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文檔簡介
1、第39講 細胞工程考點二 動物細胞工程固必備知識提關鍵能力固必備知識一、動物細胞工程的技術手段主要有動物細胞培養(yǎng)、_、_、單克隆抗體的制備等。_是動物細胞工程的基礎。動物體細胞核移植動物細胞融合動物細胞培養(yǎng)二、動物細胞培養(yǎng)1.過程2.培養(yǎng)條件(1) 培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理培養(yǎng)液中添加一定量的_定期更換_,清除代謝產物一定量的抗生素培養(yǎng)液(2) 營養(yǎng):除糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素之外,通常還需加入_等一些天然成分。血清、血漿無菌、無毒 的環(huán)境(4) 細胞代謝氣體環(huán)境三、動物體細胞克隆技術(核移植技術)1.原理:_。動物細胞核具有全能性2.哺乳動物核移植分類:_移植和體細胞
2、核移植。胚胎細胞核3.體細胞核移植過程(以高產奶??寺槔?.選用去核卵母細胞的原因:卵母細胞比較大,易操作;卵母細胞細胞質多,_,含有_的物質。5.體細胞核移植技術存在的問題: _ 。營養(yǎng)物質豐富促進核全能性表達克隆動物普遍存在著健康問題、表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷等四、動物細胞融合1.動物細胞融合原理:_。細胞膜具有流動性2.動物細胞融合方法:物理法(離心、振動、電激)、化學法(聚乙二醇)和_。生物法(滅活的病毒)3.結果:形成雜交細胞。4.意義:突破了遠緣雜交不親和的障礙。5.應用:制備單克隆抗體。五、單克隆抗體的制備1.單克隆抗體的制備過程雜交瘤細胞所需抗體(2)用于疾病的診斷、治療、預防
3、。如單抗診斷試劑盒,具有準確、高效、簡易、快速的優(yōu)點;“生物導彈”定向消滅癌細胞,不損傷健康細胞。2.單克隆抗體的特點:_,并可大量制備。特異性強、靈敏度高3.應用(1)在理論研究中具有重要意義。 5.核移植產生的克隆動物與提供細胞核的親本性狀可能不同,其原因主要包括以下幾個方面: (1)克隆動物的細胞質基因來源于另一個親本,與植物組織培養(yǎng)不同(來自一個親本),即克隆動物遺傳物質來自兩個親本。 (2)在發(fā)育過程中可能發(fā)生基因突變、染色體變異,從而導致性狀改變。 (3)外界環(huán)境條件的影響引起不可遺傳的變異。下圖可表示細胞融合技術的一些過程,請據(jù)圖回答下列問題:滅活的病毒雜交瘤細胞選擇培養(yǎng)基專一抗
4、體體外培養(yǎng)小鼠腹腔甲提關鍵能力考向1 動物細胞培養(yǎng)和核移植技術滅活的病毒B淋巴(漿)骨髓瘤(2) 若圖示為植物體細胞雜交過程,則在甲、乙融合之前,需要用_(填工具酶)制備_。這項工程的意義是_。纖維素酶和果膠酶原生質體克服了遠緣雜交不親和的障礙,擴大了親本組合的范圍解析 在植物體細胞雜交過程中,需要對甲、乙細胞先用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁,然后再誘導甲、乙的原生質體融合。該技術可以克服遠緣雜交不親和的障礙,擴大親本組合的范圍。(3) 由甲、乙融合得到丙細胞的基本原理是_。細胞膜具有流動性解析 甲、乙細胞融合形成丙細胞,利用了細胞膜的流動性。(1) 獲得食蟹猴的體細胞核移植技術難度明顯高于胚胎
5、細胞核移植技術,原因是_,恢復其全能性較難。體細胞分化程度高解析 由于體細胞分化程度高,全能性難以恢復,因此獲得食蟹猴的體細胞核移植技術難度明顯高于胚胎細胞核移植技術。(2) 進行過程時,培養(yǎng)成纖維細胞所需的條件有營養(yǎng)、氣體環(huán)境以及_、_。無菌、無毒的環(huán)境(3) 過程中通過_,將成纖維細胞注入去核的_期的卵母細胞中。顯微操作翻譯(5) 若獲得的體細胞核移植的食蟹猴與供體食蟹猴性狀不完全相同,從遺傳物質的角度分析其原因是_。卵母細胞細胞質中的遺傳物質會對克隆動物的性狀產生影響解析 從遺傳物質的角度來說,體細胞核移植的食蟹猴與供體食蟹猴性狀不完全相同,是因為卵母細胞細胞質中的遺傳物質會對克隆動物的
6、性狀產生影響??枷? 動物細胞融合與單克隆抗體既能大量增殖,又能產生專一的抗體解析 雜交瘤細胞具有兩種細胞的遺傳物質,既能大量增殖,又能產生專一的抗體。(3) 由圖可看出,單克隆抗體制備過程運用了_和_的動物細胞工程技術手段。動物細胞融合動物細胞培養(yǎng)解析 從圖中可看出,單克隆抗體的制備運用了動物細胞融合技術和動物細胞培養(yǎng)技術。(4) 動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基中含有糖、氨基酸、無機鹽、維生素等,與植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基有所不同的是,通常動物細胞培養(yǎng)基中還含有_。血清、血漿解析 動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基與植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基相比,最大的不同是動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基中含有血清、血漿。(5) 在動物細胞融合過程中
7、,需要將所選取的組織細胞離散開,以利于細胞融合,可用_處理離體組織。胰蛋白酶(或膠原蛋白酶)解析 細胞融合是指兩個或多個細胞結合形成一個細胞的過程,為使動物細胞離散開來,可用胰蛋白酶(或膠原蛋白酶)處理離體組織。(6) 圖中有兩次篩選過程,其中步驟的目的是篩選出_,步驟的目的是篩選出_。雜交瘤細胞能產生專一抗體的雜交瘤細胞解析 由于細胞融合的方式有多種,會產生多種融合細胞,因此需進行多次篩選。從圖中可看出,步驟是用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞,步驟是篩選出能產生所需抗體的雜交瘤細胞。解析 培養(yǎng)雜交瘤細胞的方法有體內培養(yǎng)和體外培養(yǎng)。前者的優(yōu)點是培養(yǎng)條件簡單,無須配制培養(yǎng)液;后者的優(yōu)點是在短期內可獲
8、得大量單克隆抗體。單克隆抗體制備過程中兩次篩選分析項目第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導融合后會得到多種融合細胞,另外還有未融合的細胞由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激,因此經選擇性培養(yǎng)獲得的雜交瘤細胞中有能產生其他抗體的細胞篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選:未融合的細胞和同種細胞融合后形成的細胞(“ ”細胞、 “瘤瘤”細胞)都會死亡,只有融合的雜交瘤細胞(“ 瘤”細胞)才能生長用多孔培養(yǎng)板培養(yǎng),在每個孔中只有一個雜交瘤細胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測,經多次篩選得到能產生專一抗體的細胞群篩選目的得到雜交瘤細胞得到能分泌所需抗體的雜交瘤細胞 .(2021吉林測試)胃癌是我國發(fā)生率很高的一種惡性疾病,制備抑制胃癌細胞增殖的單克隆抗體對治療胃癌具有重要意義??刮赴﹩慰寺】贵w制備過程如下圖。(1) 抗胃癌單克隆抗體制備過程中要用到_技術。解析 單克隆抗體制備過程中要用到動物細胞培養(yǎng)和動物細胞融合技術。動物細胞培養(yǎng)和動物細胞融合(2) 甲代表_細胞。(3) 誘導骨髓瘤細胞與甲融合,可用的誘導因素有_等(寫出兩種)。聚乙二醇、滅活的病毒、電激解析 誘導動物細胞融合,常用的誘導方法有物理法(電激)、化學法(聚乙二醇)、生物法(滅活的病毒)等。人的胃癌細胞(5) 在甲、丙及骨髓
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