富血小板血漿臨床應用技術課件

1、富血小板血漿的臨床應用目 錄2022/8/91 富血小板血漿概念Part 1 富血小板血漿發(fā)展歷史Part 2 富血小板血漿制備方法Part 3 富血小板血漿成分特點Part 4 富血小板血漿臨床應用及研究Part 5概 念2022/8/92富血小板血漿富血小板血漿凝膠 Platelet-rich plasma,PRP Platelet-rich plasma gel,PRG全血通過梯度離心分層后得到的富含血小板的血漿部分，它含有多種較豐富的生物活性因子。PRP被凝血酶等激活物激活后形成的膠凍狀物，它具有完整的三維結構和良好的組織相容性的纖維蛋白支架。PRP發(fā)展歷史2022/8/9319771

2、98419931997Harkedeng 首次分離制備出PRP，將其用于心外科手術后患者，取得良好的療效。Okuda等發(fā)現血漿中提取的富血小板血漿含多種生長因子。Hood等在PRP中加入凝血酶和鈣離子，提出了PG概念，將其所形成的凝膠狀物質用于組織修復。Whitman率先將自體PRP用于口腔頜面外科手術修補骨組織。PRP制備方法原理 根據血液成分在離心過程中的沉降速率不同來提取。制備方法 無統(tǒng)一標準，都需兩次離心。 全自動制備法、手工制備法。2022/8/94影 響 PRP血小板抗凝劑離心力離心時間離心次數凝膠激活劑濃 度活 性回收率PRP制備方法全自動法（血漿分離置換法） 利用血成分分離耗材

3、分離制備得到血小板血漿。特點 自動化程度高、血小板純度濃度高2022/8/95PRP制備方法手工制備法 都為兩步法，但離心力、離心時間略有不同。一般認為 初次200g離心10min,二次1200g離心10min,制備PRP中血小板計數約為全血6.17倍，效果較好。（血液離心后分3層：由下至上-紅細胞層、血小板濃縮物層、貧血小板血漿層）用中間層再次分離。2022/8/96PRP成分特點2022/8/97PRP纖維蛋白白細胞高濃度血小板其它PRP成分特點血小板成人：平均195*109/L，PRP約為全血3-17倍。血小板結構圖作用 生理性止血-通過黏附反應作用起到初期止血功能。 組織修復-通過黏附

4、于血管壁和插入內皮細胞之間來修復血管內皮，保持其完整性。 調控炎癥和免疫反應-通過調節(jié)其表面粘附及表面受體的表達來實現，如介導白細胞作用。2022/8/98PRP成分特點-血小板2022/8/99凝血酶血小板源性生長因子轉化生長因子胰島素樣生長因子表皮生長因子血管內皮細胞生長因子成纖維細胞生長因子血小板在凝血酶激活后聚集，由顆粒釋放生長因子（GF），可與目標受體上的結合激活誘導蛋白再生過程，如細胞增殖、基質形成、骨形成、膠原蛋白合成等。血小板PRP成分特點-血小板血小板源性生長因子（PDGF） 一種促細胞分裂蛋白，第一個被發(fā)現存在于血小板中，是趨化作用最強的骨生長因子之一。作用 可促進血管生成

5、、活化巨噬細胞，刺激成纖維細胞、血管平滑肌細胞、神經膠質細胞等中胚層細胞的增殖和活性，2022/8/910PRP成分特點-血小板轉化生長因子- （TGF-）以旁分泌或自分泌方式作用于成纖維細胞、骨髓干細胞、成骨前體細胞和破骨細胞。TGF免疫染色圖作用： 參與體內多種炎癥反應和組織修復，促進細胞外基質分泌，提高成纖維細胞增殖能力，刺激膠原蛋白1和纖維連接蛋白的生物合成以及骨基質的沉積，抑制破骨細胞形成和骨吸收發(fā)生。2022/8/911PRP成分特點-血小板胰島素樣生長因子（IGF）作用：趨化成纖維細胞，刺激蛋白質合成。刺激骨細胞增殖、分化，促進軟骨和骨基質生成。2022/8/912PRP成分特點

6、-血小板表皮生長因子（EGF）作用：新生血管重要的誘導因子?？纱龠M創(chuàng)口愈合、參與血管生成。刺激內皮細胞有絲分裂和細胞遷移。還可增加血管通透性。2022/8/913PRP成分特點-血小板血管內皮細胞生長因子（VEGF）是高度保守的同源二聚體糖蛋白。二條分子量各為24kDa的單鏈以二硫鍵組成二聚體。作用： 能直接作用于血管內皮細胞促進血管內皮細胞增殖，增加血管通透性。 誘導內皮細胞的增生和遷移，啟動血管生成反應。2022/8/914PRP成分特點-血小板成纖維細胞生長因子（FGFs）作用： 參與血管形成、損傷愈合和胚胎發(fā)育等過程，是關節(jié)軟骨細胞最具顯著效應的有絲分裂刺激原和形態(tài)原之一。2022/8

7、/915PRP成分特點-白細胞白細胞：參與機體免疫和防御功能幫助機體清除局部病原體、增強抗感染能力；幫助機體清除局部壞死組織，加快組織修復。受血小板分泌生長因子趨化，本身可分泌生長因子直接參與組織修復。2022/8/916PRP成分特點-其它其它成分如： 纖維連接蛋白（FN） 血小板反應蛋白（TSP） 骨連接蛋白（ON） 玻璃體連接蛋白（VN）作用： 對傷口感染、促進組織修復及增加新生血管內膜的形成發(fā)揮重要作用。2022/8/917PRP2022/8/918 優(yōu)點一 優(yōu)點二來源豐富、取材方便、操作簡單、價格低廉具有自源性，不會出現免疫排斥反應，沒有異體移植傳播疾病風險PRP2022/8/919

8、 優(yōu)點三 優(yōu)點四含高濃度多種生長因子，且比例接近正常人，具備最佳協(xié)同效應，（避免單一因子不能良好誘導創(chuàng)面愈合）PRP凝膠具有極好粘附性，使用時可較好的黏附在創(chuàng)面上而不流失，避免損失，保證局部較高的生長因子濃度。PRP2022/8/920 優(yōu)點五 優(yōu)點六因含有較多的白細胞和單核細胞，可起到防止感染作用。避免了異體和人工合成組織的致畸危險，同時各種因子表達良好，避免了誘導腫瘤形成的可能。PRP臨床應用及研究2022/8/921骨缺損修復軟骨損傷修復預防骨感染急性創(chuàng)面慢性難愈合傷口皮膚脂肪組織液化急性運動損傷慢性運動損傷頜骨相關疾病牙周病上頜竇手術燒傷整形科燒傷創(chuàng)面脂肪移植皮膚組織再生骨科運動損傷普

9、外科口腔頜面外科2022/8/922口腔頜面外科2022/8/923實驗方法：將患者因正畸拔出的患牙傳代培養(yǎng)，取第5代細胞作為試驗用牙周膜成纖維細胞來源；人病牙制成1mm厚根片；2次離心法制備PRP；觀察不同濃度PRP（A組10%、B組15%、C組20%、D組30%、對照組無PRP）對人牙周膜成纖維細胞在脫礦的病變牙根表面附著情況及膠原形成情況。研究一研究一2022/8/924結論： PRP可促進牙周細胞在病變牙根表面的附著，其中20%濃度最佳。 PRP可促進牙周細胞外基質膠原的形成?？谇活M面外科相關研究2022/8/925Whitman用PRP聯(lián)合骨移植治療骨缺損獲得成功。Suba等應用磷酸

10、三鈣復合PRP治療犬牙槽骨缺損，發(fā)現PRP可明顯促進骨再生。Lekovic研究發(fā)現PRP能促進牙槽骨再生。張麗等的研究證實PRP聯(lián)合植骨術治療牙周鄰面骨缺損效果優(yōu)于單純植骨術。Philippart等將PRP混合物充填于上頜竇中，6個月組織學觀察顯示有活躍的骨新生活動。Rodrignez等在上頜竇區(qū)植入PRP及種植體，移植成功率達92.9%，表明PRP可加快骨再生速度，提高骨再生質量。頜骨相關研究牙周病上頜竇 手術2022/8/926骨 科2022/8/927研究二方法：選擇股骨干骨不連、骨缺損2需行骨移植治療的40例患者，隨機分為實驗組(脫蛋白牛松質骨+PRP)及對照組(脫蛋白牛松質骨)，每組

11、20例。術后7和1、2、3、6、12個月定期攝線片檢查，參照Lane-Sandhu的線評分標準評分,并比較兩組骨痂灰度、愈合情況及愈合速度。2022/8/928研究二結果：如表1（線評分標準）評分，在傷口愈合天數及傷口引流量上，實驗組明顯少于對照組。如表2、3在術后實驗組的成骨率、成骨速率明顯高于對照組，說明PRP有較好的促進骨缺損修復的作用。骨科相關研究2022/8/929Marx等發(fā)現復合PRP的移植骨修復速度比單純用移植骨修復快1.62-2.16倍。Bielecki等用PRP經皮注射治療骨不連取得良好療效。Drengk等研究顯示PRG作為細胞支架能明顯促進軟骨細胞遇見充質干細胞的增生和向

12、軟骨細胞分化。Wu等認為PRP可以作為軟骨細胞的載體，治療關節(jié)軟骨缺損。Bielecki的研究顯示血小板-白細胞凝膠在體外可抑制金葡、大腸桿菌生長，提示PRP可作為“生物抗菌制劑”。骨缺損修復軟骨損傷修復預防骨 感染2022/8/930運動醫(yī)學2022/8/931研究三方法：患者11例跟腱有炎癥19處，每次制備患者自體PRP2ml行跟鍵周圍注射。每周1次，5次為1個療程，治療期間患者停用一切藥物及其他的藥物輔助治療?；颊唠S訪3一8個月，平均6個月，觀察療效。結果：跟腱有炎癥的地方19處，治療后痊愈5處，顯效13處，治療有效率94.74%。結論：PRP對跟腱炎療效肯定，是一種安全有效的方法。運動

13、損傷相關研究2022/8/932急性運動損傷Sanchez的研究發(fā)現應用PRP患者在關節(jié)活動度、功能恢復及術后并發(fā)癥方面均優(yōu)于單純修復患者。耿震的研究表明PRP在改善肌腱愈合質量的同時也加速了愈合進程。Radice的研究顯示，應用髕韌帶進行前交叉韌帶重建時應用PRP，可將韌帶成熟時間從12個月縮短到3.6個月。Sanchez等報道肌肉拉傷運動員在超聲波引導下局部注射PRGF后，功能恢復時間明顯縮短，且運動訓練后未出現肌肉纖維化現象。運動損傷相關研究2022/8/933慢性運動損傷Mishra通過對難治性肱骨外上髁炎患者注射PRP發(fā)現，只有非激活狀態(tài)并同時含有濃縮血小板和白細胞的PRP有效。Ba

14、rrett發(fā)現慢性跖腱膜炎患者在B超引導下局部注射PRP治療效果好。王虎等的研究表明，和類固醇比PRP治療跟痛癥取得了良好療效。Kon E等用PRP和透明質酸鹽對照注射入膝關節(jié)治療骨性關節(jié)炎，發(fā)現其療效優(yōu)于傳統(tǒng)的透明質酸鹽。2022/8/934普外科2022/8/935研究四方法：抽取難愈合傷口患者靜脈血，與氯化鈣、凝血酶混合后制成PRP凝膠敷于患者創(chuàng)面，凡士林紗布填塞。每7天換1次，3次一療程。評估治療后傷口變化情況。2022/8/936研究四結果：29例患者在三次使用PRP后傷口明顯縮小，大部分壞死組織清除，組織色澤紅潤血供良好，無明顯滲液和膿液。3例效果不明顯。治療3個月：10例傷口完全

15、愈合，形成瘢痕組織；11例創(chuàng)面覆蓋率75%，9例50%-75%，2例50%；治愈率31.2%，顯效率93.8%。結論： PRP修復慢性難愈合傷口是一種有效、實用的治療方法。普外科相關研究2022/8/937Bhanot S的研究指出，PRP可加速表皮化生長，減輕創(chuàng)傷后局部腫脹和疼痛，減少術后傷口滲出。Man D將PRP凝膠用于皮瓣移植術，發(fā)現血管創(chuàng)出血被凝膠封閉，提高了手術成功率。Carter CA等用PRP修復馬小腿傷口發(fā)現，PRP加快上皮細胞增殖，促進傷口膠原合成以及血管再生。郭彥杰等應用PRP創(chuàng)面內注射治療下肢慢性難愈合傷口，療效顯著。夏江霓等對慢性潰瘍患者應用PRP凝膠治療，發(fā)現PRP

16、能更好的促進傷口處肉芽組織形成。Giorgio研究認為PRP可激發(fā)細胞增殖分化和微血管的形成，增強局部組織自我修復能力，從而有利于切口愈合。劉曉韜的研究顯示，應用PRP注入脂肪液化切口深部的患者愈合時間明顯減少，提示PRP可以減輕疼痛、術后出血，減少術后并發(fā)癥。急性創(chuàng)面 慢性難愈合傷口手術切口脂肪液化2022/8/938燒傷整形科2022/8/939研究五方法：10只裸鼠隨機選擇一側背部皮下組織作為PRP組(0.5 mL人顆粒脂肪+0.1 mLPRP)受區(qū)，一側作為對照組(0.5 mL 人顆粒脂肪+0.1 mL 磷酸鹽緩沖液)受區(qū)。于植入后10、90d處死后取出移植物進行大體形態(tài)觀察、體積測定

17、及組織學檢測。2022/8/940研究五結果：術后90dPRP組移植物存留量明顯多于對照組，且周圍血供更豐富，觸之質地較柔軟，更接近正常脂肪組織。在術后10、90d，PRP組存留體積均大于對照組。2022/8/941研究五脂肪移植物組織結構觀察（蘇木精-伊紅染色，X100） 對照組 PRP組10d90d結果：術后10、90d PRP組脂肪細胞均維持較好形態(tài)，細胞間隙保持較好，僅有少量脂肪空泡形成。對照組移植90d后組織結構較混亂，大量結締組織及脂肪空泡形成，部分出現壞死，僅少量細胞能夠維持正常的形態(tài)。2022/8/942研究五結果：定量比較發(fā)現，在各時間點，PRP組均比對照組具有更多正常脂肪細

18、胞面積及微血管數量，比對照組具有更少脂肪空泡面積，說明PRP明顯改善了移植脂肪組織的組織學質量。 2022/8/943燒傷整形科相關研究Nalbonesi等應用PRP成功治療了14例因接受面部整形手術導致皮膚和軟組織損傷的患者。Hum等研究發(fā)現，局部注射PRP療效明顯優(yōu)于抗生素軟膏好濕性敷料，可使傷口愈合率超過80%。黃云嚴的將PRP凝膠用于治療60例面部二度燒傷創(chuàng)面，發(fā)現在傷后早期使用PRP凝膠可使創(chuàng)面愈合速度加快、愈合率提高，減少瘢痕形成。2022/8/944其它2022/8/945研究六方法：健康大耳白兔10只雙側面神經上頰支橫斷后置入硅膠神經再生導管(自制) ，采用雙側自身對照，隨機分

19、為實驗側和對照側。實驗側注入PRP，對照側注入生理鹽水；8周后進行相關檢測分析評價面神經恢復再生情況。 2022/8/946研究六2022/8/947結果：面神經損傷后8周兔實驗側及對照側均能引出清晰穩(wěn)定的面神經復合動作電位，面神經損傷兔實驗側動作電位潛伏期明顯短于對照側，而波幅則高于對對照側，說明PRP能促進面神經功能的恢復。 研究六2022/8/948研究六結果：顯微圖像分析也表明，面神經損傷后8周實驗組有髓軸突數目，直徑及面積明顯高于對照組。表明發(fā)生面神經損傷后，早期應用PRP有利于面神經的修復和再生。2022/8/949研究七方法：離心法分離兔全血獲得PRP。采用5%PRP作用于兔角膜基質細胞，CCK-8 ( 細胞增殖-毒性檢測試劑盒) 法檢測 PRP促角膜基質細胞增殖的作用。PRP與凝血酶激活劑以 9:1的比例制備富血小板凝膠，對制備的富血小板凝膠進行組織形態(tài)學、對角膜基質細胞的作用、黏附性、生物相容性等多方面觀察與評價。2022/8/950結果：培養(yǎng)后測定3組細胞吸光度OD值可見，對照組OD值隨培養(yǎng)時間延長而不增加，增殖基本停滯; PRP組增加速度較FBS組及對照組快。表明，PRP與 FBS一樣具有促角膜基質細胞增殖的作用。研