自身抗體檢測

1、關(guān)于自身抗體的檢測第一張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗核抗體（ANA）的檢測與臨床應(yīng)用 抗核抗體的定義 傳統(tǒng)定義：針對細(xì)胞核成分抗原總稱。 廣義定義：針對細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對ANA的理解不再局限于核成份，而是指核質(zhì)和核蛋白的總稱。第二張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月ANA測定原理和方法：間接免疫熒光法（IIF):現(xiàn)多以Hep-2細(xì)胞（人喉癌上皮細(xì)胞）為底物（Ag)，其以核質(zhì)豐富而極大地提高了ANA檢測的陽性率和滴度。 是系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的標(biāo)準(zhǔn)篩選試驗。 我們實驗室采用歐蒙熒光檢測系統(tǒng)，將1:100作為血清起始稀釋度，所以如果是低滴度的1:100陽性，

2、只能視為一個臨界可疑值，臨床意義不大。ANA作為自身免疫性結(jié)締組織病的篩選試驗必須強(qiáng)調(diào)高滴度。第三張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月ANA的靶抗原分布 整個細(xì)胞，包括細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞分裂周期蛋白等。第四張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月ANA檢測的臨床意義 ANA可見于多種自身免疫性疾病，特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締組織疾病的診斷，病情判斷和療效觀察的指標(biāo)第五張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月 已證實ANA對很多自身免疫性疾病有診斷價值。ANA的靶抗原為細(xì)胞核內(nèi)的不同生化成份，包括核酸、細(xì)胞核蛋白和核糖體蛋白。在不同疾病中，特別是風(fēng)濕性疾病，其抗體譜有一定的特

3、意性。在炎癥性風(fēng)濕病中ANA陽性率在20%-100%之間，其中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中ANA陽性率最低，為20%-40%。所以，檢測ANA對于不同類型風(fēng)濕病意義重大。第六張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月 SLE活動性：占95%-100%， 非活動性：占80%-100%。 （2）藥物誘導(dǎo)的SLE：占100%。 （3）混合性結(jié)締組織疾?。赫?00%。 （4）其它風(fēng)濕性疾?。赫?0%-50% （5）進(jìn)行性系統(tǒng)硬化癥：占85%-95%。 （ 6）多肌炎和皮肌炎：占30%-50%。 （7）干燥綜合征：占70%-80%。 （8）慢性活動性肝炎：占30%-40%。 （9）潰瘍性結(jié)腸炎：占26%。 常見疾病第

4、七張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月 其它 還可見于： 非結(jié)締組織疾病中也可出現(xiàn)陽性；正常人（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽性，但滴度低，并且常表現(xiàn)為IgM型；高滴度ANA則高度提示自身免疫性疾病。第八張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月ANA（）的原因風(fēng)濕性疾病SLE多發(fā)性肌炎干燥綜合征硬皮病血管炎RA正常的健康人女性男性，出現(xiàn)率隨年齡而增加風(fēng)濕性疾病患者親屬？孕婦藥物誘導(dǎo)慢性肝臟疾病慢性肺部疾病慢性感染血液系統(tǒng)異常惡性腫瘤第九張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月SLE患者使用IIF法測定ANA陰性的一些解釋 技術(shù)方面臨床方面經(jīng)皮質(zhì)激素或免疫抑制劑治療。終末期腎病。隱蔽ANA：與循環(huán)

5、中免疫復(fù)合物結(jié)合，沉積于組織。由于大量蛋白尿而從腎臟丟失。第十張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月ANA的熒光染色型別細(xì)胞核：核均質(zhì)型（DNA、組蛋白和核小體等） 核顆粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和型周期蛋白） 核膜型（板層素、gp120等） 核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纖維蛋白等） 核漿點(diǎn)型（著絲點(diǎn)、核多點(diǎn)及核少點(diǎn)型）細(xì)胞漿：胞漿顆粒型（線粒體、Jo-1、核糖體等）胞漿纖維型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌動蛋白等分裂期細(xì)胞陽性：紡垂體、中間體、中心體等根據(jù)產(chǎn)生的熒光模型、靶抗原的分布部位分類如下：第十一張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月AN

6、A篩查的方法間接免疫熒光法（IIF）基質(zhì)組合為：HEP-2細(xì)胞 + 靈長類肝（猴） 第十二張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月核顆粒型：核粗顆粒型第十三張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗核抗體染色類型 核仁型（nucleolar）第十四張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月均質(zhì)性 （ homogeneous ）第十五張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月ANA的 熒光類型 ANA試驗的結(jié)果中一般會報告其分型，這些分型可能與某一特定的抗原反應(yīng)活性相關(guān)。分型 相關(guān)疾病 核仁型硬皮病著絲點(diǎn)型CREST綜合征周邊型SLE斑點(diǎn)型/彌散型混合性結(jié)締組織?。∕CTD）第十六張，PPT共五十頁

7、，創(chuàng)作于2022年6月抗雙鏈DNA抗體（ds-DNA）的檢測與臨床應(yīng)用 第十七張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月檢測：測定抗ds-DNA以血鞭毛蟲屬的綠螢短膜蟲為靶抗原基質(zhì)，可聯(lián)合使用HEp-2細(xì)胞及靈長類肝組織檢測。 自身抗原：位于DNA脫氧核糖磷酸框架上。第十八張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗dsDNA抗體熒光模式：綠蠅短膜蟲：動基體均質(zhì)的或邊緣亮度增強(qiáng)的熒光。Hep-2細(xì)胞：細(xì)胞核的均質(zhì)型熒光。第十九張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月臨床應(yīng)用 抗雙鏈DNA抗體（ds-DNA）是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性抗體，其陽性率因檢測方法而異，在40-90%。但抗ds-DNA陰性并

8、不能排除患有SLE的可能性?？筪s-DNA抗體具有預(yù)測價值，85%的出現(xiàn)抗ds-DNA抗體的健康人在五年內(nèi)發(fā)展為SLE。已證實抗ds-DNA抗體參與SLE的病理過程，在疾病形成過程中，抗ds-DNA和其抗體形成的免疫復(fù)合物沉積在皮下毛細(xì)血管、腎和其他器官內(nèi)，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，從而導(dǎo)致組織損傷。 第二十張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月 抗體水平與疾病活動度相關(guān)，隨著疾病活動的控制，抗ds-DNA抗體滴度可以下降或消失。 第二十一張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月 ANA譜3檢測及臨床應(yīng)用第二十二張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗RNP/Sm抗體熒光模式：Hep-2片：細(xì)胞核粗顆

9、粒，核仁陰性。肝組織切片：同上。熒光法不能區(qū)分抗RNP和抗體Sm。第二十三張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗RNP/Sm抗體自身抗原：抗原RNP和Sm屬于一組小核糖核蛋白（snRNP），由低分子量的RNA和多種蛋白質(zhì)組成，RNA中尿苷（U-RNA）含量較高。臨床意義：高滴度的抗RNP抗體為 混合結(jié)締組織病（MCTD）的特征，發(fā)生率為95100%。也可出現(xiàn)于SLE，但總是與抗Sm抗體同時出現(xiàn)。抗Sm抗體對SLE具有高度特異性，發(fā)生率為2040%。第二十四張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗SSASSB抗體熒光模式Hep-2片：細(xì)胞核呈細(xì)顆粒熒光，核仁不發(fā)光。肝組織片：細(xì)顆粒熒光。第

10、二十五張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗SSASSB抗體自身抗原：SSA抗原是一個小核糖核蛋白，由一個RNA分子和兩種不同的蛋白質(zhì)組成。蛋白質(zhì)的分子量為52KD和60KD?？贵w直接針對蛋白質(zhì)的抗原決定簇。SSB抗原是分子量為48kD的磷酸化蛋白。臨床意義；最常見于干燥綜合征（SS）,也見于SLE、原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC），偶見于慢活肝。抗SSA抗體在新生兒紅斑狼瘡的發(fā)生率幾乎為100%。第二十六張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月核仁陽性(Nucleolar)核仁熒光增強(qiáng)，核漿均質(zhì)型-Scl-70抗體。 核仁均質(zhì)型-PM-Scl及其他抗原抗體。核仁細(xì)顆粒型-原纖維蛋白抗體。核仁

11、粗顆粒型-RNA多聚酶-1抗體。第二十七張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗Scl-70抗體熒光模式：Hep-2片：細(xì)胞核幾乎均質(zhì)的熒光，核仁熒光加強(qiáng)而且也為均質(zhì)型，胞漿無熒光。肝組織片；細(xì)胞核顆?；蚓|(zhì)型熒光，常見到細(xì)胞核熒光。第二十八張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗Scl-70抗體自身抗原：為DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶1，分子量為100KD。在DNA雙鏈的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄中起作用。臨床意義：2570%的系統(tǒng)性硬化癥（PSS）彌漫型患者陽性，局限型硬皮病患者陰性。第二十九張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞漿陽性胞漿均質(zhì)型-抗核糖體抗體 細(xì)顆粒-抗Jo-1抗體 胞漿顆粒型 粗顆粒-A

12、MA抗體 滴狀點(diǎn)狀-溶酶體抗體 核周顆粒-高爾基體抗體胞漿纖維型 細(xì)纖維-波形蛋白抗體 環(huán)狀纖維-原肌球蛋白抗體 針狀纖維-肌動蛋白抗體第三十張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗核糖體抗體熒光模式：Hep-2：胞漿細(xì)顆粒到均質(zhì)狀、非常致密的熒光 。肝組織片：島狀熒光。臨床意義：SLE的特異性抗體，與精神癥狀有關(guān)。第三十一張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗Jo-1抗體熒光模式：Hep-2：胞漿顆粒到細(xì)塊狀熒光。肝組織片：胞漿中弱熒光。自身抗原：組氨酰tRNA合成酶。臨床意義：見于PM，發(fā)生率2535%。第三十二張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗線粒體抗體熒光模式：Hep-2

13、：胞漿內(nèi)粗的顆粒型熒光。大鼠腎組織切片：腎小管明顯熒光，腎小球熒光較弱。第三十三張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗線粒體抗體自身抗原：位于真核細(xì)胞線粒體膜的內(nèi)面。線粒體自身抗原為2-氧酸脫氫酶復(fù)合體的亞單位，為一組自身抗原，其中與PBC有關(guān)的包括：（1）丙酮酸脫氫酶復(fù)合體（PDC）（2）支鏈2-氧酸脫氫酶復(fù)合體（BCOADC）（3）a-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體（OGDC）第三十四張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗線粒體抗體臨床意義：AMA-M2對PBC具有診斷意義。AMA亞型與疾病的相關(guān)性：AMA-1：梅毒、干燥綜合征AMA-2：PBCAMA-3：藥物性紅斑狼瘡AMA-4：PBC與

14、AIH重疊AMA-5：SLE、自身免疫性溶血性貧血AMA-6：異煙肼引起的藥物性肝炎AMA-7：AIHAMA-8：AIH、閉塞性血栓性血管炎AMA -9：藥物性肝炎AMA-10：SLE第三十五張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月分裂期細(xì)胞陽性染色體陽性-染色體相關(guān)抗體，相關(guān)疾病？紡錘體纖維陽性-紡錘體纖維抗體，如燕麥細(xì)胞型支氣管肺癌中間體陽性-中間體抗體，相關(guān)疾??？細(xì)胞兩極陽性-中心?？贵w，相關(guān)疾??？著絲點(diǎn)陽性-抗著絲點(diǎn)抗體第三十六張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗著絲點(diǎn)抗體(ACA)熒光模式：Hep-2：細(xì)胞核細(xì)的、相同大小的顆粒熒光，分裂期顆粒熒光帶狀位于細(xì)胞中間。肝組織片：分

15、布于細(xì)胞核的1020個顆粒，熒光弱，易被忽略。第三十七張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗著絲點(diǎn)抗體自身抗原：著絲粒中的三種不同的蛋白質(zhì)：著絲點(diǎn)蛋白A、B、C，主要抗原為著絲點(diǎn)蛋白B。臨床意義：對進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥亞型（CREST綜合征）有診斷意義。陽性率8095%。還可見于PBC、SS等。第三十八張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月器官/組織特異性自身抗體抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）抗平滑肌抗體抗角蛋白抗體抗肝腎微粒體抗體抗肝細(xì)胞膜抗原抗體抗可溶性肝抗原抗體抗肝特異性蛋白抗體第三十九張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（胞漿型）cANCA熒光模式：猴肝：

16、肝血竇區(qū)粒細(xì)胞強(qiáng)熒光，而肝細(xì)胞陰性。甲醛固定的中性粒細(xì)胞：胞漿內(nèi)粗大到細(xì)的熒光顆粒。第四十張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（胞漿型）自身抗原：為絲氨酸蛋白酶-蛋白酶3（PR3）。該靶抗原為可溶性蛋白，存在于正常中性粒細(xì)胞的嗜苯胺藍(lán)顆粒中。臨床意義：cANCA可見于多種系統(tǒng)性血管炎。主要見于Wengeners肉芽腫，約占ANCA陽性率的8095%。cANCA被認(rèn)為是活動性Wengeners肉芽腫和微多動脈炎的特異和敏感的標(biāo)志性抗體。還見于Churg-Strauss綜合征。第四十一張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（核周型）pANCA熒光模式：

17、乙醇固定的中性粒細(xì)胞：細(xì)胞核周圍平滑的帶狀熒光，細(xì)胞核陰性。猴肝：肝血竇區(qū)粒細(xì)胞強(qiáng)熒光，而肝細(xì)胞陰性。第四十二張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（核周型）自身抗原：主要抗原為髓過氧化物酶（MPO），其他抗原還有白細(xì)胞彈性蛋白酶，組織蛋白酶G、溶菌酶及乳鐵蛋白等。臨床意義：見于多種系統(tǒng)性血管炎?？梢娪赪engeners肉芽腫、微多動脈炎、Churg-Strauss綜合征、炎性腸病、自免肝、系統(tǒng)性風(fēng)濕病（RA、SLE、SS、PM/DM）。第四十三張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗平滑肌抗體（SMA）熒光模式：大鼠胃組織，呈現(xiàn)肌膜、黏膜肌層和肌膜腺體間收縮纖維的明顯

18、細(xì)胞漿熒光 。大鼠腎組織，腎小管細(xì)胞內(nèi)原纖維、腎小球膜細(xì)胞及血管肌層的熒光。第四十四張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗平滑肌抗體（SMA）自身抗原：主要的靶抗原為肌動蛋白，肌動蛋白可以單體（G-肌動蛋白）或聚合體（F-肌動蛋白）形式存在于微絲中， F-肌動蛋白自身抗原與自免肝關(guān)系密切，而G-肌動蛋白自身抗原則與酒精性肝硬化有關(guān)。臨床意義：見于自身免疫性肝炎、PBC、酒精性肝硬化。第四十五張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗角蛋白抗體（AKA）熒光模式：大鼠食管，僅限于上皮角質(zhì)層的較強(qiáng)的線性分層的均質(zhì)熒光。第四十六張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月抗角蛋白抗體（AKA）自身抗原：絲聚蛋白（filaggrin）為AKA的靶抗原。臨床意義：見于RA，陽性率3659%，特異性9599