食品中葉綠素含量的測(cè)定

1、食品中葉綠素含量的測(cè)定分光光度法一、實(shí)驗(yàn)原理、葉綠素含量的多少對(duì)植物源食品的色澤有重要的影響，例如綠茶的外形色澤就與葉綠 素含量有密切的關(guān)系。葉綠素在植物細(xì)胞中與蛋白質(zhì)結(jié)合成葉綠體，當(dāng)細(xì)胞死亡后，葉綠 體即被解離，隨之葉綠素游離出來(lái)。游離的葉綠色很不穩(wěn)定，對(duì)光、熱都較敏感，在酸性 條件下很快生成褐色的脫鎂葉綠素，加熱可使該反應(yīng)加速。但在弱堿條件下，葉綠素會(huì)被 水解為葉綠酸鹽、葉綠醇及甲醇等。葉綠酸鹽呈鮮綠色，這是一些果蔬產(chǎn)品加工時(shí)常用弱 堿處理的原因。高等植物體內(nèi)葉綠素有a、b兩種。兩種都易容于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。葉綠素a、 b分別對(duì)663nm和645nm波長(zhǎng)的光有最大吸收，且兩吸收曲線相

2、交于652nm處。因此，將 食品中葉綠素經(jīng)適當(dāng)提取，然后在645nm、652nm和663nm處測(cè)其吸光度，從而求得葉綠 素含量。二、試劑和器材豌豆尖、黃瓜。丙酮、石英砂。容量瓶100ml。滴管，玻璃棒，玻璃漏斗，研缽，可見(jiàn)分光光度計(jì)。三、實(shí)驗(yàn)步驟樣品處理均勻稱取豌豆尖或黃瓜樣品5g于研缽中，加入少許石英砂（0.5一1g）和冷丙酮，充 分研磨后倒入100ml容量瓶中，然后用丙酮分次洗滌研缽并倒入容量瓶中，最后用丙酮定 容至100ml。準(zhǔn)確稱取洗凈、擦十（去葉片中脈）的菠菜葉片5g于研缽中加少于CaCO研磨成勻漿，3用80%丙酮浸提。將上清液過(guò)濾（濾紙先用80%的丙酮濕潤(rùn)），用滴管吸取80%丙酮分

3、次把 研缽中葉綠素浸提液和殘?jiān)磧?，然后再用丙酮逐滴把濾紙上的葉綠素溶液洗凈，全部轉(zhuǎn) 移到具塞刻度試管。定容至15ml。測(cè)定充分搖勻后用濾紙過(guò)濾。取濾液分別在645nm、652nm和663nm處測(cè)其吸光度，以95 的丙酮做空白調(diào)零。結(jié)果計(jì)算按下式分別計(jì)算葉綠素a和葉綠素b的含量以及葉綠素總量（單位均為mg/g鮮重）：葉綠素 a 含量二（12.71X*2.59X%）XVX100m葉綠素 b 含量=（22.88XA645-4.67XA663）XVX100葉綠素含量二(2.9X%+8.4XL)XVX1O m葉綠素含量二A XVX100% X34.5式中A663, A652 , A645表示在所指定波長(zhǎng)下，葉綠素提取液的吸光度值；V葉綠素丙酮提取液的最終體積，mL；m所用果蔬鮮重，g。四、注意事項(xiàng)研磨時(shí)最好在較低的溫度條件下，充分研碎樣品組織，并以較快的速度完全測(cè)定。葉綠素在樣品各組織中的分布是不均已的，因此取樣時(shí)要相對(duì)一