大蒜新素及其衍生物對兔癢螨的體外殺螨活性研究

1、.：.；大蒜新素及其衍生物對兔癢螨的體外殺螨活性研討任方奎 何小燕 李逐波*通訊西南大學藥學院，:zb63163*通訊西南大學藥學院，:zb63163西南大學藥學院，重慶北碚 400716來源：原作 收稿：2021-11-21 南寧獸藥科技網(wǎng) 上傳時間：2021-12-1 編輯:dongy大蒜新素是從大蒜Allium sativum中提取的一種具有很強刺激性的揮發(fā)性油狀物質(zhì)，其化學稱號為二烯丙基三硫醚，該化合物可以人工合成1。大蒜新素具有很強的抗菌2、抗病毒3、抗腫瘤4、抗癌5等多種藥理活性。但大蒜新素在抗寄生蟲方面的報道很少，Lun Z R等6 曾報道大蒜新素可以治療賈第蟲病和有溶組織內(nèi)阿米

2、巴Entamoeba histolytica和滴蟲性陰道炎Trichomonas vaginalis等疾病。目前為止，大蒜新素及其衍生物對兔癢螨的研討還未見報道。本文主要研討大蒜新素及其衍生物對兔癢螨的體外殺螨活性，測定半數(shù)致死時間LT50和半數(shù)致死濃度LC50，并對大蒜新素及其衍生物的構(gòu)效關(guān)系進展了初步討論。1 實驗資料1.1 供試動物自然感染螨病的家兔6只，雌雄兼有，平均體重2.00.5kg。由重慶市北碚區(qū)某兔場提供。1.2 儀器與試劑倒置顯微鏡，20孔細胞培育板，挑蟲針，大蒜新素南通鑫利化工，批號：XY070705，二丁烯三硫醚、二戊烯三硫醚和二己烯三硫醚均有本實驗室合成7，伊維菌素河北

3、威遠動物藥業(yè)，硫軟膏成都明日制藥。2 方法2.1 藥品配制精細稱取1.0g大蒜新素及其衍生物于10mL的容量瓶內(nèi)，加0.1mL吐溫-80用水定容至刻度，混勻，即得100mg/mL的貯藏藥液，4oC冰箱中保管備用。精細稱取0.25g的阿維菌素于10mL的容量瓶內(nèi)，加0.1mL的吐溫-80，用水定容至刻度，混勻，即得濃度為25mg/mL的阿維菌素，作為陽性對照液。取0.1mL的吐溫-80于10mL的容量瓶內(nèi)用水定容，作為陰性對照液。2.2 離體殺螨實驗892.2.1 癢螨的采集用小鑷子剝?nèi)∽匀桓腥掘x病家兔的耳道痂皮及膿血置平皿內(nèi)，平皿邊緣涂少量的硫軟膏。置30oC溫箱內(nèi)保管30min使蟲爬出，借

4、助放大鏡，用挑蟲針挑取螨蟲，在顯微鏡下對兔癢螨的形狀學進展察看10，鑒定為兔癢螨。2.2.2 殺螨活性的測定將實驗分為藥物組、陽性對照組和陰性對照組。藥物組：在20孔細胞培育板的每孔各參與100mg/mL供試藥物0.2mL。陽性對照組：20孔細胞培育板每孔各參與10mg/mL的阿維菌素0.2mL。陰性對照組：在培育板的每個孔中加0.2mL的陰性對照液。每組設(shè)置3個反復。每孔放置癢螨10只，在1040倍顯微鏡下察看，分別記錄螨的死亡時間。斷定規(guī)范：蟲體淋巴液流動，蟲體不動但刺激有反響或長時間微弱顫抖為麻醉；蟲體淋巴液靜止，蟲體完全不動，刺激無反響，斷定為死亡。2.2.3 半數(shù)致死時間LT50的測

5、定將大蒜新素及其衍生物的貯藏液用水稀釋成濃度為20mg/mL，挑取10只螨蟲置于20孔的細胞培育板中，每個孔加0.2mL藥物，設(shè)置3個反復，同時以陰性對照液為陰性對照。給藥后用顯微鏡察看，直至一切癢螨死亡，記錄每個時段的死亡情況。2.2.4 半數(shù)致死濃度LC50的測定將大蒜新素及其衍生物貯藏液先水稀釋成4mg/mL, 再倍比稀釋成2.0mg/mL、1.0mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL和0.125mg/mL5個不同濃度，每個濃度設(shè)置3個反復，同時以陰性對照液為陰性對照。在培育板的實驗孔中各加0.2mL不同濃度的藥物, 每孔挑入10只螨蟲。將培育板放入測試環(huán)境(25oC，相對濕度

6、為75%)，24h后鏡檢死亡情況。2.3 統(tǒng)計分析根據(jù)機率值分析法，用Excel的卡方檢驗運算程序自動判別毒力回歸方程的適宜性與否11，計算出LT50和LC50 。用SPSS 12.0 軟件對實驗數(shù)據(jù)進展多要素方差分析。3 結(jié)果與分析3.1 殺螨活性從表1中可以看出，100mg/mL的大蒜新素5min開場出現(xiàn)螨蟲死亡，13min全部死亡，25mg/mL的阿維菌素5min開場出現(xiàn)螨蟲死亡，17min螨蟲全部死亡，可見100mg/mL的大蒜新素與25mg/mL的阿維菌素的殺螨活性差別顯著P0.05。從表1中可以看出，一樣濃度下的大蒜新素衍生物的完全殺死螨蟲所需求的時間長于大蒜新素，大蒜新素與二丁烯

7、三硫醚，二己烯三硫醚之間的差別顯著P0.05。二丁烯三硫醚、二戊烯三硫醚與阿維菌素的差別不顯著P0.05，與二己烯三硫醚的差別極顯著P0.01。大蒜新素衍生物之間的差別顯著P0.05?？梢?，100mg/mL大蒜新素與25mg/mL的阿維菌素殺螨活性相當，從圖3中可以看出隨著鏈的延伸大蒜新素及其衍生物的殺螨時間呈現(xiàn)“N規(guī)律變化。表1 大蒜新素及其衍生物對兔癢螨的離體殺螨活性Table 1 Allicin and allicin derivatives for the acaricidal activity against Psoroptes Cuniculi in vitro組別藥物螨蟲數(shù)開場死

8、亡的時間/min全部死亡的時間/min藥物組100mg/mL大蒜新素1051dD132eD100mg/mL二丁烯三硫醚10101cC202cC100mg/mL二戊烯三硫醚1071dCD152deCD100mg/mL二己烯三硫醚10202bB353bB陽性對照組25mg/mL阿維菌素1051dD171cdCD陰性對照組10108060aA28800aA同一列中右上角標有不同小寫字母的數(shù)據(jù)之間差別顯著(P0.05),標有不同大寫字母的數(shù)據(jù)之間差別極顯著(P0.9840)，即大蒜新素的毒力與作用時間呈正相關(guān),得出大蒜新素、二丁烯三硫醚、二戊烯三硫醚和二己烯三硫醚的LT50分別為0.6267、1.10

9、36、0.8274和2.2308。大蒜新素及其衍生物之間的LT50存在極顯著差別(P0.01)。陰性對照組無癢螨死亡?？梢?，20mg/mL的大蒜新素及其衍生物有較小的LT50,大蒜新素及其衍生物的的毒性比較大。從圖3中可以看出隨著碳鏈的延伸LT50的數(shù)值呈現(xiàn)“N變化。表2 大蒜新素及其衍生物對兔癢螨的毒力LT50的幾率值回歸分析Table 2 Probit regression analysis of toxicityLT50of the Allicin and allicin derivatives Psoroptes Cuniculi in vitro藥品濃度mg/mL回歸方程LT50/h

10、卡方值2相關(guān)系數(shù)r大蒜新素20y=5.5181 +2.5533 x0.6267D0.00040.9999二丁烯三硫醚20y=4.9026 +2.2738 x1.1036B0.10080.9911二戊烯三硫醚20y=5.1675+2.0347 x0.82740.14300.9968二己烯三硫醚20y=4.2856+2.0503 x2.23080.15570.9840同一列中右上角標有不同大寫字母的數(shù)據(jù)之間差別極顯著(P0.9581,闡明癢螨的死亡率與濃度間具有依賴性關(guān)系，表2。大蒜新素、二丁烯三硫醚、二戊烯三硫醚、二己烯三硫醚的LC50分別為0.6509、1.098、0.5330、1.2071。

11、大蒜素新素及其衍生物之間的LC50差別極顯著P0.01。陰性對照組無癢螨死亡。表3 大蒜新素及其衍生物對離體兔癢螨毒力LC50的幾率值回歸分析Table 3 Probit regression analysis of toxicityLC50of the allicin and allicin derivatives Psoroptes Cuniculi in vitro濃度mg/mL回歸方程半數(shù)致死濃度/h卡方值2相關(guān)系數(shù)大蒜新素y=5.305x+1.63310.6509D0.23310.9914二丁烯三硫醚y=4.9315x+1.68411.0980B0.87940.9581二戊烯三硫醚y

12、=5.4970 x+1.81850.5330C1.19560.9633二己烯三硫醚y=4.8820 x+1.44481.2071A0.48200.9688同一列中右上角標有不同大寫字母的數(shù)據(jù)之間差別極顯著(P0.05。4.2 阿維菌素是近年研發(fā)的一種大環(huán)內(nèi)酯類殺蟲藥，雖是一種低毒、高效的抗寄生蟲藥，具有很強的殺螨活性，但近年發(fā)現(xiàn)這類藥在環(huán)境中殘留會呵斥不良的生態(tài)影響，目前曾經(jīng)有螨蟲對阿維菌素類藥產(chǎn)生抗性的報道12。大蒜新素及其衍生物可以經(jīng)過化學的方法合成，作為中藥成分的大蒜新素具有毒性低、副作用少、殘留低等優(yōu)點，與目前廣泛運用的生物殺蟲劑阿維菌素的殺菌活性相當，因此，大蒜新素及其衍生物作為植物

13、源的殺蟲劑具有寬廣的運用前景。至于大蒜新素及其衍生物能否作為殺螨劑還須進一步深化研討，殺螨的機理也還需求進一步研討。4.3 實驗結(jié)果看出，大蒜新素及其衍生物對癢螨作用快，毒性強，具有較小的半數(shù)致死時間LT50和半數(shù)致死濃度LC50，從圖3中可以看出隨著碳鏈的延伸對螨蟲的LT50和LC50呈現(xiàn)“N樣曲線的變化規(guī)律。大蒜新素和二戊烯三硫醚的殺螨活性、LT50和LC50類似，二丁烯三硫醚的作用次之，二己烯三硫醚的作用最低。這能夠與化合物的疏水性、硫原子的電荷及立體的變化等多種要素相互作用的結(jié)果有關(guān)。參考文獻1楊始剛.大蒜新素二烯丙基三流化合物的化學分析J.理化檢驗-化學分冊，2003，33:142-

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