釘螺及感染性釘螺的室內(nèi)飼養(yǎng)方法

1、釘螺及感染性釘螺的室內(nèi)飼養(yǎng)方法通過人工方法將湖北釘螺制備成血吸蟲感染性釘螺，確定釘螺感染的最佳條件，建立釘螺人工感染傳代的室 內(nèi)株，為研究其感染活性、遺傳變異和疫苗等提供實驗室依據(jù)。方法：用尼龍絹篩集卵法收集日本血吸蟲成 熟蟲卵，常規(guī)法孵化毛蝴。將釘螺與毛蝴按不同比例進行感染，感染方式分為個體感染和集體感染。個體感染 隨機分6組（I用組），每組200只釘螺，每只釘螺置單孔內(nèi)分別感染，釘螺感染毛蝴比例分別為1： 0,1： 5,1： 10，1： 15，1： 20，1： 25;集體感染隨機分6組（可XII組），每組200只釘螺，按組別集中感染，訓XII組釘 螺感染毛蝴比例分別同I用組。然后對每組釘螺

2、的感染數(shù)、死亡數(shù)及尾蝴逸出量進行比較,確定最佳感染 方法和比例。以第1代人工感染性釘螺逸出的尾蝴感染實驗動物，獲取成熟蟲卵并孵化毛蝴，然后采用個體感 染方式，以1： 15的比例繼續(xù)感染釘螺，獲得第2代人工感染性釘螺。比較第1代與第2代人工感染性釘螺的 感染數(shù)、死亡數(shù)及尾蝴逸出數(shù)。通過動物感染實驗，比較人工第1代、第2代感染性釘螺與自然感染性釘螺 日本血吸蟲成蟲發(fā)育率、每克糞卵數(shù)（fecaleggspergram，F(xiàn)EPG）及每克肝卵數(shù)（livereggspergram，LEPG）。結(jié)果：個體感染I用組的釘螺感染數(shù)分別為00,22.74.2,31.74.5,53.05.3,39.35.9,32.

3、74.7;釘螺 死亡數(shù)分別為 21.73.1,25.03.6,31.34.9,44.76.5,78.39.5,89.713.6;釘螺平均逸蝴量為 00,308.0 96.6,428.1 146.2,527.0171.1,571.4148.9,602.9356.3。集體感染訓XII組,釘螺感染數(shù)分別為 00,12.3 2.5,18.7 4.7,28.3 4.2,33.3 4.7,29.3 5.5;釘螺死亡數(shù)分別為22.7 3.8,23.7 4.5,28.3 5.5,47.0 9.5,75.7 8.5,86.3 12.2;釘螺平均逸蝴量為 0 土 0,244.5 57.3,292.3 74.8,3

4、47.1 100.8,477.2 142.1,447.3 161.4。用人工制備的第1代感染性釘螺對血吸蟲進行人工傳代研究，成功獲得了人工第2代感染性釘螺, 感染率為24.65%,釘螺死亡率為24.50%;與人工第1代釘螺26.65%的感染率及22.35%的死亡率差異均無統(tǒng) 計學意義（P0.05）。在尾蝴感染動物試驗中,人工第1代、第2代感染性釘螺與自然感染性釘螺的成蟲發(fā) 育率分別為68.50%,73.50%,71.00%,3組間差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）;自然感染性釘螺和人工第1代、第 2代感染性釘螺的FEPG分別為 1503269,1683233,1541 117;LEPG分別為 66

5、41 1819,6272 1419,7263 1643,3組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。結(jié)論：通過用人工感染的方法可以獲得日本血吸蟲感染 性釘螺。個體感染方式優(yōu)于集體感染方式，感染時釘螺與毛蝴的最佳比例為1： 15。人工感染性釘螺經(jīng)傳代 后，第1代與第2代釘螺在感染數(shù)、死亡數(shù)及尾蝴逸出數(shù)等方面無明顯差別。比較人工第1代、第2代感染 性釘螺與自然感染性釘螺的成蟲發(fā)育率、FEPG及LEPG,差異也無統(tǒng)計學意義，證明人工傳代的血吸蟲尾蝴 （室內(nèi)株）能達到自然野生株尾蝴的感染效果。目的：探求適宜的釘螺飼養(yǎng)方法及日本血吸蟲尾蝴釋放的最佳條件，為血吸蟲病防治科研課題的開展提供 可行的實驗方法。方

6、法：將200只釘螺分為A、B、C、D四組，采用不同的光照、容器、飼料等條件飼養(yǎng)， 比較觀察不同條件下釘螺存活時間與釋放尾蝴的次數(shù)及釘螺死亡率；設置15組不同的條件，觀察釋放尾蝴 的時間與尾蝴數(shù)量。結(jié)果：用混合飼料飼養(yǎng)、光照射、活動空間大的C組，釘螺存活時間為45 d，釋放尾 蝴4次；用硯臺飼養(yǎng)、無光照射B、A組及用奶粉飼料、光照射D組，釘螺存活時間分別為10 d、15 d、 29 d；釋放尾蝴次依次為1、2、3次；用自來水、塑料網(wǎng)罩組5 h無尾蝴釋放；用脫氯水或涼開水、晴天、 溫度2930 C組，30180 min每組平均釋放尾蝴1 783條；同樣條件下，溫度2526 C組，60180 min

7、每組平均釋放尾蝴1 733條；陰雨天組，90180 min每組平均釋放尾蝴716條。結(jié)論：溫度為24 28 C，白日持續(xù)日光燈照射，去氯水保濕，活動空間較寬的環(huán)境中，用泥土混合飼料飼養(yǎng)釘螺，活動狀態(tài)較好, 生存時間相對較長，可多次釋放尾蝴；在2630 C溫度，晴天，用脫氯水或涼開水，加鋼絲網(wǎng)罩，尾蝴釋放 快、數(shù)量多?！娟P鍵詞】飼養(yǎng)；釘螺；日本血吸蟲尾蝴；觀察 基金項目：湖北科技攻關計劃資助項目（2006AA402C51）釘螺是日本血吸蟲的中間宿主，所釋放的尾蝴可感染動物引起血吸蟲病。血吸蟲病嚴重危害人和動物 健康，殺滅釘螺，預防尾蝴感染是血吸蟲病防治的重要研究課題。而血吸蟲病防治科研課題的開展

8、，時常 需要飼養(yǎng)釘螺與釋放尾蝴，為探求適宜的釘螺飼養(yǎng)方法及尾蝴釋放的最佳條件，特進行本實驗研究。1材料1.1釘螺由江蘇省血吸蟲病防治研究所提供陽性釘螺，試驗當日釋放日本血吸蟲尾蝴。1.2釘螺飼料1.2.1混合飼料將干燥的泥土和兔飼料(玉米35%、尾粉35%、豆粕30%、魚粉8%、含鈣磷的礦粉1.5%、食鹽0. 5%)分別碾碎，按1:2的比例混勻，并用鐵絲篩篩出細粉末，烤干備用。兔飼料由長江大學醫(yī)學院動物中 心提供。1.2.2奶粉飼料奶粉：三鹿牌，高鐵高鋅奶粉，石家莊三鹿集團股份有限公司出品。臨用時將烤干碾碎的細粉末泥土 與奶粉按1:2的比例混勻。1.3硯臺 直徑10.40 cm。1.4 搪瓷盤

9、 23 cmx17 cm。1.5鐵絲篩180目，孔徑0.087毫米，浙江省上虞市五四沙篩廠生產(chǎn)。1.6 玻璃燒杯 小燒杯(2.5 cmx3 cm)，中燒杯(5.5 cmx6 cm)。1.7網(wǎng)罩鋼絲網(wǎng)罩，塑料網(wǎng)罩。2方法2.1 釘螺飼養(yǎng)方法將陽性釘螺分為A、B、C、D四組，采用不同的光照、飼料、活動空間條件飼養(yǎng)，A組：用硯臺飼養(yǎng)， 將草紙鋪于硯臺內(nèi)，上層加混合飼料，放入陽性釘螺50只，用脫氯水保濕，加蓋(留有0.3 cm間隙)， 無燈光照射，溫度2428 C，每日揀出死亡釘螺，每34日換一次草紙。B組：用奶粉飼料飼養(yǎng)，方法同 A組。C組：用搪瓷盤飼養(yǎng)，搪瓷盤內(nèi)層墊海綿，上層鋪草紙，加混合飼料，放

10、入陽性釘螺50只，外加洗 凈的綠紗網(wǎng)罩，用脫氯水保濕，溫度2428 C,白天用日光燈持續(xù)照射，晚上熄燈，每34日換一次草紙， 每日揀出死亡釘螺。D組：用奶粉飼料飼養(yǎng)，方法同C組。2.2尾蝴釋放方法用脫氯水將釘螺洗4次，分15個實驗組，采用不同水質(zhì)、容器、網(wǎng)罩、天氣、溫度、光照條件釋放 尾蝴，解剖鏡下計數(shù)。四組釘螺釋放尾蝴的方法大致相同，其A、B、C、D組釋放尾蝴依次為2、1、3、 4次，見表1。表1釘螺釋放尾蝴的15組不同條件（略）3結(jié)果3.1釘螺飼養(yǎng)結(jié)果A組飼養(yǎng)釘螺存活時間為15 d，釋放尾蝴2次后100%死亡；B組釘螺存活時間為10 d，釋放尾蝴1 次；C組釘螺存活時間為45 d，釋放4次

11、尾蝴后100%死亡；D組釘螺存活時間為29 d，釋放尾蝴3次。 見表2。表2不同條件下釘螺存活時間與釋放尾蝴的次數(shù)及釘螺死亡率（略）3.2尾蝴釋放結(jié)果1、2、3組在5 h中無尾蝴釋放；6、13組60180 min每組平均釋放尾蝴825條；9、10、15組9 0180 min每組平均釋放尾蝴716條；7、8、11組30180 min每組平均釋放尾蝴1 783條；4、5、12 組60180 min每組平均釋放尾蝴1 733條；14組60180 min釋放尾蝴1 450條。見表3。表3不同 條件下釘螺釋放尾蝴的時間與尾蝴數(shù)量（略）4討論為盡可能的模擬自然環(huán)境，延長釘螺存活時間，本實驗觀察了光照、飼料

12、、活動空間三個因素對釘螺存 活時間的影響，表2結(jié)果顯示，用搪瓷盤加混合飼料飼養(yǎng)、外用綠紗網(wǎng)罩、光照射的釘螺存活時間為45 d，釋放尾蝴4次，且釘螺死亡率隨釋放尾蝴次數(shù)增加而增加；而用硯臺飼養(yǎng)、無光照射組及用奶粉飼料、 光照射組的釘螺存活時間分別為10 d、15 d、29 d，釋放尾蝴次依次為1、2、3次；表明在相同溫度下， 白日持續(xù)日光燈照射，去氯水保濕，活動空間相對較大，用泥土混合飼料飼養(yǎng)的釘螺活動狀態(tài)較好，生存時間比 其他實驗組長，釋放尾蝴次數(shù)多。這可能與光照、較大活動空間、空氣流通、混合飼料成分比奶粉更接近 自然環(huán)境中釘螺的食物等有關。而硯臺飼養(yǎng)組雖用混合飼料，但釘螺無光照、活動空間小，

13、空氣不流通，易 死亡；奶粉飼料組，蛋白量雖高，營養(yǎng)豐富，但易滋生細菌和寄生蟲導致釘螺死亡。本次實驗釘螺存活最長 時間為45 d，釋放尾蝴4次，與人工感染獲得的感染性釘螺,在常溫下可連續(xù)使用60 d 2相比較尚有 一定的差距，這可能與未按時更換草紙，未注意保濕等因素有關。尾蝴釋放的成功與否與多種因素有關3,4，本實驗觀察了不同水質(zhì)、容器、網(wǎng)罩、天氣、溫度、光 照條件等尾蝴釋放的情況，表3顯示，在脫氯水或涼開水、晴天、溫度2930 C的條件下，30 min即有 尾蝴釋放，180 min每組平均釋放尾蝴1 783條；同樣條件下，溫度為2526 C時60 min開始釋放尾蝴， 180 min每組平均釋放尾蝴1 733條；表明溫度高尾蝴釋放快、數(shù)量多，因溫度高，光線充足，釘螺活動 較活躍，有助于尾蝴釋放。而相同條件下的陰雨天90 min開始釋放尾蝴，至180 min每組平均釋放尾蝴7 16條，表明陰雨天不宜釋放尾蝴，這可能與陰雨天光線昏暗，影響釘螺活動有