掌握培養(yǎng)基滅菌的方法及操作 過程。4、通過組織培養(yǎng)的方法獲得完整的薔薇植株。材料、試劑及器具：1、材料薔薇帶腋芽的莖段2、試劑6-BA、瓊脂、蔗糖、IBA、NAA、75%酒精、NaClO4溶液 (或 0.1%HgCl2)、無(wú)菌水。3、實(shí)驗(yàn)設(shè)備及用具鑷子、無(wú)菌紙、超凈工作臺(tái)、酒精燈。實(shí)驗(yàn)步驟1、無(wú)菌材料的獲得：

2、取帶腋芽的莖段，用自來(lái)水沖洗100-200min后，用洗滌劑洗滌，無(wú)菌水沖洗干凈，經(jīng)75%乙醇處理8s后，再用0.1%HgCl2溶液表面滅菌8-10min，無(wú)菌水沖洗4-5次，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。2、分化與增殖培養(yǎng)培養(yǎng)基的配制：基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。1）誘導(dǎo)與分化培養(yǎng)基 MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+AgNO3 3.5mg/L+蔗糖 30g/L+瓊脂 6.5g/L（pH 值 5.8）2）繼代增殖培養(yǎng)基 MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.05mg/L+AgNO3 3.0mg/L+蔗糖 30g/L+瓊脂 6.5g/L3）生根 培養(yǎng)基 1/2MS+IBA0.2mg/L+

3、NAA0.2mg/L+AgNO3 4.5mg/L+蔗糖 20g/L+瓊脂 4.5g/L4）培養(yǎng)溫度為2226C,光強(qiáng)2000-2500Lux.在1）培養(yǎng)基中接種2-3個(gè)莖段共接12瓶，1周左右外 植體開始轉(zhuǎn)綠，膨大，2-3周從基部產(chǎn)生愈傷組織或直接發(fā) 生叢生芽。一般待芽伸長(zhǎng)時(shí)，將其分割轉(zhuǎn)移2）中繼代增殖， 使其繼續(xù)分化，每10d左右再分割一次，增值率可達(dá)8-15 倍，當(dāng)擴(kuò)大到一定數(shù)量時(shí)，把健壯小植株集中轉(zhuǎn)入3）培養(yǎng) 基中誘導(dǎo)生根，其余芽叢反復(fù)轉(zhuǎn)入新鮮的繼代培養(yǎng)基中擴(kuò)大 繁殖。3、誘導(dǎo)生根轉(zhuǎn)入3）培養(yǎng)基中的小植株，5d左右基部開始膨大，并有白色 的根基突起。3）培養(yǎng)基幼苗生根較快。5-7d開始生根，5-15d 即可移栽，根系鮮白充實(shí)，綠苗莖葉健壯。4、煉苗與移栽煉苗前揭開培養(yǎng)瓶的封口膜，煉苗5-7d，然后小心取出， 用自來(lái)水沖去苗基部的培養(yǎng)基，移栽到滅菌的腐殖質(zhì)與碎 爐渣（3:2）的混合基質(zhì)中，前期適當(dāng)遮陰并保持相對(duì)濕度 85%-95%，逐步降至70%，定期噴灑40%多菌靈80